线粒体DNA ND4基因在绵羊群体中的多态性研究

为了分析线粒体DNA ND4基因在3个绵羊群体中的多态性,试验采用PCR扩增与基因测序的方法,以宁夏地方品种滩羊、小尾寒羊和蒙古羊为研究对象,利用已发表的羊ND4基因全序列设计特异性引物。结果表明:ND4基因在绵羊群体中具有多态性,扩增的目的基因序列长度为268 bp。     

野桑蚕线粒体ND5基因及其两端侧翼tRNA基因的克隆与序列分析

应用PCR技术,对中国山东青州野桑蚕mtDNA的ND5基因及其两端侧翼区域进行了克隆和序列分析。结果表明,在所测定的2．2kb左右的片段中,含有ND5基因的完整序列及Phe-tRNA(UUC)、Ser-tRNA(AGC)、Glu- tRNA(GAA)、His-tRNA(CAC)等4个tRNA基因,该片段的基因组结构与家蚕及其它地域来源野桑蚕的基因组结构基本一致,显示蚕类线粒体基因排列的保守性。ND5结构基因在不同家蚕及野桑蚕之间的比对分析表明,它们在核苷酸水平、氨基酸水平的同源性很高,相似性达96%以上。4个tRNA基因的碱基错配率较高,TψC环缺乏相对保守的T-ψ-C-Pu-A序列,各臂的碱基配对数、各环碱基数目变化较大。以ND5基因的核苷酸序列及氨基酸残基序列进行了家蚕及野桑蚕的分子进化分析,进一步证明家蚕起源于中国野桑蚕。     

宁夏滩羊血清转铁蛋白多态性与双羔性能的研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,对宁夏滩羊双羔羊实验组及对照组群体进行血清转铁蛋白 (Tf)多态位点的检测。共发现 6个表现型 (基因型 ) ,受 3个等显性基因控制 (TfA,TfB,TfC)。通过计算基因频率 ,得出宁夏滩羊双羔羔羊实验组与对照组Tf的基因频率有显著差异 ,其中含有TfC 基因的宁夏滩羊有较高的双羔性能     

滩羊血红蛋白多态性的变异研究

滩羊起源于我国的蒙古羊,是分布于西北宁夏、甘肃等地的特有裘皮用品种。自然条件下,滩羊自发双胎率不到3%,这对产后早期利用羔裘皮的滩羊品种是一个严重缺陷。为此,作者对目前已选择出的经产双羔母羊或公羊的子代试验群进行了血红蛋白多态性的分析,并以基础群单羔羊为对照,阐明血红蛋白基因在人为选择繁殖性状的条件下的变迁规律。一、材料与方法滩羊血样均采自甘肃景泰,其中双胞胎试验群82只,正常单胎羊27只,共计109只。血红蛋白的分型采用聚丙烯酰胺不连续缓冲体系电泳方法(门     

宁夏滩羊血清转铁蛋白多态性及双羔性能的研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳,对宁夏滩羊双羔羊实验组及对照组群体进行血清转铁蛋白（Ｔｆ）多态位点的检测。共发现６个表现型（基因型）,受３个等显性基因控制（Ｔｆ＾Ａ,Ｔｆ＾Ｂ,Ｔｆ＾Ｃ）,通过计算基因频率,得出宁夏滩羊双羔羔羊实验组与对照组Ｔｆ的基因频率有显著差异,其中含有Ｔｆ＾Ｃ基因的宁夏滩羊有较高的双羔性能。     

滩羊肌肉抑制素(MSTN)基因的多态性研究

为了分析宁夏滩羊肌肉抑制素(MSTN)基因的遗传多样性及其与生长性状的相关性,试验对滩羊群体的98个个体的MSTN基因进行PCR-RFLP分析。结果表明:MSTN基因引物1在所选群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态,多态信息含量为0.301 5,属于中度多态,2个等位基因分别为:A、a,3种基因型分别为:AA、Aa、aa,有效等位基因数为1.586 9,杂合度为0.369 8。MSTN基因引物2也处于Hardy-Weinberg平衡状态,多态信息含量为0.366 4,属于中度多态,2个等位基因分别为:A、B,3种基因型分别为:AA、AB、BB,有效等位基因数为1.934 7,杂合度为0.483 1。     

犬弓首蛔虫西宁株线粒体基因ND1和ND4序列分析

为了解犬弓首蛔虫在国内外的进化特点,从位于青藏高原的青海省西宁市城区流浪犬及宠物犬粪便中获取虫体,针对不确定性因素影响,采用降落PCR并作出相应调整,扩增出西宁株ND1和ND4基因片段,经DNAstar软件包比对序列同源性和进化关系分析发现,犬弓首蛔虫西宁株线粒体基因ND1和ND4大小分别为360、400 bp。与在线BLAST检索收集的国内外6条弓首属不同种基因序列进行序列同源性和进化关系比对发现:ND1基因片段与我国广东犬分离株的序列同源性最高,为99.5%;与日本犬分离株的同源性最低,为82.6%,甚至低于伊朗的猫分离株(88%)。进化关系上,ND1基因与广东珠处于进化树的同一分支上,ND4基因仅与广东犬分离株高度同源(99.5%),而与其他序列的同源性都很低。两个基因的进化树分析结果与序列同源性分析结果基本一致。不同种的序列在进化上不在同一分支,表明种属和地域差异可影响犬弓首蛔虫的进化特点。本研究证实,西宁株犬弓首蛔虫属于我国大陆流行的遗传分支,并非独立株。这为进一步针对青藏高原区域犬弓首蛔虫的分子遗传学和分子诊断学研究奠定了基础,同时为公共卫生防治提供了依据。     

番鸭细小病毒弱毒株VP2基因的序列分析

将番鸭细小病毒强毒株MDPV－Q经番鸭胚传代，获得致弱株MDPV－26，应用PCR技术扩增MDPV－26株的VP2基因片段，将扩增后的VP2基因重组到pMD 18-T质粒载体上，并对插入片段进行序列测定，将测定结果及由该结果推导的氨基酸序列分别与MDPV－Q株及国外已发表的MDPV相应序列进行同源性比较及分析，结果表明，MDPV－26与强毒株MDPV－Q的VP2基因序列及与国外分离株均具有很高的同源性。     

泡状带绦虫线粒体ND1基因的克隆及序列比对分析

针对带绦虫线粒体DNA的ND1基因设计引物扩增目的基因,使用基因分析软件Larsergene V7.1与GenBank已知带绦虫基因进行比对分析。实验成功扩增泡状带绦虫甘肃地区虫株X2线粒体基因组的ND1基因。分析结果显示,泡状带绦虫ND1基因种间不同虫株的基因同源性均在98.8%~99.5%之间,ND1基因推导的氨基酸序列与其他泡状带绦虫的蛋白同源性均在98.5%~99.2%之间,其中与四川地区的虫株同源性均达到了99.2%。推断泡状带绦虫线粒体DNA的ND1基因相对保守,与Taenia sp. AL-2012、Taenia regis和猪带绦虫差异较明显,最高只有91.3%,可以作为泡状带绦虫的初步鉴别基因。     

滩羊血清运铁蛋白（Tf）多态性的研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对甘肃景泰条山农场（１０６只）、白银平川区水泉乡（５８只）的滩羊群体的血清运铁蛋白多态位点进行检测，共发现了１８个表现型（基因型），受７个等显性等位基因控制（ＴｆＡ、ＴｆＢ、ＴｆＣ、ＴｆＤ、ＴｆＥ、ＴｆＧ、ＴｆＭ）。滩羊群体（品群间）Ｔｆ位点符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡假设，但是滩羊品群间在该位点上的遗传变异性较大，认为是由选育致使优势基因（ＴｆＣ、ＴｆＢ）在品群间遗传漂变程度不同所致，有待进一步强化选种选育。     

鹅bcl-2基因部分cDNA的克隆与序列分析

细胞凋亡是基因活动引起的级联反应的结果。现已发现大约有30多种分子专门参与细胞凋亡调控，其中bcl-2家族是一类主要的细胞内调控物质，由相应的bcl-2基因家族编码。自Tsujimoto等首先克隆人bcl-2基因以来，随后的一系列研究发现bcl-2蛋白的生理功能主要是阻遏细胞凋亡、延长细胞寿命，这些研究主要集中于人、     

基于线粒体ND4基因的鼢鼠系统进化关系

为探讨甘肃境内鼢鼠的系统进化关系,采用PCR技术对采集的4种鼢鼠线粒体DNA ND4序列进行扩增,经序列测定后用Clustal X1.83对比,获得了17条长度为425~438 bp不等的同源序列。通过DAN SP4.0比较分析,共检出160个多态信息位点,定义了15种单倍型,单倍型多样度为(Hd):0.980±0.024。采用MEGA4.0中的NJ法、MP法构建的分子进化树表明:高原鼢鼠两群体聚在一起后再与斯氏鼢鼠聚在一起,处于较进化的位置,后与秦岭鼢鼠聚在一起形成一进化枝,再与甘肃鼢鼠群体聚在一起,甘肃鼢鼠最先分化出来,且单独成一进化枝。     

猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析

根据猪链球菌2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为1496bP目的片段的引物，建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌2型参考株SS2—N株的检测结果为阳性，对马链球菌善疫亚种(C群)参考株ATCC35246、分离株SESZ—Y、SESZ—T、SESZ—C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏茵的检到结果均为阴性；用EcoR I内切酶进行酶切．获得了与预期结果一致的863bP和633bP的2个片段。经对SS2—1株的PCR产物进行测序及序列分析，表明其与1933株、P1／7株的核苷酸同源性分别为99．7％和100％。     

非洲狮朊蛋白基因的克隆与序列分析

根据已报道的哺乳动物朊蛋白基因序列设计了1对引物，采用PCR方法扩增了16只非洲狮的朊蛋白基因，序列分析结果表明，所得到的非洲狮朊蛋白基因片段长678bp、编码226个氨基酸的前体蛋白，其核苷酸序列的同源性为99．79％以上，发现了4个核苷酸多态性位点，无氨基酸变异。经与已报道的猫、貂、绵羊、牛、鼠和犬等哺乳动物的氨基酸序列进行比较，与猫（AF003087，96．7％）和绵羊（96．2％）的氨基酸同源性最高。     

猪瘟病毒辽宁株E2蛋白部分基因片段的序列分析

应用RT-PCR方法对辽宁地区8份猪瘟临床病料进行了E2蛋白部分基因片段扩增，其中有5份病料扩增产物经2%的琼脂糖凝胶电泳获得大小约为210bp的目的基因片段。经对目的基因片段回收纯化后进行核苷酸序列测定，并与国内外发表的18株猪瘟病毒株的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性比较表明，所分离的5株猪瘟病毒株核苷酸序列及氨基酸序列与C1W、C2W等8个毒株的同源性较高，而与国内的疫苗株和强毒株的同源性则较低，基因型差异比较明显，并不归属于同一个基因亚群。本研究通过对E2基因片段扩增以及相应的核苷酸序列的氨基酸序列分析，揭示了本地区猪瘟病毒的分子流行病学背景。     

滩羊体大品系生长激素基因的RFLPs的检测

研究运用了PCR－RFLPs方法，根据羊生长激素基因序列合成的特异性引物，对滩羊两个品系的基因组进行多态性分析。结果表明，其扩增产物的PVU Ⅱ酶切结果分别出现了两种基因型。并对两个品系滩羊生长激素基因检测结果进行了基因型和基因频率的初步分析，结果显示，BB基因型频率，滩羊普通品系显著高于体大品系（P＜0．05）；AB基因型频率，体大品系极显著的高于普通品系（P＜0．01）。而基因频率，两个品系之间无差异（P＞0．05）。     

羊传染性脓疱病毒内蒙古分离株B2L基因的克隆与序列分析

提取羊传染性脓疱病毒内蒙古分离株(OV/nm-05)总DNA,参考GeneBank中OrfVirus(StrainNZ2)株B2L基因序列设计1对引物,应用PCR技术特异性地扩增出该毒株的B2L基因的片段,并将其克隆到pMD18-T载体后进行测序,得到该病毒B2L基因序列。应用计算机软件将测定序列与参考毒株OV-SAOO、StrainNZ2、OV-IA82、N86.20a、N94.10m、No03.8Rt的B2L基因序列进行比较。结果表明,羊传染性脓疱病毒内蒙古分离株与StrainNZ2同源性最高,达97.9%,与N86.20a同源性最低,为84.2%。说明羊传染性脓疱病毒内蒙古分离株B2L基因与其他参考毒株之间差异不大。     

猪链球菌2型江苏分离株溶血素基因检测及序列分析

根据猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2）溶血素基因（sly）设计和合成了一对可扩增其完整阅读框的引物，对HA9801等6株猪链球菌2型江苏分离株，1株德国分离株SS2-D及猪链球菌C群参考株ATCC35246的核酸进行PCR扩增，结果显示HA9801等6株江苏分离株及德国株SS2呈阳性．ATCC35246呈阴性。HA9801株PCR产物纯化后测序．序列分析表明该DNA片段与猪链球菌2型1933株的sly基因同源性为99％。