草鱼miR-462通过靶向cx32.2、slc9a3.1和tbk1调控嗜水气单胞菌感染诱导的免疫应答

为探究miR-462在嗜水气单胞菌感染草鱼肾脏细胞(Ctenopharyngodon idella kideny,CIK)后的调控机制,实验利用荧光定量技术检测了CIK细胞感染嗜水气单胞菌后miR-462表达水平的变化;运用RNAhybrid软件预测miR-462的靶基因,利用双荧光素酶报告基因系统进行确定;此外还分析了miR-462对靶基因下游基因的调控作用。结果显示,在CIK细胞感染嗜水气单胞菌的过程中,miR-462的表达发生显著变化;cx32.2、slc9a3.1和tbk1的表达先降低后升高,与miR-462的表达模式呈负相关。双荧光素酶报告系统显示,miR-462可靶向cx32.2、slc9a3.1和tbk1的3′非编码区抑制其表达,过表达miR-462可以显著抑制cx32.2、slc9a3.1和tbk1的表达。转染miR-462模拟物后,下游slc4a4a、tnfrsf5、cxcl9和cxcl11基因的表达受到抑制。研究表明,miR-462参与调控嗜水气单胞菌感染后草鱼CIK细胞中的免疫应答。cx32.2、slc9a3.1和tbk1被鉴定为miR-462的靶基因。miR-4...     

草鱼线粒体细胞色素b基因的克隆与序列分析

用DNAExtractionKit提取草鱼(Ctenopharyngodonidella)肝脏的总DNA,合成特异引物,进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后克隆到pGEM Teasyvectorsystem的T载体上,筛选转化子,提取质粒,酶切鉴定。重组质粒序列测定的结果显示克隆了草鱼线粒体细胞色素b(cytb)基因1140个碱基及两侧部分序列共1254bp。用DNA分析软件VectorNTI6.0比较草鱼与GenBank中18种鱼类cytb的序列,显示草鱼与它们的cytb基因具有较高的同源性;根据草鱼与这18种鱼的cytb基因序列同源性所建立的进化树,与传统的分类地位基本吻合。     

中草药提取物黄连素对草鱼肝细胞氧化应激和细胞凋亡的影响

本研究运用细胞生物学研究方法,探讨中草药提取物黄连素对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞(L8824)活力、氧化应激和细胞凋亡的影响。用不同浓度黄连素(0μmol/L、5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)分别处理体外培养的草鱼肝细胞Oh、6 h、12 h和24 h,采用CCK-8法检测细胞活力。结果显示,黄连素浓度和时间对细胞活力有显著交互作用(P0.05),且黄连素浓度对其活力影响差异显著(P0.05),草鱼肝细胞活力随着黄连素的浓度增加先升高后降低(P0.05)。在此基础上,设置了黄连素梯度浓度(0μmol/L、5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)培养草鱼肝细胞12 h后,收集细胞,测定细胞谷丙转氨酶(GPT)及谷草转氨酶(GOT)活性,丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)含量、细胞凋亡水平和相关基因mRNA表达量。结果表明,与不添加黄连素组相比,当黄连素浓度为100μmol/L时,细胞GOT和GPT活性、ROS和MDA含量显著(P0.05)增加。当黄连素的浓度为25μmol/L和50μmol/L时,细胞凋亡水平显著(P0.05)升高;当黄连素的浓度增加到100μmol/L时,细胞凋亡水平显著(P0.05)降低。当黄连素的浓度为50μmol/L和100μmol/L时,细胞半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达量显著(P0.05)升高。综上所述,当黄连素浓度超过50μmol/L会抑制细胞的生长,引发氧化应激,影响细胞功能。因此,黄连素在草鱼肝细胞培养液中添加的适宜浓度为25～50μmol/L。     

超高压对草鱼肌肉超微结构与质构特性的影响

研究了等静超高压对草鱼肌肉超微结构与质构特性的影响，并与猪肌肉用对照。结果表明：１．加压处理的草鱼肌肉，其超微结构中出现较明显的变化，如肌原纤维中Ａ带和Ｉ带的细丝均被破坏，粗丝相互聚集，出现间隙，Ｚ线变粗，不连续，Ｈ带和Ｍ线消失等，但肌原纤维的外形仍保持完整。２加压处理的草鱼肌肉，其外观无显著变化，色泽稍白，略有汁液流出，但质构特性与处理前无明显差别。     

草鱼miR-23a在嗜水气单胞菌感染过程中的调控机制

为探索嗜水气单胞菌感染后草鱼肾脏细胞(Ctenopharyngodon idella kidney,CIK)中miR-23a的调控机制,实验通过实时荧光定量PCR(qPCR)测定了嗜水气单胞菌感染CIK细胞后miR-23a的表达量变化,使用RNAhybrid软件预测miR-23a的靶基因并用双萤光素酶报告基因检测系统进...     

蛭弧菌对草鱼免疫功能的影响

用添加蛭弧菌的饲料喂养草鱼,36 d后检查草鱼的各项免疫指标。结果表明:脾脏和胸腺的免疫器官指数逐渐升高,头肾的免疫器官指数起初升高然后下降,血液中的NBT阳性细胞数量逐渐增加,血清抗菌活性与溶菌酶活性逐渐升高;用温和气单胞菌疫苗免疫后,草鱼的免疫应答水平明显提高,免疫力增强。饲料中蛭弧菌的适宜的添加剂量为5g/kg。     

免疫多糖对草鱼免疫功能的影响

首次在草鱼饵料中添加不同剂量的免疫多糖,测定草鱼血清中溶菌活力及超氧化物岐化酶活力,结果表明免疫多糖对草鱼免疫系统有明显的激活作用。池塘应用试验也表明,免疫多糖可显著增强草鱼对病毒性出血病的抵抗能力,提高成活率和产量,具有广阔的生产应用前景。认为添加２￣３％免疫多糖可达到较好免疫效果。     

壳聚糖对草鱼非特异性免疫功能的影响

在草鱼饲料中添加不同剂量的壳聚糖,连续投喂42 d,研究壳聚糖对草鱼非特异性免疫功能的影响。结果显示,与对照组相比,壳聚糖可以提高血清溶菌酶活性、SOD活性、AKP活性、补体C3含量和血液白细胞吞噬活性,并能降低MDA含量。结果表明,饲料中添加5 g/kg的壳聚糖对草鱼的非特异性免疫功能有最好的促进作用。     

亚硝酸盐胁迫对草鱼肝脏泛素-蛋白酶体系统的影响

为了探究亚硝酸盐胁迫对草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肝脏泛素-蛋白酶体系统(ubiquitinproteasomesystem,UPS)的影响,将草鱼随机暴露于0、0.5、20mg/L的亚硝酸盐溶液中,在12、24、48、96h后采集肝脏样品,检测血液的生化指标,nrf2、hsp70和UPS相关基因的表达,泛素化蛋白的含量以及肝脏的组织学变化。结果显示:在亚硝酸盐胁迫12h,血清皮质醇含量呈现显著的剂量依赖式升高,且在24h和48h显著高于对照组。谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量在96h显著性降低。暴露12h时,20mg/L暴露组的nrf2、hsp70的表达量显著性高于对照组,ub、chip、psma2、psmc的表达水平和泛素化蛋白的含量在20mg/L亚硝酸盐胁迫24h均出现显著升高。在高浓度亚硝酸盐胁迫96h后,肝细胞出现明显的空泡化。研究表明,亚硝酸盐胁迫使草鱼产生了显著的应激反应,造成了肝组织损伤,使肝脏UPS活性上升。     

水霉病对草鱼血液生化指标和肌肉泛素-蛋白酶体系统的影响

本研究探讨了感染水霉病后草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的血液生化特性和肌肉泛素-蛋白酶体系统(UPS)活性变化.随机选取患病和健康草鱼各10尾,测定血清葡萄糖(GLU)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、胆固醇(CHO)及甘油三酯(TG)含量和乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转...     

镁对草鱼生长、形体、肝功能和糖代谢的影响

在以酪蛋白和明胶为蛋白源的纯化日粮(镁含量76.9 mg/kg)中添加不同水平的镁(0、150、300、600、1200和2400 mg/kg),研究镁对体重为(10.68±0.14)g的草鱼(Ctenopharyngodon idella)生长、形体、肝功能和糖代谢的影响,时间为10周.结果显示:日粮中适当添加镁显著...     

抗病草鱼苗种养殖技术

草鱼是我国主要的淡水养殖品种之一,在水产养殖业中占有重要地位.但由于长期的人工繁殖,草鱼种质严重衰退,品种质量降低,生长速度减慢,特别是养殖过程中病害严重.     

Dietary magnesium requirements of juvenile grass carp,Ctenopharyngodon idella

To determine dietary magnesium (Mg) requirements of juvenile grass carp, Ctenopharyngodon idella, magnesium sulphate was added to the basal diet at 0, 150, 300, 600, 1200, 2400 mg Mg kg⁻¹ diet. Each diet was fed to three replicate groups of juvenile grass carp (initial weight: 7.69 ± 0.13 g) in a closed, recirculating rearing system for 76 days. No mortality or nutritional deficiency signs were observed except the growth depression in fish fed the Mg‐deficient diet. Growth performance and activities of serum superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and lysozyme (LSZ) were highest (P <0.05) in fish fed the diet supplemented with 600 mg Mg kg⁻¹. The serum malondialdehyde (MDA) content was higher (P <0.05) in fish fed the diets supplemented with 0 and 150 mg Mg kg⁻¹ than that in fish fed the diets with ≥300 mg Mg kg⁻¹. Mg concentrations both in whole‐body and vertebrae increased with the increase in dietary Mg level up to 300 mg kg⁻¹, whereupon the response reached a plateau. Analysis by second‐order polynomial regression of weight gain, by broken‐line regression of vertebrae Mg concentration and by linear regression of whole‐body Mg retention of fish indicated that the adequate dietary Mg concentration for juvenile grass carp was 713.5, 627.7 and 469.8 mg kg⁻¹ diet, respectively.     

不同水平的蚯蚓和蚯蚓粪对草鱼消化能力的影响

本研究首次在基础饲料中添加不同浓度的蚯蚓(5%、7.5%、10%)和蚯蚓粪(2%、4%、6%),饲养平均体重(54.03±0.15)g的草鱼100d,研究蚯蚓和蚯蚓粪对草鱼消化能力的影响。结果表明:添加7.5%～10%蚯蚓和6%蚯蚓粪显著提高了草鱼肝胰脏和前肠中胃蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活性,以添加7.5%蚯蚓效果最好;采用石蜡切片技术观察各试验组草鱼前肠肠道内部结构,结果表明,添加7.5%～10%蚯蚓可显著提高草鱼肠道褶皱高度、宽度和基层厚度。综上所述,在提高草鱼消化能力方面,以饲料中添加7.5%蚯蚓的效果最好。     

草鱼幼鱼肌醇营养需要量的研究

以酪蛋白、明胶和鱼粉为蛋白源,配制含肌醇水平分别为0、50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg8、00 mg/kg、1 600 mg/kg的7组实验饲料。每组设3个重复,连续投喂体质量(4.78±0.18)g的草鱼(Ctenopharyngodon idella)幼鱼9周,通过测定生长指标、部分血清生化指标和全鱼营养成分来评价饲料肌醇添加水平对草鱼幼鱼的影响。结果表明,饲料中肌醇添加水平≥200 mg/kg使草鱼幼鱼增重率(WGR)、特定生长率、血清中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量与对照组相比有显著提高(P<0.05),而血清甘油三酯(TG)含量比对照组有显著降低(P<0.05);200 mg/kg和400 mg/kg肌醇添加组草鱼幼鱼饲料系数(FCR)比对照组有显著降低(P<0.05);饲料中添加肌醇对草鱼幼鱼存活率、血清中高密度脂蛋白胆固醇和全鱼营养成分无显著影响(P>0.05)。对WGR、FCR、TC、TG和LDL-C进行折线回归分析得出饲料中肌醇添加水平为166～214 mg/kg对草鱼幼鱼的生长比较适宜。     

投饲率对草鱼生长、体组成和能量收支的影响

为了建立草鱼(Ctenopharyngodon idella)的精准投喂模型管理系统,研究了不同投喂水平下草鱼的能量收支。实验在水温(27.5±2.0)℃条件下,选用初始体重(71.03±1.13)g的草鱼,共设5个不同投饲水平(饥饿、1%鱼体重(1%BW)、2%BW、4%BW和饱食),研究摄食水平对草鱼生长、鱼体组分和能量收支的影响。结果显示:随投喂水平的增加,草鱼鱼体水分减少,粗蛋白含量、粗脂肪含量和能量增加,灰分含量先减少后增加。特定生长率和热积温生长系数均随投喂水平的增加先增加再降低,在5%鱼体重时达到最大,且高于饱食投喂组。饵料转化率(FE)在投喂水平为体重2%组最高,且显著高于其他各组。干物质和能量表观消化率随投喂水平的增加而显著增加,蛋白质表观消化率在投喂水平为体重2%组显著高于其他组。生长能比例随投喂水平的增加而显著增加,而在体重2%组到饱食组间均无显著性差异;代谢能与生长能相反。在最大投喂水平下的能量收支方程为:100 C=21.72 F+4.25 U+45.85R+28.18 G或100 A=61.94R+38.06G。结果表明,5%鱼体重的投喂量为草鱼此阶段的最佳投喂水平。     

Chronic effects of NeemAzal on biochemical parameters of grass carp,Ctenopharyngodon idella

The aim of this study was to assess the chronic effects of a bio‐pesticide (NeemAzal) on some biochemical parameters of grass carp (Ctenopharyngodon idella) under laboratory conditions. At first, 96 h LC₅₀ of the pesticide was determined using probit analysis software and was found to be 0.73 mg L^?1 of the active ingredient (azadirachtin) of the pesticide. Fresh fish were then divided into three treatments and a control and were exposed to sublethal concentrations (10%, 20% and 30% of the 96 h LC₅₀ value) of the pesticide for a month. The biochemical examination of the blood showed a remarkable decrease in values of protein, albumin, AST, ALT, ALP and LDH (P < 0.05).     

Effects of dietary glutamine supplementation on growth performance,antioxidant status and intestinal function in juvenile grass carp (Ctenopharyngodon idella)

Glutamine (Gln) is a conditionally essential free amino acid that has been widely used in aquaculture. The present study showed that appropriate levels of dietary Gln could significantly improve growth performance and increase lipase and trypsin activity, mucosal thickness (MT) and the number of lymphocytes. The levels of glycine (Gly) in the 6 g/kg Gln group, threonine (Thr) in the 12 g/kg group and lysine (Lys) in the 6 and 9 g/kg group were increased significantly, while glutamate (Glu) and serine (Ser) concentrations decreased significantly with increasing dietary Gln levels from 3 to 12 g/kg. Moreover, the 12 g/kg dietary Gln level could improve the concentration of malondialdehyde (MDA), glutathione (GSH), glutathione peroxidase (GSH‐PX) and the total antioxidant capacity (T‐AOC). In addition, 3 g/kg Gln upregulated the gene expression of aminopeptidase N (APN), caudal‐related homeobox gene (CDX2), L‐type amino acid transporter 2 (LAT2), oligopeptide transporter 1 (PEPT1), specificity proteins 1 (SP1) and 3 (SP3), and peroxisome proliferator‐activated receptor α (PPAR‐α) but downregulated PPAR‐γ gene expression compared to that in the control group. Taken together, these findings suggest that Gln could improve the growth performance, antioxidant status and intestinal function of grass carp.     

投饲蚕豆对草鱼生长和肌肉品质的影响

分别以配合饲料、浸泡蚕豆、发芽蚕豆喂养体质量为(530±20)g的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)77 d,以考察投饲蚕豆对草鱼生长和肌肉品质的影响.结果表明,配合饲料组、浸泡蚕豆组和发芽蚕豆组草鱼的增重率分别为83.08%、55.01%和62.82%,饵料系数分别为2.03、2.96和2.70,投饲浸泡蚕豆或发芽蚕豆显著降低了草鱼增重率(P<0.05),增加了饲料系数(P<0.05):与配合饲料组相比,浸泡蚕豆组和发芽蚕豆组草鱼肌肉粗脂肪含量和肌肉失水率显著降低(P<0.05),胶原蛋白含量和肌纤维直径显著增加(P<0.05);肌肉游离氨基酸中呈味氨基酸的含量显著下降(P<0.05),而必需氨基酸含量显著增加(P<0.05);肌肉的硬度和黏性也有了显著提高(P<0.05).上述结果表明,饲喂蚕豆可显著改善草鱼肌肉品质,但同时降低了草鱼生长性能.[中国水产科学,2008,15(6):1 042-1 049]