猪体细胞核移植的影响因素

动物体细胞核移植技术对于优良种畜的复制、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培养以及人类疾病的治疗都具有重要的意义;近几年猪体细胞核移植研究取得了一定的进展,但总体看来核移植效率还很低,还需要对一些关键技术的深入研究和不断完善核移植操作程序,通过对猪体细胞核移植的关键技术及影响因素进行探讨与分析,以其加快猪体细胞核移植技术的研究,提高猪体细胞核移植的效率,进一步促进猪体细胞核移植技术在生产中应用。     

体细胞克隆猪的研究与展望

用体细胞核移植的方法生产的克隆猪诞生至今已近5年，虽然同胚胎细胞核移植相比，体细胞核移植技术难度大，成功率低，但近年来用体细胞核移植技术克隆猪有了更深入的研究，在体细胞核移植基本机理和关键技术上取得了一定的进展。综述了用核移植的方法生产体细胞克隆猪的技术关键和难点及应用情况，并对提高猪体细胞核移植效率的策略进行了分析。     

体细胞核移植胚胎的DNA甲基化状态

尽管多种体细胞核移植动物已经诞生,但核移植效率很低。目前普遍认为核移植动物胚胎基因组重编程(主要是甲基化)异常是核移植效率低的主要原因。本文主要论述了体细胞核移植胚胎的DNA甲基化状态。     

影响猪体细胞核移植效果的因素

克隆技术的研究已经取得了丰硕的成果,但猪体细胞核移植还受到众多因素的制约,克隆效率仍然较低,文章针对猪体细胞核移植的各项技术环节及影响因素进行探讨与分析,以期加快猪体细胞核移植技术的研究,提高猪体细胞核移植效率,进一步促进猪体细胞核移植技术的发展和运用。     

提高猪核移植效率的研究进展

哺乳动物体细胞核移植(克隆)经过多年的发展,获得了多种后代。猪的核移植研究意义重大,应用价值颇高,是当今生物技术的热点研究之一。尽管猪核移植已取得了很大进展,但移植效率依然很低。本文就目前已有的资料,综述了提高猪体细胞核移植效率的各项技术环节的研究进展。     

无透明带体细胞核移植研究进展

目前,体细胞核移植主要还是沿用Willadsen发明的显微操作的去核、注核、融合和激活来完成。由于其核移植效率较低,且对仪器设备和技术人员的要求较高,因此,简化并建立一套更适合于生产条件下的体细胞核移植程序,从而提高核移植效率一直是人们所不懈努力的。作者就无透明带核移植技术和单个胚胎培养系统作一介绍。     

猪胚胎细胞核移植研究进展

细胞核移植是目前倍受学术界和国际社会关注的焦点问题之一。已经获得牛、羊、猪、兔、鼠等核移植个体,而且成功地得到体细胞核移植绵羊和小鼠。尽管猪胚胎细胞核移植也有报道,但进展缓慢,现对猪细胞核移植的研究现状,以及与之有关的卵母细胞孤雌激活等问题作较系统的综述。     

表观遗传修饰影响哺乳动物体细胞核移植效率的研究进展

表观遗传修饰是一种不依赖于DNA序列变化的可逆、可遗传修饰，在哺乳动物胚胎发育的整个阶段均可发生，是影响哺乳动物体细胞核移植效率的主要因素之一。其中，DNA甲基化、组蛋白的动态修饰、X染色体失活、端粒与端粒酶活性变化作为常见的表观遗传修饰类型，任一修饰形式的异常都会影响基因的表达，引发体细胞重编程错误导致核移植效率降低。近年来，随着体细胞核移植技术研究的不断深入，表观遗传修饰影响体细胞核移植效率的关键作用机制日益明确。本文通过综述不同类型的表观遗传修饰影响哺乳动物体细胞核移植效率的研究进展，以期在表观遗传修饰层面为提高哺乳动物体细胞核移植效率提供新思路。     

哺乳动物细胞核移植(克隆)研究进展(上)

细胞核移植是一种有效的动物克隆技术。本文谨将哺乳动物胚胎核移植和体细胞核移植技术及其历史现状、价值意义、存在问题和应用前景作以综述和评述。     

猪胚胎细胞核移植研究进展

细胞核移植是目前倍受学术界和国际社会关注的焦点问题之一.已经获得牛、羊、猪、兔、鼠等核移植个体,而且成功地得到体细胞核移植绵羊和小鼠.尽管猪胚胎细胞核移植也有报道,但进展缓慢.现对猪细胞核移植的研究现状,以及与之有关的卵母细胞孤雌激活等问题作较系统的综述.     

猕猴核移植研究进展及前景

本文回顾了弥猴核移植相关简史，介绍了猕猴核移植的技术路线，对限制猕猴体细胞核移植研究的因素：核供体的筛选、卵母细胞的获得、超数排卵的影响因素、重构胚的激活及体外培养体系等进行了综述，并展望猕猴核移植的应用前景。     

供体细胞种类及性别对猪体细胞核移植效果的影响

本研究通过比较胎儿成纤维细胞、颗粒细胞、卵丘细胞和不同性别猪胎儿成纤维细胞的核移植效果,探讨供体细胞的种类及性别对猪体细胞核移植重构胚胎发育潜力的影响。结果表明:胎儿成纤维细胞的融合率(64.74%)高于颗粒细胞的融合率(51.05%)和卵丘细胞的融合率(56.89%),但3种细胞的卵裂率及囊胚率差异不显著(P>0.05);胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和卵丘细胞均可作为供体细胞用于构建猪体细胞核移植的重构胚。雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的融合率和分裂率与雌性胎儿成纤维细胞重构胚的融合率和分裂率相比差异不显著(P>0.05),但雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率显著低于雌性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率(P<0.05)。     

供体细胞低温冷藏处理对水牛体细胞核移植效果的影响

自1997年《自然》杂志报道克隆羊“多莉”以来,多种哺乳动物的体细胞核移植相继取得了成功。然而,体细胞核移植的技术环节繁多,各种各样的因素影响着核移植的效果,核移植的效率仍然很低(牛,<5%)[1]。核移植效率的提高有赖于各个技术环节的完善,供体细胞的准备与处理是核移植中的一个关键环节,它直接影响到核移植的效果。低温冷藏供体细胞可以减少染色体变异的可能性,亦有利于重构胚的发育。研究探讨了水牛胎儿成纤维细胞经低温冷藏处理后对核移植效果的影响。1材料与方法1.1试剂及培养液的配制研究所用的试剂除TCM-199购自G ibco公司外,其…     

反向核移植在水牛体细胞核移植中的初步研究

探讨了反向核移植技术应用在水牛体细胞核移植中的效果.结果显示,反向核移植可支持重构胚发育到囊胚,但其构建重构胚的效率极显著低于电融合法(54.0% vs 75.1%,P<0.01),囊胚发育率也显著低于电融合法(6.9% vs 15.9%,P<0.05).     

哺乳动物体细胞核移植方法研究进展

1997年克隆绵羊Dolly的诞生，揭开了哺乳动物体细胞核移植的序幕。多年来该技术已应用于多种哺乳动物，并成功获得体细胞克隆绵羊、小鼠、牛、山羊、猪、猫、免和骡等。同时，核移植技术本身也得到改进，从显微注射为主的传统方法逐步向手工操作方向发展，在克隆效率相当的情况下，后者实现了方法的简单化和生产力的提高，因而备受关注。当然这些新方法只是在个别物种中获得成功，其广泛应用还有待于进一步的研究和证实。     

不同核移植方法对牛体细胞核移植效率的影响

以牛皮肤成纤维细胞为供体细胞,比较了电融合法和细胞质内注射法2种核移植方法对体细胞核移植效率的影响.电融合法构建重组胚的效率显著低于细胞质内注射法(47.1%比89.0%,P＜0.01);重组胚培养36 h后的裂卵率和培养8 d时囊胚发育率无明显差异(76.4%比73.2%,11.2%比12.3%;P＞0.05),但相对于操作的卵母细胞总数而言,电融合法得到的总囊胚发育率显著低于细胞质内注射法(5.6%比10.9%,P＜0.01).结果表明,用细胞质内注射法进行体细胞核移植效率更高.将发育到桑椹胚和囊胚期的95枚核移植胚胎移植到33头受体牛,其中31头受体牛在移植后第2个情期前返情;1头受体牛在移植后75 d返情,但未进行直肠检查,无法确定妊娠情况;1头受体牛在移植后60 d未见返情,直肠检查确证妊娠,93 d受体牛流产.胚胎移植结果表明,用细胞质内注射法构建的体细胞核移植胚胎至少可以维持早期妊娠.     

分子育种手段之微卫星技术的应用与前景

在国内，1995年，西北农业大学窦忠英等用胚胎细胞核移植产生了6头猪。1996年，湖北农科院魏庆信等得到了胚胎细胞核移植猪。1997年赵浩斌等和2000年Li等分别获得猪胚细胞核移植后代1998年，东北农业大学的李光鹏等把猪胚胎的细胞核通过电融合移植到去核的体内和体外成熟卵母细胞中，出生了2头克隆猪。2003年，西北农林科技大学冯秀亮等得到了人体细胞和猪卵母细胞异种核移植囊胚。     

水牛体细胞连续核移植的效果

为探讨水牛体细胞连续核移植的效果,以水牛胎儿成纤维细胞为核供体,进行了水牛体细胞连续核移植。结果显示,连续核移植的融合率显著高于原代核移植(87.9%vs76.2%,P<0.05),但两者之间的分裂率和囊胚率没有显著差异(P>0.05);这说明水牛体细胞核移植胚胎可被再次克隆而不降低其发育能力,水牛体细胞连续核移植是可行的。     

提高猪核移植效率相关技术的研究进展

1989年,Prather〔1〕首次报道猪胚细胞核移植后代诞生。1997年,Wil mut等〔2〕利用体细胞作核供体克隆出“多莉”羊,在世界范围内掀起了体细胞克隆的热潮。由于猪器官的解剖结构和生理生化特性与人类的相近,其材料来源较为充足、方便,因此,猪有可能成为人类异种器官移植的首选供体动物,引起了科学家的极大兴趣。但是和牛相比,猪的核移植难度较大,大约只有1%的克隆胚胎移植后能完成妊娠(不包括没有获得后代的试验),这主要是因为影响猪核移植效率的因素太多。本文重点综述有关影响猪体细胞核移植几个重要环节的研究进展。1受体细胞及卵母细胞…     

小鼠体细胞核移植研究进展

体细胞核移植是目前生物技术领域研究的热点之一。小鼠作为一种广泛使用的实验动物模型,具有遗传背景清楚、繁殖周期短、饲养成本较低等优点,因此小鼠体细胞核移植具有较大的研究价值。作者简要回顾了小鼠体细胞核移植的发展史,并对体细胞核移植方法、影响核移植效率的因素,包括供核细胞的类型、供核细胞的体外处理、核质细胞周期协调、重构胚的激活、体外培养体系及核移植分子机制等进行了综述,并展望了小鼠体细胞核移植的应用前景。