果香味剂对奶牛乳腺上皮细胞培养液中乳成分含量及风味影响的研究

试验旨在研究果香味剂对奶牛乳腺上皮细胞培养液中乳成分含量及培养液风味的影响.试验选用自制的奶牛乳腺上皮细胞,设5个处理组,果香味剂的添加剂量分别为0、5、10、15和20 μg/mL.结果表明:①当培养基中果香味剂添加量为15 μg/mL时,乳腺上皮细胞培养液中总蛋白水平、甘油三酯及乳糖含量均达到最高,其中对脂肪含量影响显著(P＜0.05),而对蛋白和乳糖含量影响不显著(P＜0.05),之后呈下降趋势,说明果香味剂可能会诱导奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖分泌水平的升高;②运用PT/GC-MS分析乳腺培养液中的风味成分,与对照组相比,各试验组中除具有原有乳腺培养液的风味外,还有乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、丙酸异戊酯、丙酸戊酯、丁酸异丁酯、丁酸戊酯、丁酸乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯等物质成分,而这些物质成分正好是果香味剂中进入到乳腺培养液中的风味物质,且当添加剂量为15μg/mL时,各物质成分含量为最高(P＜0.05),之后呈下降趋势.果香味剂能显著影响奶牛乳腺上皮培养液中乳成分含量和风味.     

果香味剂对奶牛乳腺上皮细胞培养液中乳成分含量及风味影响的研究

试验旨在研究果香味剂对奶牛乳腺上皮细胞培养液中乳成分含量及培养液风味的影响。试验选用自制的奶牛乳腺上皮细胞,试验设5个处理组,果香味剂的添加剂量分别为0、5、10、15和20μg/ml。结果表明:①当培养基中果香味剂添加量为15μg/ml时,乳腺上皮细胞培养液中总蛋白水平、甘油三酯及乳糖含量均达到最高,其中对脂肪含量影响显著(P<0.05),而对蛋白和乳糖含量影响不显著(P>0.05),之后呈下降趋势,说明果香味剂可能会诱导奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖分泌水平的升高;②运用PT/GC-MS分析乳腺培养液中的风味成分,与对照组相比,各试验组中除具有原有乳腺培养液的风味外,还有乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、丙酸异戊酯、丙酸戊酯、丁酸异丁酯、丁酸戊酯、丁酸乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯等物质成分,而这些物质成分正好是果香味剂中进入到乳腺培养液中的风味物质,且当添加剂量为15μg/ml时,各物质成分含量为最高(P<0.05),之后呈下降趋势。果香味剂能显著影响奶牛乳腺上皮培养液中乳成分含量和风味。     

果香味剂对奶牛乳腺上皮细胞培养液中乳成分含量及风味影响的研究

试验旨在研究果香味剂对奶牛乳腺上皮细胞培养液中乳成分含量及培养液风味的影响。试验选用自制的奶牛乳腺上皮细胞,设5个处理组,果香味剂的添加剂量分别为0、5、10、15和20μg/mL。结果表明:①当培养基中果香味剂添加量为15μg/mL时,乳腺上皮细胞培养液中总蛋白水平、甘油三酯及乳糖含量均达到最高,其中对脂肪含量影响显著(P<0.05),而对蛋白和乳糖含量影响不显著(P>0.05),之后呈下降趋势,说明果香味剂可能会诱导奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖分泌水平的升高;②运用PT/GC-MS分析乳腺培养液中的风味成分,与对照组相比,各试验组中除具有原有乳腺培养液的风味外,还有乙酸异丁酯、乙酸异戊酯、丙酸异戊酯、丙酸戊酯、丁酸异丁酯、丁酸戊酯、丁酸乙酯、邻苯二甲酸二异丁酯等物质成分,而这些物质成分正好是果香味剂中进入到乳腺培养液中的风味物质,且当添加剂量为15μg/mL时,各物质成分含量为最高(P<0.05),之后呈下降趋势。果香味剂能显著影响奶牛乳腺上皮培养液中乳成分含量和风味。     

奶牛乳腺中乳成分前体物对乳成分合成影响的研究进展

乳成分的含量及组成直接影响牛乳的品质.本文主要综述了乳腺中乳成分前体物对乳糖、乳蛋白质和乳脂等合成的影响,为进一步提高乳脂和乳蛋白质产量,改善牛乳品质提供参考.     

乙酸对奶牛乳腺上皮细胞乳脂肪酸从头合成相关基因表达量的影响

本试验旨在研究不同浓度的乙酸对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)乳脂肪酸从头合成相关基因表达量的影响。将传至第3代的BMECs悬液接种于细胞培养板上,每孔加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养液,于37℃5%CO2培养箱培养48 h。再将培养48 h的奶牛BMECs培养孔随机分配到6组中,每组6个重复,每个重复1个孔。在各组中分别加入含不同浓度乙酸的DMEM/F12培养液,培养液中的FBS用1 g/L无脂肪酸的牛血清白蛋白(BSA)代替,并使反应体系中乙酸的最终浓度分别为0(对照)、4、6、8、10、12 mmol/L。置于37℃5%CO2培养箱继续培养48 h。结果表明:BMECs内甘油三酯的含量随着乙酸浓度的增加呈极显著的一元线性增加(P=0.000),以8~12 mmol/L的乙酸组促进作用较好。脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-coenzyme A carboxylaseα,ACACA)mRNA的相对表达量随着乙酸添加浓度的增加呈极显著的一次线性增加(P=0.000),以8~12 mmol/L乙酸组的表达量较高。硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-CoA desaturase,SCD)mRNA相对表达量随着乙酸浓度的增加,变化趋势不显著(P0.05),但从数值上看,所有试验组均高于对照组,以4 mmol/L乙酸组最高。综合得出,乙酸对奶牛BMECs内乳脂肪的合成及其乳脂肪合成相关基因FASN和ACACA mRNA的表达量有极显著的提高效果,其中以培养液中8~12 mmol/L的乙酸效果较好。     

无乳链球菌体外感染奶牛乳腺上皮细胞

用分离到的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,GBS)及标准菌株侵袭原代奶牛乳腺上皮细胞建立体外感染细胞模型,并进行细胞凋亡检测。同时,采用qRT-PCR方法检测细胞受到侵袭后白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等细胞炎性因子mRNA的转录水平。结果显示,标准菌株组(WL组)与空白组相比凋亡率差异极显著(P<0.01),分离菌株组(FL组)与空白组相比凋亡率差异极显著(P<0.01),分离菌株组与其标准菌株组的凋亡率差异也极显著(P<0.01)。qRT-PCR结果分析显示,标准株组TNF-α、IL-6及IL-8 mRNA转录水平与对照组相比,差异极显著(P<0.01);而分离菌株组TNF-αmRNA转录水平与对照组相比差异显著(P<0.05),IL-6及IL-8 mRNA转录水平差异不显著(P>0.05)。结果表明,与标准菌株相比,无乳链球菌分离株对奶牛乳腺上皮细胞侵袭和损伤能力较低,乳腺细胞的凋亡率也较低,当奶牛乳腺上皮细胞受到细菌侵袭的时候,细胞中IL-6、IL-8及TNF-α等炎性因子mRNA的转录水平都显著性提高,但在相同浓度下GBS标准株诱导细胞炎性因子的表达量显著高于GBS分离株。本试验结果为以后预防和控制GBS引起的隐性乳房炎提供试验依据。     

干酪乳杆菌抗LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤作用及机制

为探究干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)炎性损伤的缓解作用及机制,将10⁴,10⁵,10⁶ CFU/mL的干酪乳杆菌与奶牛乳腺上皮细胞共培养3 h后加入1 mg/L的LPS继续培养8 h,使用荧光定量PCR和Western blot方法检测相关炎性因子mRNA和通路关键蛋白的表达量。结果显示,与对照组相比,10⁵,10⁶ CFU/mL的干酪乳杆菌预处理组显著降低了奶牛乳腺上皮细胞IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达(P<0.05),同时,10⁴,10⁵,10⁶ CFU/mL的干酪乳杆菌预处理显著降低了IкBα和p65蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结果表明,干酪乳杆菌可以通过抑制奶牛乳腺上皮细胞NF-κB信号通路及相关炎性因子基因的表达,从而发挥抗炎作用。     

无乳链球菌通过线粒体途径诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡的研究

为了探讨无乳链球菌对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响及其相关机制,试验以奶牛乳腺组织为材料分离培养奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, BMECs)并进行鉴定,然后用无乳链球菌感染BMECs(试验组),并以未感染的BMECs作为对照组,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测无乳链球菌对BMECs凋亡的影响,以JC-1染色法检测BMECs线粒体膜电位的变化,并通过Western-blot分析测定BMECs凋亡途径中Bax、Bcl-2、细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达水平。结果表明：所分离的BMECs呈多角形或椭圆形,角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)在细胞内呈阳性表达,符合BMECs的特征。与对照组相比,试验组的细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),线粒体膜电位降低,BMECs中Bcl-2蛋白相对表达量极显著下降(P<0.01),同时Bax、Caspase-3和Cyt C蛋白相对表达量极显著增加(P<0.01)。说明无乳链球菌可诱导BM...     

精氨酸对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白合成的影响

本研究以奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）为模型,研究添加不同浓度精氨酸对BMECs酪蛋白合成的影响。采用单因素完全随机试验设计,以0.70 mmol/L精氨酸（DMEM培养基中精氨酸的浓度）为对照组,试验组精氨酸的浓度分别为1.40、2.80、5.60和11.20 mmol/L,每组6个重复。采用MTT法检测BMECs的增殖率;利用酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒检测BMECs中精氨酸代谢关键酶活性;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测BMECs中精氨酸代谢关键酶、酪蛋白以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路基因的相对表达量;运用蛋白质免疫印迹（Western Blot）技术检测酪蛋白表达量及mTOR信号通路蛋白磷酸化水平。结果表明：1）当精氨酸的浓度为2.80 mmol/L时,BMECs的增殖率显著高于对照组和其他精氨酸组（P<0.05）;当精氨酸的浓度为2.80和5.60 mmol/L时,BMECs中鸟氨酸脱羧酶活性显著高于对照组和其他精氨酸组（P<0.05）。2) 2.80 mmol/L精氨酸组BMECs中αs1-酪蛋白、к-酪蛋白、蛋白激酶B、m...     

bta-miR-29d-3p对奶牛乳腺上皮细胞乳脂代谢相关基因表达及甘油三酯含量的影响

为探索bta-miR-29d-3p与奶牛乳腺上皮细胞乳脂代谢相关基因表达及甘油三酯含量之间的调控关系,试验设计并合成bta-miR-29d-3p的模拟物和抑制物,通过瞬时转染技术将bta-miR-29d-3p的模拟物和抑制物转染到奶牛乳腺上皮细胞中,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测bta-miR-29d-3p抑制或过表达后奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因表达水平的变化,细胞内甘油三酯含量用试剂盒检测。结果显示：bta-miR-29d-3p过表达后甘油三酯合成相关基因二酰甘油酰基转移酶（DGAT1）、线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶（GPAM）,脂肪酸合成相关基因乙酰辅酶A羧化酶A(ACACA)、脂肪酸合成酶（FASN）,转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBF1)的表达量显著降低（P <0.01）,肝X受体Α（LXRA）表达量显著上升（P <0.01）。同时过表达bta-miR-29d-3p奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯含量显著降低（P <0.05）。干扰bta-miR-29d-3p显著增加了DGAT1、ACACA、FASN、GPAM、转录因子过氧化物酶体...     

The Effects of Mixed Fruit Flavor Meal on Epithelial Cell Growth and Cycle as well as Milk Composition in Dairy Cow Mammary Epithelial Cell

IntroductionMilk favored by consumers because milk contain a large number of nutrients,such as protein,amino acids,fat,lactose,a variety of vitamins,immune activity factors,essential minerals and trace elements and so on,and the proportion of these nutrients is very reasonable and easy to digest and absorb,so milk is nearly a perfect food.But at present the flavor milk is produced by adding fruit flavor meal or fruit juice into the milk,which results in fewer varieties of flavor milk products and much more problems of quality and safety.So the fruit-flavored milk production by adding the fruit flavor meal into the diet of dairy cow can ensure the produced raw fruit-flavored milk is high quality and security.     

The Effects of Mixed Fruit Flavor Meal on Epithelial Cell Growth and Cycle as well as Milk Composition in Dairy Cow Mammary Epithelial Cell

Introduction Milk favored by consumers because milk contain a large number of nutrients,such as protein,amino acids,fat,lactose,a variety of vitamins,immune activity factors,essential minerals and trace elements and so on,and the proportion of these nutrients is very reasonable and easy to digest and absorb,so milk is nearly a perfect food.     

The Effects of Mixed Fruit Flavor Meal on Epithelial Cell Growth and Cycle as well as Milk Composition in Dairy Cow Mammary Epithelial Cell

Introduction Milk favored by consumers because milk contain a large number of nutrients,such as protein,amino acids,fat,lactose,a variety of vitamins,immune activity factors,essential minerals and trace elements and so on,and the proportion of these nutrients is very reasonable and easy to digest and absorb,so milk is nearly a perfect food.     

水牛乳汁中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定

试验旨在从水牛（Bubalus bubalis）乳汁中分离培养水牛乳腺上皮细胞并对其进行鉴定,建立经济、便捷的水牛乳腺上皮细胞分离方法。通过无菌收集高产奶水牛泌乳后期乳汁,将其与PBS按2：1（V/V）混匀离心;去除上层乳脂,取带少量上清的沉淀,与PBS按上述比例混匀再次离心;将脂肪层去除干净,取沉淀上方1 mL上清及沉淀分别接种于细胞培养皿。通过细胞形态、免疫荧光、生长曲线测定、细胞接种活力、RT-PCR等对分离的细胞进行鉴定。结果表明,试验成功从水牛乳汁的上清和沉淀中分离获得了水牛乳腺上皮细胞,上清部分细胞和杂质较少;而沉淀部分则细胞和杂质较多。细胞呈典型鹅卵石样,无成纤维细胞,细胞活力好,多处于分裂期。当细胞增殖高度融合时,出现乳头状结构和分层生长现象。经免疫荧光鉴定,分离获得的水牛乳腺上皮细胞表达上皮细胞标志蛋白--细胞角蛋白18。水牛乳腺上皮细胞的生长曲线呈S型,符合一般生物学规律。细胞接种存活率的测定结果显示,细胞活力好、贴壁能力强。经RT-PCR检测,水牛乳腺上皮细胞表达乳蛋白及乳脂合成相关基因。从乳汁中分离水牛乳腺上皮细胞并对其进行鉴定,成功建立了水牛乳汁分离乳腺上皮细胞的方法,为研究水牛泌乳机制、改善乳品质、提高产奶量奠定基础。     

Isolation,Culture and Identification of Buffalo Mammary Epithelial Cells from Milk

This study was aimed to set up a simple, economic and pure method to culture and identify buffalo mammary epithelial cell in vitro, which were collected from the fresh milk. The milk was collected in the late lactation period of the high yield milk buffalo, then it was mixed with the PBS in the ratio of 2:1 and centrifugated. A few suspernatants and the pellets were resuspended with the PBS when the milk fat were decanted, then recntrifuged. The final pellets and 1 mL of suspernatants were seeded in petri dish without fat, respectively. The isolated cells were mammary epithelial cells which were identified by cell morphology, immunofluorescence, growth curve, cell viability and RT-PCR. The buffalo mammary epithelial cells were successfully isolated from both the pellets and supernatants. The cells and impurities were less in the supernatants than that in the pellets. The cells were cobblestone-like without fibroblasts and most in cell division. In the post-confluent culture, mammary epithelial cells formed dome structures and layer-separated growth. The cells expressed cytokeratin 18 was identified by immunofluorescence which was the marker of mammary cells. The cell growth curve and cell survival rate were measured. The results showed that the buffalo mammary epithelial cells were activity and easy to attach. The mammary epithelial cells were expressed of milk protein and milk fat related genes detected by RT-PCR. The buffalo mammary epithelial cell line were successfully isolated and identified from fresh milk, which estabilished foundation for the study of the mechanism of lactation, the amelioration of the quality of milk and the improvement of milk yield of buffalo.     

黑白花奶牛乳腺上皮细胞冻存方法的研究

试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异（P〈0.01）,处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异（P〉0.05）,处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异（P〈0.01）;处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异（P〈0.01）。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。     

奶牛原代乳腺上皮细胞的培养及β酪蛋白mRNA的表达

本试验旨在建立原代乳腺上皮细胞系的体外培养方法,并进行β酪蛋白mRNA的表达验证。取新鲜泌乳期的乳腺组织,采用组织块法培养纯化原代乳腺上皮细胞,利用显微镜观察细胞形态并进行细胞生长计数,采用实时荧光定量PCR技术检测β酪蛋白mRNA表达。结果显示,纯化培养的原代乳腺上皮细胞集聚成岛屿状生长,具有典型的铺路石和鹅卵石形状,细胞生长曲线呈"S"形,符合一般细胞的生长规律,并成功表达β酪蛋白mRNA。综上所述,本研究采用组织块法成功培养出具有正常生理功能的奶牛原代乳腺上皮细胞,为后续的乳腺上皮细胞功能研究提供了良好的细胞试验模型。