异硫氰酸胍法提取梅花鹿鹿茸组织总RNA

采集6只2岁梅花鹿鹿茸样品,应用异硫氰酸胍法提取其总RNA,建立了鹿茸总RNA适宜提取条件。实验最终提取RNA的紫外吸收值为:A260/A280=1.73~1.86,A260/A230=2.16~2.53,经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、18s、5s 3条带,其亮度满足未降解RNA的特征,且无明显DNA污染。     

银杏总RNA的提取

进行了CTAB和异硫氰酸胍两种不同的提取方法提取银杏RNA的研究。结果表明,两种方法均可以从银杏叶片中提取RNA,其中CTAB法可以较好地去除酚类物质和多糖对RNA的影响,提取的RNA纯度较高,而异硫氰酸胍提取RNA产率低,同时存在不同程度的降解。     

甘蔗种质总RNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗种质RNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。本实验是以成熟甘蔗的叶片为材料,通过对前人的植物RNA提取方法进行改良,寻求最佳的甘蔗总RNA提取方法。通过改良最后得到的异硫氰酸胍法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点。用该法提取得到的甘蔗总RNA经琼脂糖凝胶电泳可获得28S、18S和5S rRNA3条带,并且28S rRNA的亮度大于18S rRNA的亮度。表明该方法提取的RNA完整性好,纯度高。另外对所得部分甘蔗种质的总RNA进行RT-PCR检测,可特异扩增出目标片段,说明用异硫氰酸胍法Ⅲ提取的甘蔗种质总RNA,可以直接用于后续的分子生物学试验。     

两种快速提取甘薯块根总RNA的方法

甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取。本试验采用异硫氰酸胍"一步法"和CTAB法提取甘薯块根总RNA,并对改进前后两种方法提取的总RNA产量和纯度进行了比较。结果表明,提取RNA过程中用氯仿代替液氮研磨样品同样可获得完整性和纯度较好的总RNA;CTAB法提取RNA质量较好,纯度较高,排除了甘薯块根中多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取出高质量的甘薯总RNA。     

百脉根总RNA提取方法的优化

[目的]为百脉根的分子生物学研究提供基础资料。[方法]以百脉根叶片为材料,比较异硫氰酸胍法、SDS-LiCl法及SDS-LiCl改进法提取总RNA的效果并探讨活性炭、抗坏血酸对RNA提取质量的影响。[结果]异硫氰酸胍法所提取的百脉根总RNA降解严重,盐类去除不充分,该方法不适合百脉根总RNA的提取;SDS-LiCl法提取的总RNA有一定程度降解,加入液体抗坏血酸会降低百脉根RNA的提取质量;SDS-LiCl改进法提取的总RNA较为完整,有较高的纯度,在研磨过程中加入固体抗坏血酸能够提高百脉根总RNA的提取质量。活性炭对百脉根总RNA的提取无影响。[结论]研磨时加入固体抗坏血酸的SDS-LiCl改进法能提取出高质量的百脉根总RNA。     

2种大豆总RNA提取方法的改良

对大豆总RNA的提取方法T rizo l法和异硫氰酸胍法进行了改良,比较了改良前后2种方法的提取效果。结果表明,2种改良方法提取的大豆总RNA质量较高、完整性较好,完全可以满足后续研究要求,RNA产率均超过220μg/g。改良T rizo l法适用于大豆根、茎、叶及生长点总RNA的提取,而改良异硫氰酸胍法适用于大豆根、茎及生长点总RNA的提取。     

花生幼胚RNA提取方法研究

花生(ArachishypogaeaL.)幼胚体积很小,不易剥取且富含多糖、酚类等化合物,因此以花生幼胚为材料提取RNA时会遇到很大困难.采用改进的Trizol法和异硫氰酸胍一步法成功提取出了高质量的花生幼胚总RNA,后续实验证明具有良好的逆转录活性.介绍了花生幼胚快速剥取的方法.     

适合于高通量测序的槟榔总RNA的提取方法

为了获得能满足高通量测序要求的槟榔叶片总RNA,采用通用植物总RNA提取试剂盒和异硫氰酸胍-苯酚法提取槟榔叶片的总RNA。结果表明:异硫氰酸胍-苯酚法提取的总RNA完整性好、纯度高,通用植物总RNA提取试剂盒不能从槟榔叶片中提取完整的总RNA;70℃,10 min的热处理会导致槟榔总RNA的降解,苯酚/氯仿抽提能得到高纯度、完整性好的总RNA;总RNA质量浓度达到979 mg·L-1,OD260/OD280=1.98,OD260/OD230=2.31,能满足转录组高通量测序的要求。     

观赏海棠不同组织中RNA的几种提取方法

以观赏海棠不同组织为试材,用常用的CTAB法、异硫氰酸胍法及Tris-硼酸法,比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明:CTAB法提取RNA成本低、RNA质量较高;异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高;而Tris-硼酸法则较不适合于果实类多酚多糖组织的RNA提取。     

3种飞机草总RNA提取方法比较研究

以飞机草幼嫩叶片为材料,分别采用Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB法对叶片总RNA进行提取。结果表明,异硫氰酸胍法和Trizol法提取的飞机草叶片总RNA质量较高,以异硫氰酸胍法提取的RNA浓度和纯度更优,蛋白质污染少,可用于基因克隆;CTAB法不能提取到RNA或提取的RNA含量极低,电泳检测不到任何条带,不适于提取飞机草总RNA。因此,异硫氰酸胍法和Trizol法可用于研究飞机草入侵适应性的分子机理。     

矮牵牛组培苗3种RNA提取方法的比较

为了提取高质量的矮牵牛RNA,采用改良的异硫氰酸胍方法和CTAB法、SDS法分别提取矮牵牛组培苗RNA。结果表明：与传统的CTAB和SDS方法相比,改进的异硫氰酸胍方法提取的总RNA电泳条带完整、纯度较高,是较为理想的提取矮牵牛总RNA的方法。     

利用改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA

利用胃蛋白酶消化小鼠肌肉,获取了旋毛虫种本地毛形线虫(T.nativa)的肌幼虫虫体。利用TRIZOL混合虫体直接提取肌幼虫的总RNA,通过分光光度计Ultrospec 3000检测结果,以及用RT-PCR方法扩增出了编码T.na- tiva 49 kDa的ES蛋白结构基因,后续试验结果显示改进的一步法提取本地毛形线虫总RNA效果很理想。     

两种铁皮石斛总RNA提取方法的比较研究

 铁皮石斛是我国重点保护药材,因其富含多糖及次生代谢物,用普通的方法难以从叶中提取到能满足构建全长cDNA文库等分子生物学实验对高质量RNA需要的总RNA。分别通过对异硫氰酸胍法和CTAB法进行改良。异硫氰酸胍法：往裂解液中加入PVP,通过PVP去除多酚;用56℃热水水浴5min加速组织细胞裂解;抽提时间由原来15 min缩短为5min;根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加裂解液。CTAB法：根据材料多糖多酚的多寡情况适当增加CTAB裂解液;用LiCl对RNA进行选择性过夜沉淀;灵活处理,适当增大LiCl浓度。结果表明用改良后的2种方法均可提取到总RNA,经对比发现,改良CTAB法提取效果更好,可重复性强,抽取到的RNA更适合于后续的分子生物学实验。     

广藿香不同组织总RNA提取方法的筛选与优化

分别采用Trizol法、改良Trizol法、CTAB法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法等5种方法提取广藿香叶、茎、根及愈伤组织的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱检测其提取效果。结果表明,Trizol法适用于广藿香叶片总RNA的提取,改良CTAB法适用于广藿香茎和愈伤组织总RNA的提取,而广藿香根总RNA的提取宜用改良Trizol法。RT-PCR检测结果表明,广藿香各组织的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学试验。     

一步法同时提取棉铃虫中肠RNA和蛋白质

利用一步法从单个棉铃虫(Helicoverpa armigera(Hübner))的中肠样品中分离出RNA和蛋白质。进一步试验证明提取的RNA纯度和完整性较高,能应用于RT-PCR;所获得的棉铃虫中肠蛋白的SDS-PAGE电泳显示,蛋白条带清晰且能应用于Western blot分析。该方法具有简便和快速的特点,并能够实现核酸和蛋白水平上的相互验证。     

脏器RNA提取方法的改进

以猪脏器为材料,应用TRIpure Reagent总RNA提取试剂盒提取脏器总RNA,发现直接按照试剂盒说明书操作提取的RNA效果不理想。通过反复试验,改进了提取过程中的部分操作步骤。结果表明:改进后与改进前相比,提取RNA的纯度和得率在0.01水平上有差异;改进后提取的RNA经RT-PCR扩增猪"βactin基因,电泳结果显示,扩增条带清晰、特异,说明提取的RNA完全满足后续分子生物学试验的要求。     

狗尾草总RNA提取方法研究

RNA是由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成的长链状分子。RNA与DNA、蛋白质、多糖等物质普遍存在于细胞中。常用的总RNA提取的方法是Trizol法,该方法可同时分离一个样品的RNA、DNA和蛋白质,但由于植物材料中多糖多酚的存在及操作环境的影响,RNA产量偏低。QIAGEN RNeasy Plant Mini试剂盒法(胍盐法)是通过裂解液(不含苯酚、氯仿)裂解细胞,使RNA和DNA同时通过柱子,再将其分离的总RNA提取法。该方法既克服了Trizol在多糖多酚存在的情况下不能成功分离RNA与DNA的弊端,又保证在提取过程中不使用苯酚氯仿等有毒试剂,并且能在一定程度上提高RNA的产量和纯度。     

改良一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质的研究

[目的]利用改良的一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质。[方法]采用CTAB试剂对Biozol抽提法进行改良,用一步法分别对玉米（Zea maysL.）、大豆（Glycine maxL.）、苜蓿（Medicago sativaL.）和黄瓜（Cucumis sativusL.）4种作物根的RNA、DNA和蛋白质进行共提取,并对其HO-1和CDPK1基因及HO-1蛋白进行鉴定。[结果]经紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳分析证明获得的RNA和DNA样品纯度较高;HO-1基因和CDPK1基因的RT-PCR结果呈阳性;所提取的蛋白质也可用于Western blot分析;整个提取过程只需3h。[结论]该方法实用性较强,具有广泛的应用价值。     

改良一步法提取植物RNA·DNA和蛋白质的研究

[目的]利用改良的一步法提取植物RNA、DNA和蛋白质。[方法]采用CTAB试剂对Biozol抽提法进行改良,用一步法分别对玉米（Zea mays L.）、大豆（Glycine max L.）、苜蓿（Medicago sativa L.）和黄瓜（Cucumis sativus L.）4种作物根的RNA、DNA和蛋白质进行共提取,并对其HO-1和CDPK1基因及HO-1蛋白质进行鉴定。[结果]经紫外分光光度计测定和琼脂糖凝胶电泳分析证明获得的RNA和DNA样品纯度较高;HO-1和CDPK1基因的RT-PCR结果呈阳性;所提取的蛋白质也可用于Western blot分析;整个提取过程只需3h。[结论]该方法实用性较强,具有广泛的应用价值。     

一种提取菊科植物各组织中总RNA的改良方法

以入侵菊科植物微甘菊(Mikaania micrantha Kunth)、紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)、豚草(Ambrosia artemisiifolia Linn)、飞机草(Eupatorium odoratum Linn)、假苍耳(Iva xanthifolia Nutt)的根、茎、叶及花蕾为试验材料,采用改良的盐酸胍法提取总RNA,通过紫外分光光度计测定RNA样品的得率和纯度,用琼脂糖电泳检测RNA样品的质量和完整性。结果表明:采用新方法提取的总RNA,其OD260nm/OD280nm值为1.8~2.0,且RNA得率较高;琼脂糖电泳出现18S和28S 2条清晰的rRNA条带,而且28S rRNA条带的亮度约为18S的2倍。采用改良的盐酸胍法可以从不同植物组织中提取到高质量、完整性好总RNA。