越橘果实总RNA提取方法比较研究

越橘成熟果实富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢物质,严重影响果实总RNA的提取.试验以越橘成熟果实的果肉和果皮为试材,采用适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒及试剂和改良的CTAB法提取越橘果肉和果皮中总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测.结果表明,改良的CTAB法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高.通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆等分子生物学试验的要求.     

山葡萄总RNA提取方法的比较

以山葡萄成熟果皮及叶片为材料,对改良CTAB法,SDS法和Trizol法3种不同的总RNA提取方法进行了比较。结果表明,SDS法和Trizol法提取的总RNA均有拖带现象,有部分降解,Trizol法提取的总RNA中有DNA的污染;改良CTAB法提取山葡萄叶片和果皮的总RNA带形完整,28SrRNA和18SrRNA的荧光亮度接近2：1,A260／280值为1．8～2．0,该方法提取的总RNA纯度和提取量最高,提取出的总RNA可用于进行RT-PCR、构建cDNA文库等分子生物学的研究。     

番木瓜果皮和种子总RNA提取方法的研究

CTAB法、SDS法和改良的热硼酸法所提取的番木瓜果皮总RNA产量分别是107.8、90.4和70.4μg/g;种子总RNA产量分别是164.0、204.8和111.2μg/g。用TSSE或TE溶液溶解CTAB法中的LiCl过夜沉淀,得到的总RNA完整性好、纯度高,种子总RNA的产量明显提高,达到300μg/g以上。用CTAB法提取的果皮和种子总RNA已成功用于cDNA合成、文库构建和抑制消减杂交(SSH)等后续分子生物学试验。     

一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法

笔者采用改良CTAB法从富含多酚的无核荔枝幼胚中提取总RNA,并用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对所提RNA质量进行检测,旨在为多糖、多酚含量较高的植物材料RNA的提取提供一种有效方法。1材料与方法1.1材料以海南无核荔枝花后20d的幼果为试材,剥离果皮,小心取出幼胚,液     

红肉桃果实总RNA提取方法的研究

以红肉桃果实为材料,采用Unizol总RNA提取试剂盒、CTAB法、冷酚法和改良SDS法4种方法分别提取果皮和果肉中总RNA,以期获得提取红肉桃果肉中总RNA的最适方法。比较,发现改良后的SDS法更适合于红肉桃果实总RNA的提取。此方法所得RNA完整性好,纯度和浓度均较高,可用于RT-PCR分析研究及后续实验。     

三种梨果皮总RNA提取方法的比较研究

以西洋梨品种‘早红考密斯’、‘香红蜜’和白梨品种‘华酥’成熟果实为试材,采用Plantol总RNA提取试剂盒法、改良CTAB法和SDS法提取果皮中总RNA,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR检测所提取总RNA样品的质量.结果表明,Plantol试剂盒法和改良CTAB法提取的RNA,经RT-PCR后得到的条带清晰,与目的片段大小一致,可以满足基因表达分析等试验的要求;而SDS法所提取的部分RNA,RT-PCR扩增不到目的片段,难以达到进一步试验的要求.     

顽拗植物龙眼果皮中总RNA的提取方法研究

【研究目的】为建立适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA提取的方法;【方法】采用TRIzoL法、Tris-硼酸法和改良CTAB法提取龙眼果皮的总RNA。并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质;【结果】改良CTAB法、Tris-硼酸法所提取的RNA经电泳检测。28SrRNA和18SrRNA条带清晰。RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致。说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRJZOL法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带;【结论】改良CTAB法和Tris-硼酸法适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA的提取。     

改良热硼酸法提取青香蕉果肉总RNA的条件优化

针对青香蕉果肉组织富含多糖、多酚类物质的特点,采用改良热硼酸法提取青香蕉果肉组织中的总RNA,探讨提取缓冲液pH值、离子浓度、CaCl_2浓度、处理温度、处理时间、LiCl沉淀时间对总RNA提取质量的影响,并用异丙醇简化LiCl沉淀总RNA过程。结果表明,获得了1种快速提取青香蕉果肉组织中总RNA的方法,经逆转录PCR(RT-PCR)验证,该方法适用于黄香蕉果肉、黄香蕉果皮、香蕉花、青香蕉果肉、青香蕉果皮中总RNA的提取。     

应用光谱分析无损测定茄子果皮花青素含量方法

测量茄子果皮花青素含量的传统方法步骤繁琐、测量周期较长、试验耗材多,本课题组提出一种通过光谱扫描茄子果皮测定其花青素含量的新方法。以河北农业大学蔬菜育种试验基地的茄子果实作为试验材料,利用光谱仪扫描果皮获取其光谱反射率,使用pH示差法测量花青素含量,使用主成分分析,自适应重加权算法和连续投影算法对光谱数据进行降维处理,建立基于光谱反射率的茄子果皮花青素含量的预测模型(R2=0.999),因此,利用光谱技术测定茄子果皮花青素含量具有可行性,为利用光谱快速测定茄子果皮花青提供理论基础。     

延边黄牛体细胞克隆囊胚中总基因组RNA的提取

以延边黄牛体细胞克隆囊胚为试验材料,采用试剂盒GMS12106的使用方法提取试材的总基因组RNA,在琼脂糖凝胶电泳检测后,得到最适的囊胚数为5个。通过试验发现,生殖细胞的特殊生理结构限制了RNA提取的效果。为提取完整、纯度高的RNA,采用链蛋白酶对囊胚的透明带进行了消化处理,最终得出链蛋白酶处理的最适时间为10min,提取的RNA质量好,可为后续试验奠定基础。     

天竺桂果皮色素提取方法研究

对天竺桂果皮红色素进行提取,对常见的几种影响因素的几个水平进行比较分析,通过正交试验得出天竺桂果皮红色素的最佳提取工艺,其结果为以冰乙酸为提取剂,试验材料与浸提剂比为1:10,35℃恒温,pH 3,4 h提取时间,提取率可达68.8%.     

不同西瓜品种果实性状与裂果的相关性

以裂果性不同的20个西瓜品种为试验材料,测定成熟期果实的单果质量、果皮硬度、果皮切裂长度、中心部位可溶性固形物含量、边缘部位可溶性固形物含量以及果形指数等相关数据,分析成熟期果实性状与裂果的相关性。结果表明,西瓜果皮切裂长度与裂果性存在明显相关性,易裂品种的果皮切裂长度均大于抗裂品种。单果质量、中心部位可溶性固形物含量、边缘部位可溶性固形物含量、果形指数与裂果性不存在显著相关性。果皮硬度与果皮切裂长度的相关系数为-0.474,表明果皮硬度与裂果性呈现显著负相关关系,即果皮硬度越大,抗裂果性越强。     

脏器RNA提取方法的改进

以猪脏器为材料,应用TRIpure Reagent总RNA提取试剂盒提取脏器总RNA,发现直接按照试剂盒说明书操作提取的RNA效果不理想。通过反复试验,改进了提取过程中的部分操作步骤。结果表明:改进后与改进前相比,提取RNA的纯度和得率在0.01水平上有差异;改进后提取的RNA经RT-PCR扩增猪"βactin基因,电泳结果显示,扩增条带清晰、特异,说明提取的RNA完全满足后续分子生物学试验的要求。     

柑橘类果树组织总RNA优异且通用的提取方法

分别以柚类、柠檬、甜橙、枳壳和宽皮橘的果皮、果肉、枝皮、老叶、嫩叶、树根、子房、花瓣,尤其是以果胶含量丰富的岩溪晚芦果皮等作试材,将两次LiCl沉淀法加以改良,加入适量CaCl2,找到一种柑橘类果树总RNA优异且通用的提取方法,所得RNA的质量和产量均较高。经差减文库构建、连接、电转化,成功获得了目标片段。     

不同方法对石榴果皮总RNA提取效果的影响

比较了3种RNA提取方法提取石榴果皮RNA的效果。结果表明:改良CTAB法提取的总RNAOD值在1.91左右,得率为48μg/g;Trizol法提取总RNAOD值在1.15左右,得率为86μg/g;试剂盒提取得到的总RNAOD值在1.24左右,得率为124μg/g。分别反转录为cDNA,根据不同植物花青素合成关键酶基因保守序列,设计简并引物进行RT-PCR,其中只有改良CTAB法得到的cDNA有扩增条带。表明改良CTAB法比较适合富含多糖和酚类物质石榴果皮总RNA的提取。     

不同时间套育果袋对苹果梨果实品质的影响

以7年生苹果梨为试验材料,研究不同时间套育果袋对其果实外观品质和内在品质的影响。结果表明,合理的套袋时间可显著改善苹果梨果实外观品质,降低果皮叶绿素含量,改善花青苷显色背景,提高果实着色指数、果实果皮光洁度,减小果皮厚度、果点大小;但套袋时间不同,对果实品质影响不同。研究基本确定了辽宁省阜新地区苹果梨较为合理的套袋时间为7月4日（盛花后55 d）左右。     

西瓜果皮蜡粉相关基因定位研究

试验选用果皮无蜡粉西瓜品系‘W1-1’为母本,果皮有蜡粉西瓜品系‘1061’为父本,配制杂交组合获得F2代群体,分析果皮蜡粉性状遗传规律发现,西瓜果皮蜡粉性状受一对显性基因控制。利用群体分离分析(BSA)法筛选得到西瓜果皮有蜡粉基因位于第8号染色体,以双亲材料基因组重测序为基础,在定位区域开发30对引物,其中19对引物具有多态性。利用19对引物标记F2代群体,构建分子遗传图谱,该图谱全长230.29 cM,定位到一个距离为2.78 cM控制西瓜果皮蜡粉的位点,两个与该位点紧密连锁的CAPS标记,分别为w8-6149和w8-0794。利用100份西瓜自然群体材料分析2个与西瓜果皮有蜡粉紧密连锁标记有效性,分子数据与田间数据吻合率分别为79.0%和72.0%。     

不同方法提取新疆红肉苹果RNA差异研究

使用生工柱式植物总RNA抽提纯化试剂盒、Trnzol法以及改良CTAB 3种方法,提取红肉苹果克孜阿尔玛的果肉、果皮、花瓣、叶片中的总RNA,并对比这3种方法提取RNA的产量、质量以及完整性。结果表明,由Trnzol方法提取所获得的RNA纯度较低,有降解现象,且有DNA、蛋白质的污染,果肉和果皮RNA的产量也并不理想;而用改良CTAB法和生工试剂盒法提取的RNA较少降解,所得28 S rRNA和18 S rRNA条带较为清晰,花瓣和叶片的OD_(260/280)均在2以上,生工试剂盒法提取的RNA产量高,OD_(260/280)和OD_(260/230)比值均在1.8～2.5,条带的完整性好。3种方法比较而言,改良CTAB法和Tr Nzol法提取的RNA条带的清晰度、产量及质量都低于生工试剂盒法。     

木耳总RNA提取方法研究

为了获得木耳总RNA理想的提取方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以木耳菌丝为试验材料,采用了CTAB法、RNA prep pure Plant Kit试剂盒和 Trizol法3种方法提取木耳总RNA。结果表明3种方法均能从木耳菌丝中提取分离到总RNA,然而Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为191,RNA 产率为68264 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于 RT PCR等分子生物学试验研究。     

甜玉米食味品质相关性分析

以170份甜玉米自交系组成的自然群体为试验材料,测定其可溶性糖含量(葡萄糖含量、果糖含量及蔗糖含量)和籽粒柔嫩度(果皮硬度、果皮脆性、果肉硬度及果肉紧实度),同时对这7个性状指标进行相关性分析。结果表明:7个食味品质性状指标均为正态分布。葡萄糖含量和果糖含量、果皮硬度和果肉硬度之间为极强相关,果皮硬度和果皮脆性之间为强相关,蔗糖含量和果肉紧实度之间为中度相关,均为极显著正相关。果皮硬度和果肉紧实度之间为中度相关,蔗糖含量与果皮脆性、果肉硬度和果肉紧实度之间为弱相关,均为极显著负相关。