熊蜂微孢子虫感染熊蜂(Bombus spp.)试验

从引进蜂种(B.terrestris)和国内蜂种(B.lucorum)分别提取微孢子虫,在两寄主工蜂的幼虫,蛹和成蜂间进行交叉感染.结果显示两种来源的微孢子虫能相互感染其寄主蜂,且幼虫、蛹和成蜂两两间无显著差异;用国内蜂种(Blucorum)提取的微孢子虫感染四种熊蜂(B.lucorum,B.pyrosoma,B.ignitus,B.terrestris),结果显示出同一种寄主提取的微孢子虫感染不同蜂种,对原寄主的感染率高于异源寄主,但死亡率低于异源寄主,不同来源的微孢子虫对不同寄主熊蜂感染程度的不同,是不同基因型的寄主群和不同基因型的寄生群间相互影响的结果.     

熊蜂（Bombus lucorum）微孢子虫的初步研究

在国内捕获野生的熊蜂(B.lucorum)蜂王,调查发现其微孢子虫的感染率为27.61%,死亡率为0.61%。在饲养过程中,感染严重的蜂王大多未能产卵就死亡,有的即使产了卵不久也便死亡;中度感染的蜂王大多推迟产卵;轻度感染的蜂王同健康蜂王一样能正常产卵。从熊蜂(B.lu-corum)蜂王提取的微孢子虫在光学显微镜下观察,呈卵圆状,带有蓝色折光;在扫描电镜下观察,孢子的表面较光滑,未发现任何特征型结构。     

应用PCR技术快速鉴定熊蜂微孢子虫Nosema bombi

基于熊蜂微孢子虫16SrRNA基因序列设计了1对引物,并对引物退火温度和引物浓度等反应条件进行了优化。对所建立方法的敏感性、特异性和稳定性进行了验证后,使用该方法对40份样品进行检测。结果显示,本研究建立了一种能够特异、敏感鉴定熊蜂微孢子虫的PCR方法,对熊蜂微孢子虫总DNA的敏感性达到2.86×10-5 mg/L,可以将熊蜂微孢子虫从西方蜜蜂微孢子虫和东方蜜蜂微孢子等其他可以感染熊蜂的寄生虫中区分出来,具有良好的特异性和稳定性。通过对40份熊蜂样品进行检测结果表明,整个检测过程可以在4h内完成并具有良好的适用性。本研究建立的熊蜂微孢子虫检测方法可用于进境熊蜂的检验检疫。     

东方蜜蜂微孢子虫对密林熊蜂的致病机理

【研究目的】东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)是一种细胞内专性寄生的微孢子虫,广泛寄生于东方蜜蜂(Apis cerana)和西方蜜蜂(Apis mellifera),不仅是危害蜜蜂的主要病原物之一,而且近年来国内外报道发现N.ceranae也感染重要经济昆虫-熊蜂(Bombus Latreille);【方法】采用传统生物学和电镜超微结构观察结合qPCR定量分析对N.ceranae在密林熊蜂上的致病机理进行了探讨;【结果】感染初期工蜂除取食减少和行动迟缓外无明显外观染病特征,感染后期工蜂萎靡,衰弱,飞翔无力。解剖后镜检发现中肠仅存少量孢子,但充满大量的细菌;熊蜂肠道组织切片发现N.ceranae主要经肠绒毛侵染中肠上皮细胞,核膨大并变形、线粒体体积变小甚至解体,内质网紊乱,但孢子只侵染寄主细胞质而不侵入细胞核,最终因线粒体解体,细胞破裂而导致死亡;qPCR定量分析得出在接种的3⁴ d中肠和脂肪体中N.ceranae的感染量达到最高值,其他组织则基本未检测到;【结论】根据研究并结合前人工作,认为N.ceranae侵染熊蜂的病理过程是从中肠细胞的病理变化开始的,最后导致寄主细胞的碎裂、死亡,这一过程逐渐扩大至寄主的整个组织、器官,以致其功能丧失,严重的会导致熊蜂死亡。     

环介导等温扩增法检测熊蜂中的微孢子虫

为快速检测进口熊蜂中的微孢子虫,建立了环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplifi cation,LAMP)。针对熊蜂微孢子虫核糖体保守基因设计LAMP引物,以熊蜂微孢子虫DNA、家蚕微孢子虫DNA、蝗虫微孢子虫DNA、兔脑炎微孢子虫DNA作为LAMP反应的模板,分别采用浊度法和显色法验证LAMP引物的特异性;并将含微孢子虫基因的质粒模板10倍梯度稀释,考察方法的敏感性。结果表明,LAMP法能有效、特异地检测出熊蜂寄生微孢子虫DNA,灵敏度比PCR法高10倍。该方法简单、快速、敏感,可应用于熊蜂寄生微孢子虫的便捷检测中。     

蝗虫微孢子虫病田间流行的初步调查

在内蒙古乌盟达茂旗蝗害常发区，应用蝗虫微孢子虫（NosemalocustaeCanning）后，主要优势种蝗虫，亚洲小车蝗（Oedaleusasiaticus）、宽须蚁蝗（Myrmeleotettixpalpalis）、白边痂蝗（Bryodemaluctuosum）和皱膝蝗（Angaracrisspp．）等均可感染该病。应用后的当年，混合种群的感染率曲线是双峰型，后一峰值较高，表明该病原物可以自然流行于该地区内的蝗虫种群中。1993年分别对1988年、1989年、1991年和1992年应用蝗虫微孢子虫饵剂处理区进行定点取样调查结果表明：在应用蝗虫微抱子虫治蝗多年后的草场上，蝗虫种群中仍有蝗虫微孢子虫病存在，在有些年份可形成一定规模的流行。主要优势种蝗虫的平均感染率在应用后的不同年份中有差异。田间小区试验结果表明蝗虫微孢子虫的应用剂量也是影响蝗虫微孢子虫病流行曲线变动的重要因素。     

微孢子虫的侵染机制

蜂微孢子虫病是蜜蜂的检疫性病害,该病严重阻碍了蜂群的生产繁殖.微孢子虫孢子侵入寄主细胞有3种方式:发芽侵染、自发感染、细胞内吞感染,又以发芽侵染为主.微孢子虫孢子表面蛋白与孢子发芽密切有关,找到孢子表面发芽关键蛋白将有助于揭示微孢子虫的侵染机制.     

两株微孢子虫:家蚕微孢子虫和新西兰草金龟微孢子虫的DNA探讨

从各自的微孢子虫基因组获得了两个能分别与家蚕微孢子虫和新西兰草金郇微孢子虫特异杂交的DNA片段,并对其进行了测序。尚没有发现该DNA片段能与供试的其它4个微孢子虫分别来自[蜜蜂微孢子虫、小菜粉蝶的变形孢虫(Vairimorpha sp.),新西兰草金龟和掘孔蛴螬(Wiseana sp.)的两株微孢子虫(Vavraia oncoperae)]的基因组DNA杂交。家蚕微孢子虫探针不与新西兰草金龟微孢子虫基因组DNA或与该微孢子虫原始昆虫寄主家蚕的DNA杂交。同样,新西兰草金龟微孢子虫探针不与家蚕秃孢子虫基因组或与新西兰草金龟的DNA杂交。两个DNA片段富含AT(分别占总碱基的59和79％),G+C/A+T的比率为0.70和0.25,表示其为散布于整个基因组中的重复序列。     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)与其它微孢子虫及真菌的进化关系

综述了应用分子生物学和生物信息学对家蚕微孢子虫系统发育的研究进展,以及多菌灵等苯并咪唑类杀真菌剂对微孢子虫和真菌的抑制作用,认为研究家蚕微孢子虫和真菌的进化关系对家蚕微粒子病的控制技术研究具有重要参考价值。     

家蚕微孢子虫全基因组分析支持微孢子虫与真菌的亲缘关系

微孢子虫(microsporidia)是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,虽然分子生物学的研究证据表明其与真菌(fun-gi)存在亲缘关系,但这些证据均是基于单个或少数几个基因构建系统进化树而得出的。利用家蚕微孢子虫全基因组数据,采用基于基因同源性的Darkhorse基因组统计方法,鉴定家蚕微孢子虫基因组中每个基因的来源谱系,并通过全基因组谱系可能性指数(lineage probability index,LPI)分析微孢子虫与其他物种的亲缘关系。结果表明家蚕微孢子虫与其他微孢子虫的LPI加权平均值为0.93,具有最近的亲缘关系,与真菌界的LPI加权平均值为0.65,与原生生物界的LPI加权平均值为0.38。由此证明微孢子虫与真菌存在着更近的亲缘关系,微孢子虫门属于真菌界而非原生生物界。     

施氮对禾本科牧草硝酸盐积累和氮素回收率的影响

采用盆栽试验,研究4种氮肥水平下杂交狼尾草和墨西哥玉米在不同生长期叶和根的硝酸盐含量,茎叶粗蛋白含量以及不同氮肥水平的氮素利用率。结果表明,杂交狼尾草叶和墨西哥玉米根的硝酸盐含量受施氮量影响较大,二者之间都呈正相关。从生长过程来看,随着牧草的生长,叶的硝酸盐含量有少量升高,根的硝酸盐含量先升高后降低,但在氮肥水平下,2种牧草各个时期的硝酸盐含量均低于硝酸盐有毒限量指标0.25%。另一方面,随着施氮水平的提高,2种牧草的粗蛋白含量逐渐升高,杂交狼尾草粗蛋白含量最高达23.23%,墨西哥玉米粗蛋白含量最高达25.80%,但2种牧草的干物质生产效率、粗蛋白质生产效率和氮素表观回收率均降低,说明施氮量越大,氮素利用效率越低,损失率也越大。从生长过程来看,随着2种牧草的生长其粗蛋白含量均逐渐降低。综合考虑,笔者认为在山地红壤中种植杂交狼尾草和墨西哥玉米以施纯氮200 kg/hm2就能满足牧草高产优质的生产需求。     

熊蜂（Bombus spp.）的授粉特性及其人工饲养

本文通过对Bombus lucorum和Bombus terrestris两个熊蜂种的室内饲养及温室蔬菜授粉试验,分析了熊蜂的授粉特性、人工饲养技巧和应用前景.     

流感病毒H5N1对野生动物的威胁

20世纪爆发的几次A型流感大流行曾经造成巨大的损失。进入21世纪以来A型流感病毒H5N1又在最近几年爆发，不仅给养禽业和人类造成巨大打击，也对野生动物产生了极大的威胁。本文通过分析H5N1型流感的疫情，提出了针对保护野生动物特别是圈养种群的措施。     

不同施氮水平对旱地兰州百合养分累积与氮肥利用的影响

在兰州市七里河区西果园大田条件下,研究了在施用磷肥150 kg/hm²和钾肥225 kg/hm²基础上,不同施氮水平(0,75,150 和 225 kg/hm²)对旱地兰州百合干生物量、养分累积动态及氮肥利用的影响,旨在揭示兰州百合需肥规律,为其规范化栽培提供依据。结果表明,适宜施氮量可促进兰州百合植株生长,提高鳞茎养分的转化吸收效率。鳞茎氮磷钾养分吸收不同步,累积量依次为K＞N＞P。施氮量只影响鳞茎干生物量和养分的阶段累积量,不改变其累积动态趋势。随施氮量的增加,鳞茎产量、氮累积量和氮肥利用率均有不同程度地提高,施氮量为150 kg/hm²时三者均最高,分别达(8 982.1±845.8) kg/hm²,(29.123±1.767) kg/hm²和(4.97±2.16)%。当施氮量达225 kg/hm²时各指标均下降。施氮量为75 kg/hm²时氮肥效率最大,为(107.36±11.21)%,此后随氮肥量的增加氮肥效率极显著下降。综合考虑各因素,建议兰州百合基肥的施氮量应为75~150 kg/hm²。     

Benzimidazole resistance in Nematodirus spathiger and N. filicollis in New Zealand

AIM: To determine the prevalence of benzimidazole resistance in Nematodirus spathiger and N. filicollis from a sample of New Zealand farms.

METHODS: The efficacy of albendazole (ABZ) against Nematodirus spp. was assessed by faecal nematode egg count reduction (FECR) tests undertaken in lambs aged 3–8 months old on 27 sheep farms throughout New Zealand. On each farm, groups of 10–16 lambs were either treated with ABZ (4.75?mg/kg) or remained as untreated controls. Faecal samples were collected from all animals at the time of treatment and 7–10 days later. Faecal nematode egg counts (FEC) were performed using a modified McMaster technique. Larvae were cultured from pooled faecal samples, collected 7–10 days after treatment from each group, by incubation at 20°C for 6 weeks, 4°C for 26 weeks then 13°C for 2 weeks. The resulting third stage larvae were identified to species using a multiplex PCR assay, that identified species-specific sequences in the second internal transcribed spacer region of ribosomal DNA. The efficacy of ABZ for N. spathiger and N. filicollis was calculated from the proportion of the two species in culture and the group mean FEC before and after treatment. Only farms with a mean of 10?epg for each species in untreated samples were included for analysis. Resistance was defined as an efficacy <95%.

RESULTS: On farms that met the threshold of 10?epg in faecal samples, benzimidazole resistance was found on 20/21 (95%) farms for N. spathiger compared with 4/10 (40%) farms for N. filicollis (p<0.05). In samples collected following treatment, a mean of 83 (min 46, max 100)% of Nematodirus spp. larvae recovered from the untreated groups were N. spathiger, compared with 94 (min 45, max 100)% in the ABZ treated groups (p=0.03). This change in percentage was not influenced by the overall efficacy of treatment based on the FECR test (p=0.324).

CONCLUSION: The results confirm the high level of resistance in N. spathiger in New Zealand and that benzimidazole resistance was more common in N. spathiger than N. filicollis. While resistance to benzimidazole anthelmintics has been reported previously in New Zealand, this is the first report of N. filicollis being resistant to benzimidazole anthelmintics.     

平湖浆蜂与苏王1号遗传多样性的微卫星DNA分析

利用6对微卫星DNA标记对平湖浆蜂与苏王1号两个蜜蜂品种进行遗传多样性分析，评估品种内的遗传变异和品种间的遗传分化。结果表明：共检测到40个等位基因，每个位点的等位基因数从4~10不等，所有位点平均的期望杂合度和多态信息含量值分别为0.5078和0.4708。平湖浆蜂和苏王1号6个微卫星位点平均有效等位基因数分别为5.67和5.17，平均基因杂合度为0.4981和0.5007，群体分化系数为3.7％，2个品种间的Reynolds’遗传距离和Nm分别为0.03770和6.507。2个蜜蜂品种均表现出较高的群体杂合度和丰富的遗传多样性。     

鸡传染性法氏囊病继发大肠杆菌感染的诊断研究

笔者饲养的200多只蛋鸡用种公鸡于50日龄左右突然发病，主要症状为食欲剧减甚至废绝，羽毛逆立，缩颈嗜眠。倒提时口内流出大量黏液状液体，排恶臭白色或微黄带泡沫稀粪，呈水样。发病率达80％，死亡率达32％。剖检可见部分鸡胸肌和腿肌出血，法氏囊水肿出血，个别鸡法氏囊内有黄色较硬的球状分泌物，有的鸡有心包炎和肝周炎，肠道、脾脏和肾脏有出血点。综合以上症状和实验室病毒学和细菌学检测，确诊为传染性法氏囊病继发大肠杆菌感染。     

The mechanisms relating to increases in plasma enzymes and isoenzymes in diseases of animals

Changes in plasma or serum enzymes and isoenzymes are useful indicators of tissue damage in many diseases. Enzyme increases are usually related to leakage of enzymes from damaged cells. The amount of increase depends on factors such as the concentration of enzyme in the cells, the rate of leakage of enzyme from cells and the rate of clearance of enzyme from plasma. There are important species variations in the tissue concentrations and plasma clearance rates of enzymes and isoenzymes.     

抗尼帕病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗尼帕病毒(NiV)的单克隆抗体(Mib),本研究以原核表达并纯化的NiV核蛋白(N蛋白)为免疫原,按常规方法免疫小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经两次有限稀释法克隆,最终获得两株稳定分泌抗N蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为A6和C5.Western blot分析表明....