乳酸菌食品级基因表达系统

乳酸菌是一类重要工业菌株,随着其遗传学和分子生物学研究取得长足进展,乳酸菌食品级表达系统作为高效表达系统日益受到重视。该表达系统和其他细菌表达系统相比有很多优点。介绍了糖诱导表达系统、噬菌体ф31爆发式诱导的表达系统、乳链球菌素调控表达系统、温控表达系统等的研究进展以及这些系统的应用前景。     

几种微生物表达系统的比较

微生物表达系统是用于蛋白质生产及性质研究的重要基础。常用的微生物表达系统有大肠杆菌表达系统,酵母表达系统和丝状真菌表达系统。该文主要介绍了上述表达系统的优缺点,并作比较分析。     

雌激素受体与细胞周期蛋白B1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨雌激素受体(ER)和细胞周期蛋白B1(cyclinB1)在乳腺癌中的表达与临床意义.方法采用免疫组化法检测70例乳腺癌组织标本中ER和cyclinB1的表达并结合临床病理情况进行结果分析.结果ER和cyclinB1的阳性表达在浸润性导管癌和浸润性小叶癌的表达差异无显著性(P＞0.05).ER和cyclinB1的阳性表达与肿瘤大小、病理学分期和淋巴结转移数目有关(P＜0.05),肿瘤愈大、病程愈晚期、淋巴结转移数目愈多则ER的阳性表达率愈低,而cyclinB1的阳性表达则相反.结论乳腺癌组织中cyclinB1的阳性表达提示预后不良,而ER的阳性表达是预后良好的标志,检测两者的表达对乳腺癌的预后判断有一定的参考价值.     

FSH和LH及其受体基因在梅山猪公猪HPT轴的表达

为了研究卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)及其受体在梅山猪公猪各组织中的表达特征以及在下丘脑-腺垂体-性腺轴(HPT轴)中的表达规律,采用荧光定量PCR(RT-PCR)方法对6头150日龄梅山猪公猪的生殖组织、脑组织及内脏组织中FSHβ、FSHR、LHβ和LHR基因的表达情况进行分析。结果显示,FSHβ基因在梅山猪公猪的下丘脑和垂体中表达;FSHR基因在梅山猪公猪的睾丸、附体、附尾和尿道球腺中表达;LHβ基因在梅山猪公猪的睾丸、附头、附体、垂体、大脑、小脑和海马中表达;LHR基因在梅山猪公猪的睾丸和下丘脑中表达。采用荧光定量方法对各日龄(2、30、60、90及150日龄)梅山猪公猪下丘脑、垂体和睾丸中FSH和LH及其受体的表达进行研究。结果表明,FSHβ在下丘脑和垂体中的表达量随日龄的增加而增加;FSHR在睾丸中的表达量在2、30、60日龄段中较稳定,90日龄时表达量开始降低,150日龄的表达量达到最低值;LHβ在垂体中的表达、LHR在下丘脑中的表达和LHR在睾丸组织中的表达趋势都呈现起伏状态,30日龄时出现表达高峰,60日龄时表达量降低,90日龄时又达到表达高峰,以后降低;LHβ在睾丸中的表达量在2、30、60日龄段无显著差异(P0.05),90日龄时达到表达最高峰,150日龄时表达量有所降低。     

水通道蛋白在小鼠嗅上皮中的免疫定位

采用免疫印迹和免疫组织化学技术分析水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)在小鼠嗅上皮细胞中的表达情况。结果表明:AQP1在血管内皮细胞表达,AQP3在下层支持细胞和基底细胞表达,AQP4在上层支持细胞和基底细胞表达;AQP5在嗅毛和鲍曼氏腺的分泌细胞和导管细胞表达。结果显示了水通道蛋白在小鼠嗅上皮细胞中的表达位置,其中在支持细胞和基底细胞表达的AQP3和AQP4可能为嗅神经功能的维持提供了重要的微环境,在嗅毛和鲍曼氏腺的分泌细胞和导管细胞表达的AQP5可能在气味的感受方面起作用。     

农村弱势群体利益表达机制的完善

当前农村弱势群体的利益表达存在利益表达意识非主体化、利益表达行为非组织化、利益表达方式非制度化等问题.应从经济、政治、法律和社会等多层面着力,加快农村弱势群体脱贫步伐、畅通农村弱势群体利益表达的渠道、建立和完善农村弱势群体利益表达组织、营建弱势关怀的社会环境,不断改进和完善农村弱势群体利益表达机制.     

过量表达miR319对番茄果实品质的影响

[目的]探索过量表达miR319和过量表达LA对番茄果实品质的影响.[方法]以番茄野生型M82、过量表达miR319和过量表达LA番茄为材料,分析过量表达miR319和过量表达LA对番茄果实品质的影响.[结果]过量表达miR319植株的可滴定酸、可溶性糖、VC和番茄红素的含量下降,而过量表达LA植株的可滴定酸、可溶性糖、番茄红素的含量上升,VC含量下降.2个转基因植株可溶性蛋白的含量与M82比较都有所上升.[结论]过量表达miR319和过量表达LA对番茄果实品质的影响是相反的,过量表达LA可以提高番茄果实品质.     

三种鸭防御素真核表达载体的构建及其表达分析

为研究鸭防御素的真核表达,人工合成了鸭防御素AvBD2、AvBD10和AvBD12基因,并将其插入到真核表达质粒pDoubleEx-EGFP-flag-N中构建重组表达质粒;重组表达质粒经酶切鉴定正确后,分别转染HEK293细胞进行表达,用RT-PCR和Westem-blot鉴定目的基因的表达情况。结果表明,酶切鉴定证实目的基因成功插入到真核表达质粒中;真核表达质粒转染HEK293细胞24 h后,在荧光显微镜下可见绿荧光蛋白表达;RT-PCR能检测到目的基因mRNA,但Western-blot没有检测到目的蛋白的表达条带。     

精子抗原基因在猪生殖道及成熟精子中的表达特性

【目的】揭示若干精子抗原基因(SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E)在梅山公母猪生殖道及成熟精子中的mRNA时空表达规律。【方法】利用RT-PCR技术分析各基因在生殖道和精子中组织表达谱,利用半定量RT-PCR分析其在初生至150d梅山公猪睾丸中的发育性表达特性。【结果】5个基因在梅山公母猪生殖道组织中呈现不同的表达特性。其中SPAG1在睾丸中表达丰度最高,在精囊腺、前列腺、附睾体、子宫角和输卵管呈现中等丰度表达,而在附睾尾、子宫颈和卵巢的表达信号较弱。SPAG5在睾丸中表达丰度最高,在前列腺、附睾体和子宫颈中表达信号较弱。而SPAG6在睾丸中高丰度表达,在输卵管中呈现中等丰度表达,在子宫角的表达信号很弱。SPAG11C在附睾体和睾丸中高水平表达,而SPAG11E则在附睾体和附睾尾中低水平表达。在成熟精子中只有SPAG11E有mRNA表达。SPAG1、SPAG5、SPAG6和SPAG11C基因在公猪睾丸中发育性表达分析表明,总体上所检测的4个精子抗原基因的表达水平都随着日龄增加而提高,但存在一些差异。其中SPAG1和SPAG11C呈现相似的表达规律,在初生和30日龄时表达相对较低,但在60、90、150日龄都有显著提高(P0.05)。而SPAG5在初生和30日龄时表达也相对较低,在60和90日龄时均有显著提高(P0.05),但150日龄时略有下降,但差异不显著。SPAG6在初生和30日龄时表达水平很低,至60日龄有显著提高(P0.05),90日龄时维持这一水平,而到150日龄时则有显著下降(P0.05)。【结论】SPAG1、SPAG5、SPAG6、SPAG11C和SPAG11E在梅山公母猪生殖道组织广泛表达,在睾丸组织中其mRNA表达水平变化与性发育相一致,SPAG11E在精子中存在低丰度mRNA表达。     

利用油体蛋白体外重组技术实现牛肠激酶固定化应用

为研究利用油体蛋白体外重组技术实现肠激酶固定化应用的可行性,利用油体蛋白Oleosin、自剪切蛋白Intein和人工合成的牛肠激酶轻链(Enterokinase,EK)cDNA,分别构建表达盒Intein-oleosin-EK和Intein-EK,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达后通过SDS-PAGE和Western-blot检测发现,带有Intein-肠激酶表达盒的阳性菌株中有目的蛋白的表达,而Oleosin-intein-肠激酶融合蛋白表达盒不能在酵母中表达。     

合浦珠母贝不同壳基质蛋白基因的表达水平比较

采用荧光定量PCR 技术分析了不同壳基质蛋白基因之间的表达水平差异,组织表达特征以及育珠对表达水平的影响。结果显示,msi31,aspein,msi7 基因只在外套膜组织中表达;nacrein 和n19 基因除在外套膜表达外,在珍珠囊中也有表达;而accbp 在外套膜、闭壳肌、性腺、消化腺、腮和珍珠囊中都有表达,在外套膜中表达量最高,其次为性腺。accbp、msi31、msi7和nacrein基因在育珠贝和非育珠贝外套膜中的表达水平有显著性差异,aspein与n19 无显著性差异;其中msi31 基因在育珠贝外套膜的表达量上调,accbp尧msi7与nacrein 下调。不论在育珠贝还是非育珠贝的外套膜组织中,msi31的表达水平最高,n19 最低;但在珍珠囊中n19的表达量最高,且远高于在外套膜中的表达水平。     

基因表达系统研究进展

随着世界分子生物学的研究不断发展,基因表达技术有了很大的提高。到目前为止,人们已经研究出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核生物表达系统主要有大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等;真核生物表达系统主要包括酵母表达系统、丝状真菌表达系统等。各种表达系统各具优缺点,对其进行了详细介绍。     

生长素极性运输PIN基因在拟南芥和荠菜不同组织的表达定量分析

为了解拟南芥和荠菜形态差异与其生长素极性分布的关系,采用荧光定量PCR,以–actin为内参基因,对拟南芥和荠菜的根、茎、叶、花等组织中与生长素极性运输相关的PIN1、PIN3、PIN7基因的表达进行定量分析。结果表明：拟南芥各组织中PIN1的表达量都高于荠菜各组织中PIN1的表达量,拟南芥的茎和花中PIN1的表达量分别比荠菜茎和花中PIN1表达量高3倍和10倍;拟南芥各组织中PIN7的表达量也高于荠菜各组织的PIN7表达量,其叶片中PIN7的表达量比荠菜叶片中PIN7的表达量高10倍以上;荠菜各组织中PIN3的表达都高于拟南芥相应组织中PIN3的表达量,在茎、叶中的表达分别高3倍和10倍以上,这些生长素极性运输蛋白相关基因表达的差异可能是导致2种植物形态差异的直接原因。     

中华蜜蜂AcerOr2基因昆虫表达载体pIB/V5-His的构建

为构建能稳定高效表达中华蜜蜂气味受体AcerOr2的重组表达载体,并在Sf9昆虫细胞中表达,将目的基因AcerOr2和昆虫表达载体pIB/V5-His用BamHⅠ和EcoRⅠ做双酶切,通过T4 DNA连接酶构建成含目的基因AcerOr2的表达载体pIB/V5-His-AcerOr2。将重组DNA用脂质体转染的方法转染至Sf9细胞中,利用Western blot和免疫荧光检测AcerOr2蛋白的表达和亚细胞定位情况。结果表明,成功构建重组表达载体pIB/V5-His-AcerOr2并建立稳定转染细胞系;Western blot结果证明,重组表达载体能在昆虫细胞Sf9中表达,融合蛋白相对分子质量为56 ku左右;免疫荧光显示,重组表达载体在Sf9细胞膜上表达,与预测结果一致。说明构建的重组表达载体pIB/V5-His-AcerOr2能在Sf9细胞中稳定表达,为进一步研究中华蜜蜂气味受体AcerOr2的功能奠定了基础。     

6个小麦抗叶锈病近等基因系的cDNA-AFLP差异表达分析

应用cDNA-AFLP技术对小麦抗叶锈病近等基因系TcLr9、TcLr15、TcLr19、TcLr25、TcLr38、TcLr45和感病亲本Thatcher间的表达差异进行分析,共选用226对引物组合对其进行筛选,检测出7 554条条带,平均每对引物可获得33条扩增条带。筛选出68对引物能够在小麦抗叶锈病近等基因系TcLr9、TcLr15、TcLr19、TcLr25、TcLr38、TcLr45和感病亲本Thatcher之间扩增出特异表达条带,特异表达检出率为30.1%。68对引物共扩增出84条特异表达条带,并根据基因表达与否及表达量划分为9种不同的特异表达类型(I~IX)。其中,I、V和VII型特异表达类型为组成型表达,共49条;II、IV、VI和VIII型特异表达类型表达上调,共21条;III和IX型特异表达类型表达下调,共14条。有5种特异表达类型(IV、V、VI、VII、VIII型)可能与小麦的抗病反应相关,并且这5种特异表达类型又分为两类亚型,第一类亚型是小麦抗叶锈病近等基因系与小麦叶锈菌互作时特异表达(I V型)或者表达量明显增加(VI、VIII型),为诱导性特异表达类型;第二类亚型为组成型特异表达类型(V、VII型)。     

毕赤巴斯德酵母表达外源蛋白研究进展

毕赤巴斯德酵母表达系统具有真核生物表达的特点 ,现已广泛用于外源蛋白的表达。本文综述了其自身的优点 ,表达载体的特点 ,外源基因拷贝数的多少与表达产量的关系 ,分泌型蛋白的表达 ,表达外源蛋白所需的外部条件以及翻译后的加工和修饰过程     

结直肠癌中CXCR7、VEGF、Ki-67和PTEN表达

目的探讨结直肠癌中CXCR7、VEGF、Ki-67和PTEN表达情况及意义。方法采用免疫组化Envision法检测CXCR7、VEGF、Ki-67和PTEN在60例结直肠癌、30例结直肠腺瘤、10例正常结直肠黏膜组织中表达。结果 CXCR7、VEGF、Ki-67在结直肠癌中表达明显高于腺瘤和正常黏膜（P〈0.01）,而PTEN表达降低（P〈0.01）。CXCR7、VEGF、Ki-67表达与肿瘤直径、淋巴结转移有关（P〈0.01或0.05）,而PTEN表达与肿瘤分化程度有关（P〈0.05）。结直肠癌中CXCR7表达与VEGF和Ki-67表达有关（P〈0.01或0.05）。结论结直肠癌中CXCR7、VEGF高表达参与肿瘤增殖和淋巴结转移,而PTEN低表达可能与肿瘤低分化有关。     

太湖鹅与皖西白鹅IGF-I和MSTN mRNA表达与屠宰性状相关性分析

文章以太湖鹅和皖西白鹅为研究素材,采用多重荧光竞争性PCR方法研究鹅70日龄胸肌和腿肌中IGF-I、MSTN mRNA表达情况,并与屠宰性能做相关性分析,探讨IGF-I、MSTN对鹅骨骼肌生长的影响。结果表明,胸肌IGF-I mRNA表达量太湖鹅极显著高于皖西白鹅,腿肌MSTN mRNA表达量太湖鹅显著高于皖西白鹅,胸肌MSTN mRNA、腿肌IGF-I mRNA没有品种差异性。鹅群体,腿肌IGF-I mRNA表达量公鹅极显著大于母鹅,MSTN mRNA表达量腿肌极显著高于胸肌,IGF-I mRNA表达量没有组织差异性。胸肌和腿肌组织中IGF-I mRNA表达量和MSTN mRNA表达量极显著正相关,腿肌IGF-I mRNA表达量和胸肌率显著负相关,皖西白鹅腿肌MSTN mRNA表达量与体重、腿肌重显著负相关。     

etr1-1在矮牵牛中诱导表达可提高叶片对灰霉病的抗性

【目的】研究etr1-1诱导表达对矮牵牛抗灰霉病的作用。【方法】以转GVG：etr1-1矮牵牛为材料,地塞米松（DEX）处理,接种灰霉病菌,通过调查发病程度和定量半定量基因表达分析揭示etr1-1在矮牵牛抗灰霉病中的作用。【结果】与对照叶片相比,DEX处理的矮牵牛叶片表现出延缓衰老和减轻病害的症状。接种病原菌后,DEX处理的叶片发病率增加比例为0,对照叶片为66.77%;DEX处理的叶片平均病斑扩展速率为4.69 mm•d-1,对照叶片为6.29 mm•d-1。qRT-PCR和semi-qRT-PCR基因表达分析表明,DEX处理的叶片etr1-1与Bcact表达呈相反趋势。在DEX处理叶片中,DEX诱导了叶片etr1-1表达,随着诱导时间延长,基因相对表达量上升,诱导后第3天达到最大,无菌水接种叶片的表达量是病原菌接种叶片的10.71倍。DEX处理的叶片,Bcact在接种后第1天表达量最大;对照叶片,Bcact在接种后第2天表达量最大;其中处理叶片Bcact的最大表达量比对照叶片降低了20倍。在DEX处理的叶片上随着etr1-1表达增强,Bcact表达量下降。DEX处理的叶片,CP10仅在接种后第3 天轻微表达;对照叶片上,随接种时间延长,CP10表达量上升,接种后第3 天达到最大,处理最大表达量比对照降低了23.6倍。随接种时间延长,DEX处理的叶片和对照叶片,ACO表达均先升高后降低,在第2天达到最大,处理叶片上最大表达量仅为6.75,比对照低7.33倍。DEX处理的叶片,乙烯途径基因ETR2、ERS1、EIL1 和EIN2表达受到抑制。ERS1和ETR2在DEX处理和对照叶片上均有表达,并在接种后第3天达到最大,但处理的最大表达量比对照低51倍。DEX处理的叶片,接种后第1-2 天EIN2表达被抑制,第3天表达上升,在对照叶片上,EIN2表达量随接种时间而增加,第3天达到最大,DEX处理的叶片EIN2最大表达量比对照低31.58倍;DEX处理的叶片和对照叶片,EIL1与EIN2有相似的表达趋势,且DEX处理的叶片EIL1最大表达量低于对照两倍。AOC和COI1在JA生物合成和信号转导途径中起重要作用。DEX处理的叶片,AOC和COI1表达均被减弱,AOC在接种后第1-2天被抑制,第3天表达,对照叶片上,随接种时间延长AOC表达量增加,在第3天达到最大,处理叶片AOC最大表达量比对照低12.96倍;COI1在DEX处理和对照叶片上均有表达,且在第3 天表达量最大,DEX处理叶片COI1最大表达量比对照低6.14倍。病原菌侵染植物时,ERFs会被乙烯或JA调控以激活病程相关基因表达。经DEX处理的叶片ERF4表达先升高后降低,第2 天表达量最大;对照叶片随接种时间延长ERF4表达量上升,在第3天达到最大;处理最大表达量比对照低2.96倍。无论处理还是对照,ERF8表达量都随接种时间延长而上升,在第3天达到最大,但处理的最大表达量比对照低3.52倍。接种病原菌后,DEX处理的叶片上,所有病程相关基因表达微弱,最大表达量均低于10;而对照叶片上,所有病程相关基因均有表达,并在接种后第3 天表达量最大。其中以PR1表达量最大为10 521.11,其次是EX-CHI和OSM ,分别为184.95和184.96,Defense1和AC-CHI表达量最小为23.39和14.58。【结论】etr1-1诱导表达通过延缓灰霉病菌引起的叶片衰老,从而提高转基因矮牵牛对灰霉病的抗性。     

OMA DS10和OAP3基因在文心兰各器官中的表达

为研究兰花MADS-box基因的表达与花器官发育之间的关系,以文心兰为材料,通过荧光定量实验对文心兰中AP1家族成员OMA DS10和AP3家族基因OAP3进行了表达分析.结果表明:OMADS10和OAP3基因在花芽生长的整个过程中都表达,且都在营养器官(叶片,茎)和花器官所有部位中表达,但表达量存在明显差异.OMADS10在合蕊柱中强烈表达,其次是花瓣.OAP3在花萼中强烈表达,其次是合蕊柱.