液相色谱(HPLC)快速测定苏云金素的方法

苏云金素(thuringiensin)是苏云金杆菌(Bdcillus thuringiensis)分泌到菌体外的核苷类细菌杀虫素,亦有B—外毒素,热稳定外毒素,蝇固素(或蝇毒素)之称。它是仅次于苏云金杆菌产生的伴孢晶体蛋白毒素的另一类有应用价值的毒素。它与伴孢晶体蛋白毒素     

酶联免疫吸附测定法检测青虫菌工业产品中晶体蛋白的含量

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)的研究和应用在国内有很大进展。用于生物防治的青虫菌(B.t.subsp.galleriae)已进入工业化生产,其产品中伴孢晶体蛋白含量的检测方法在探索中。酶联免疫吸附测定法(ELISA),作为一项新兴的免疫化学技术,具有灵敏、精确、迅速的特点,已被用于苏云金杆菌晶体蛋的测定。     

测定苏云金杆菌制剂伴孢晶体蛋白指示毒力效价的方法

用ELISA间接法定量测定Bt产品中伴孢晶体蛋白含量,来指示样品毒力效价的程序和方法,结果表明ELISA技术可用于Bt制剂产品质量的常规检测。     

苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用

本文简要综述了苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用。讨论了Bt芽孢和晶体之间的增效作用,芽孢孢衣蛋白和晶体蛋白的同源性,芽孢孢衣蛋白的杀虫活性以及芽孢杀虫的可能机制。     

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素

十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳定量测定苏云金杆菌δ－内毒素１前言目前已研究出测定苏云金杆菌（Ｂ，ｔ．）δ－内毒素晶体蛋白含量的可靠方法。此方法首先用高ｐＨ溶液处理样品以抑制Ｂ．ｔ蛋白酶，再用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）法，从生长基质蛋白...     

应用计算机进行BT—ICP基因的分类和同源性比较

本文应用DNASIS(V7.12)和PROSIS(V7.12)软件、GenBank(1994.8,Releasee 84.0)和Swiss—Prot(1994.2,Releasee 28.0)数据库对苏云金杆菌(Bacillus Thuringiensis,BT)杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)及其编码基因进行了检索,在此基础上对ICPs基因序列结构的同源性、DNA片段总碱基数、晶体蛋白氨基酸数及分子量、晶体蛋白基因编码序列(CodingSequence,CDS)范围、目标生物等进行了比较,发现属同一基因型的不同菌株来源的晶体蛋白基因编码蛋白区的序列几乎完全一样,同源性高达99％,而不同基因型编码的蛋白氨基酸序列则差异较大。文中根据上述资料对100个苏云金杆菌晶体蛋白基因进行归类,将之分为cryⅠ——cryⅧ、cytA、cytB等10类36个亚类,还对晶体蛋白基因分类的有关问题进行了讨论。     

芽孢杆菌剂与苏脲1号对家蝇幼虫的协同作用和持效

实验室研究结果表明,苏云金杆菌CT—43和YBT—127菌株的孢晶素粉对家蝇幼虫的效果分别为65％和40％,明显高于森田芽孢杆菌的效果(5％),在多种混合应用的组合中,只有CT—43菌株的孢晶粉与苏脲Ⅰ号混合应用有明显的协同作用。苏云金素混入家蝇饲料中在培养室保存15天,对蝇幼虫的毒力没有下降,其他菌剂和苏脲Ⅰ号的毒效均明显下降。改进苏云金杆菌的孢晶素制剂,用于防治家蛹幼虫是有效可行的。     

新杀虫菌“018”防治棉红铃虫

1977年我们获得一株对棉红铃虫毒杀作用很强的芽孢杆菌,代号“018”。该菌纯孢晶(芽孢和蛋白质晶体毒素)混合物对越冬红铃虫的致死中浓度(LC50)为0.01413mg/m1,0.1—0.5亿/ml菌悬液的校正死亡率高达90％以上。经1977、1978两年田间试验:“018”菌的防治效果明显高于DDT和1605。经中国科学院武汉病毒研究所虫菌组鉴定:认为“018”菌是我国首次发现的苏云金杆菌英里逊变种(Bacillus thuringiensis Var.     

东北地区高毒力苏云金芽孢杆菌HB-3菌株生物学特性研究

从自然死亡的玉米螟幼虫体内分离获得一株对玉米螟高毒的苏云金芽孢杆菌,编号为HB-3。该菌株产生菱形和方形两种晶体蛋白。纯化晶体及孢晶混合物的毒力测定结果表明,该菌株对玉米螟具有较高毒力,LC₅₀分别为5.82μg/mL和5.94μg/mL,对尖音库蚊也有一定毒力,LC₅₀分别为16.59μg/mL和17.50μg/mL。生理生化特性研究结果表明,HB-3与已知的蜡螟亚种(Bacillus thuringiensissubsp.galleriae)基本一致,血清型为H5ab。晶体蛋白的SDS-PAGE分析表明,HB-3菌株晶体蛋白至少由分子量为133 kDa、65 kDa4、5 kDa和23 kDa的4种多肽组成。     

苏云金芽孢杆菌培养条件及晶体蛋白提纯方法初探

在苏云金芽孢杆菌常用培养基的基础上,设计了３种改进苏云金芽孢杆菌产生伴孢晶体的培养基,从中筛选出一种比１／２ＬＢ、Ｇ Ｔ培养基培养周期短（约需３８ｈ）的ＺＭ培养基。同时,改进了晶体蛋白的提纯方法—碱裂解法。改进后的方法与不连续蔗糖密度梯度离心法相比,简便易行,提取量大,在Ｂｔ的生化和生物活性研究上具有一定参考价值。     

用小菜蛾测定苏云金杆菌毒力的感染方法

用两种感染方法,以3龄小菜蛾作供试虫,美国标准品HD—1—1980作对照的生物测定法,对H_3和H_5两菌株粉剂的毒力效价进行了比较测定,提出了检定该类制剂毒力适用和可靠的方法及其测定程序。     

苏云金杆菌高效生产菌株的筛选

从灯蛾罹病死亡幼虫中分筛筛选出苏云金杆菌ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＳＢ－１菌株，从引进的Ｂ．ｔ．菌种中筛选出ＳＢ－８菌株。该两株菌经发酵试验，生产性能良好，对抗药性强的台湾、泰国和深圳品系的小菜蛾毒力较高。田间试验表明杀虫效果好。     

苏云金杆菌蜡螟变种制剂毒力的离体生物测定

用碱和酶相继降解苏云金杆菌蜡螟变种制剂,然后作用细胞,能使细胞发生病变直至死亡。结果显示制剂浓度和细胞死亡率成良好的线性关系,经过5次平行实验证明,离体生测与活体无显著差异,可以用离体生测代替活体生测。     

苏云金杆菌高效培养基优选模型的研究

本研究设计一套“正交试验－浓度加倍－生物测定”新的培养基配方优选模型，获得了理想的高效培养基配方。采用７９００７号菌株和５号配方，用７吨发酵罐进行试验，平均发酵效价达２８８７×１０３ＩＵ／ｍｌ。实验结果表明，该方法是苏云金杆菌发酵培养基配方优选中十分简单、实用、快速的新途径     

亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种对大蜡螟幼虫物质代谢的影响

本文研究了亚致死剂量苏云金杆菌蜡螟亚种(Bacillus thuringiensis galleriae)晶体蛋白对大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫物质代谢的影响。结果表明,大蜡螟幼虫经亚致死剂量B.t.galleriae晶体蛋白处理后,中肠糖原、组蛋白及RNA的量均较正常幼虫减少。处理组幼虫整体匀浆物中可溶性蛋白质含量也较正常幼虫低。大蜡螟幼虫经B.t.galleriae晶体蛋白处理后中肠上皮细胞明显空泡化,并发生解体。     

不同生长期蔬菜叶片对Bt制剂生物测定结果的影响

在室内用蔬菜叶片浸渍苏云金杆菌药液测定对小菜蛾的ＬＣ５０试验结果指出，供试蔬菜的生长期对测试结果有明显的影响。用营养生长旺盛期的菜叶，所得的ＬＣ５０值比营养生长末期的菜叶高出４倍左右，差异显著。因此，用叶片浸渍法测定药液毒力，提供生长期标准一致的植物是保证试验准确性的必要条件     

苏云金杆菌Tm13—14菌株的生物学和对昆虫的毒性

本文报道从黄粉虫死亡幼虫体中分离到一株苏云金杆菌Tm13-14菌株。经鉴定为BtH_1血清型,晶体型为含有thu(H_1)、K-1(H_3ab)和tol(H_9)晶体抗原的复合型。该菌制剂的毒力测定表明,对鳞翅目、双翅目和鞘翅目的某些昆虫具有毒性。     

苏云金芽孢杆菌晶体蛋白对北方根结线虫生物测定方法的建立和杀虫效果评价

 A bioassay procedure was developed to assess the toxicity of Bacillus thuringiensis crystal protein against Meloidogyne hapla,a root-knot nematode,under laboratory conditions.Reproducibility and precision of the bioassay results were optimal when forty 2nd stage juveniles were incubated in the dissolved crystal protein solution at 25℃,pH9.0 for 7 days.The juveniles were stained with 1% KMnO₄ for 2 hours or methylene blue solution for 1 hour to distinguish living and dead ones.By the bioassay procedure,the LC₅₀ value of strain YBT-1532 crystal protein against M.hapla was determined as 0.304±0.086 mg/mL(LC₅₀±1.96SE).Moreover,the strain YBT-1532 showed toxicity to Caenorhabditis elegans,a free-living nematode.All results indicated that YBT-1532 is a toxic strain to plant-parasitic nematode,and has the potential to control plant-parasitic nematode.     

母细胞产生内含物的芽胞杆菌分析

在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分离过程中发现有些芽胞杆菌产生与Bt相似的芽胞,但并不形成伴胞晶体,特别是发现它们在芽胞期的母细胞中含有丰富的内含物,对该类菌株的性质需要进一步明确.本研究选择6株该类型的菌株,对其种属、质粒、蛋白谱和杀虫活性等进行了初步分析.芽胞形态和质粒图谱分析结果显示,其与Bt菌株相似;肤指纹图谱分析发现选取的蛋白与蜡样芽胞杆菌(B.cereus)族细菌的蛋白匹配度最高;16S rDNA聚类研究表明,所分离的菌株的确与蜡样芽胞杆菌(B.cereus)族(包括Bc和Bt)同源性最高;从生物杀虫活性测定来看11-1菌株上清液对小菜蛾(Plutella xylostella)的校正死亡率达75.9％,而85-1和11-1菌株上清对亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)的校正死亡率分别能达到100％和87.9％.本研究结果表明在Bt菌株的分离过程中,对于没有形成晶体但在芽胞形成时期还有内含物的菌株也应加以重视,这些菌株属于B.cereus族,具有潜在利用价值.     

转Bt基因棉花杀虫蛋白含量的时空表达及对棉铃虫的毒杀效果

用ELISA法和室内生测法研究分析了3个转Bt基因棉花株系新棉33B、GK12、GK2不同生育期、不同组织器官的杀虫蛋白表达量、校正死亡率及它们之间的关系.结果表明,杀虫蛋白表达量在棉花生育过程中有明显的时空动态变化.总的趋势是苗期和蕾期杀虫蛋白表达量较高,花期呈下降趋势,花铃期下降最为明显,到铃期和吐絮期含量略有回升.不同组织器官的杀虫蛋白表达量也有显著的差异,其顺序为叶＞铃、花心、花萼、蕾＞花瓣＞苞叶.室内生物测定棉铃虫幼虫校正死亡率与其杀虫蛋白表达量高度一致.转Bt基因棉花应加强中后期对棉铃虫的监测和补充化学防治.