茭白lea3基因全长cDNA的分离克隆及序列分析

第3组胚胎晚期丰富蛋白(LEA3)是一组在胚胎发育后期丰富表达的蛋白,同时它还受水分胁迫和ABA的诱导,与植物抗旱性密切相关。本研究以经过干旱处理的茭白幼苗的mRNA为模板,根据禾本科lea3基因的保守序列设计简并引物进行RT-PCR,得到lea3基因的部分序列,然后结合RACE方法获得全基因两端的序列,经拼接得出茭白lea3基因的全长cDNA,序列分析结果表明该基因的开放阅读框为666bp,编码221个氨基酸,包含2个LEA3基元序列。通过与已报道的LEA3蛋白序列比较,与禾本科中水稻、大麦、小麦、雀麦、玉米的同源性分别为51.2%、41.0%、41.1%、42.0%和40.5%。最终得出结论,茭白lea3基因具有已知物种lea3基因的特征,可以为该基因的功能研究提供参考。目前,该基因已在GenBank中登录,编号为GQ494017。     

萝卜RsCYP86MF 基因cDNA全序列克隆及结构特征分析

 本研究通过设计保守的基因特异引物, 运用SMART RACE RT - PCR技术从‘圆白’萝卜中获得一个细胞色素P450基因, 命名为RsCYP86M F, 其cDNA全长1818 bp, 含有1581 bp的完整开放阅读框, 编码526个氨基酸, 该基因编码的蛋白序列与白菜的细胞色素P450基因编码的氨基酸序列同源性高达90% , 且有很高的功能区段保守性; 对其可能编码的蛋白质二级结构进行预测发现, 该蛋白质具有细胞色素P450典型的保守结构域FNAGPRLCIG, 及N - 糖基化位点等结构域。     

cDNA文库与RACE方法结合克隆马铃薯DnaJ -like基因全长cDNA

 以青枯病菌小种3号(生化变种2) PO41诱导24 h和48 h的马铃薯抗青枯病基因型ED13叶片为材料, 应用SMART技术构建了一个富集青枯病抗性相关基因的cDNA文库。继而利用RACE技术与该cDNA文库相结合克隆了一个马铃薯分子伴侣基因的全长cDNA。该cDNA长735 bp, 5′端有25 bp的非翻译区, 3′端具有完整的polyA 尾, 包含一个编码177 个氨基酸的完整开放阅读框架( GenBank 登录号:DQ885360) 。该分子伴侣基因与拟南芥DnaJ-like 20的部分核苷酸序列具有84%的一致性, 与其编码的氨基酸序列具有59%的一致性, 暂命名为StDnaJ。目前在马铃薯中尚未发现与之同源的已知基因。半定量RTPCR结果表明, 该基因同时受青枯病菌的诱导和茉莉酸的调节, 可能在青枯病菌和茉莉酸胁迫下具有促使胁迫损害细胞恢复活性的功能。     

番茄植物络合素合酶基因全长cDNA的克隆及其表达特点

为从分子水平上揭示PCS基因在番茄重金属螯合解毒过程中的作用机制,该研究以番茄（Lycopersicon esculen turn Mill．）品种苏红2003幼苗cDNA为模板,根据NCBI上登录的其他植物的植物络合素合酶基因保守区设计简并引物,利用RT-PCR和RACE技术,克隆番茄植物络合素合酶基因cDNA全长,     

香蕉果实果胶裂解酶基因cDNA克隆及序列分析

利用已报道果胶裂解酶基因的保守序列设计简并引物,进行RT-PCR,得到1个大约1300bp的香蕉果胶裂解酶基因cDNA片段,命名为MA-pl。DNA序列分析表明:MA-pl片段全长1277bp,包含1个882bp的开放读码框(ORF),编码294个氨基酸;其具有所有果胶裂解酶共有的保守区域:钙协调部位(Asp72,Asp74,Asp96,andAsp100)、酶活性位点(Arg152,Pro154,Arg157)及3个重要的结构域(motifI:WVDH,motifII:DGLVDAVMGSTAITVSNNYF,motifIII:LYQRMPRCRHGYFHVVWNDY);MA-pl氨基酸序列与草莓-1、葡萄、草莓-2、拟南芥、苹果、香蕉(banana-1)的相似性分别为85.8%、74.2%、79.7%、78.6%、72.4%和71.4%。     

莲藕可溶性淀粉合成酶基因LrSSS的克隆与表达特性分析

以莲藕品种‘美人红’叶片为试材,利用RACE结合RT-PCR技术克隆得到全长4 080 bp的莲藕可溶性淀粉合成酶基因（LrSSS）cDNA序列（GenBank登录号：KP201636）,其中开放阅读框3 696 bp,编码1 231个氨基酸;该序列与甜瓜、葡萄SSS基因编码氨基酸序列同源性较高,分别达79%、69%。LrSSS 所编码的氨基酸序列包含3个典型的碳水化合物结合结构域（CBM_25）和1个淀粉合成酶催化域（Glyco_transf_5）。LrSSS 表达分析表明,莲藕根状茎膨大具3节段时,在终止叶叶片中的表达量最高,其次为后把叶叶片,终止叶叶柄表达量最少;在根状茎膨大至4节段时,LrSSS在第1、2节段根状茎中表达量较高,在第3、4节段根状茎中表达量较低,表明在第1、2节段根状茎形态基本建成后LrSSS在调控产物转化为淀粉过程中可能起到重要作用。     

桃叶片β- 半乳糖苷酶基因全长cDNA克隆及原核表达

 利用RT-PCR和RACE技术, 从蟠桃(Amygdalus persica var. compressa Bean) 中克隆出3 285 bp的β - 半乳糖苷酶基因cDNA全长, GenBank登录号为AY874412。该cDNA 2 559 bp, 编码853个氨基酸。将其插入到大肠杆菌表达载体pET-32a ( + ) 中, 转化BL21 trxB (DE3) , 筛选重组菌株。经IPTG诱导表达后, SDS-PAGE呈现约115 kDa特异表达条带。并通过体外酶促反应分析表达的融合蛋白的生物活性。     

黄瓜液泡膜H+-PPass基因CuPPase的cDNA克隆、序列分析与表达

 利用GenBank 登录的植物液泡膜焦磷酸酶氨基酸保守区序列设计简并引物,利用RT-PCR 和RACE-PCR 技术从黄瓜叶片中获得了一个液泡膜H⁺-PPase 基因,命名为CuPPase,GenBank 注册号为GQ223786。CuPPase 蛋白与南瓜、绿豆同源性最高,分别为94%,92%。生物信息学分析表明,该基因全长2 650 bp,开放阅读框（ORF）2 307 bp,编码768 个氨基酸;CuPPase 蛋白大小约80 kD,理论pI值为5.32。该基因有14 个强的跨膜螺旋结构,PlantCare 分析结果显示该基因序列具有脱落酸诱导、生长素诱导、赤霉素诱导、水杨酸诱导、低温诱导、干旱诱导的顺式作用元件。RT-PCR 表明,CuPPase 在叶和根中表达较高,茎中表达较低。CuPPase表达受盐胁迫以及高温、低温胁迫诱导,但与处理时间有密切关系,其表达均表现先升高后降低的趋势。     

柑橘钙调蛋白cDNA的克隆及序列分析

 以温州蜜柑(Citrus unshiu Marc. ) 幼果cDNA第1链为模板, 参照大麦钙调蛋白基因序列(Accession No. M27303) 合成5p端和3p端引物, 以PCR的方法扩增得到柑橘钙调蛋白cDNA, 将其克隆到PMD182T载体上并进行测序。序列分析表明, 柑橘钙调蛋白cDNA全长453 bp, 共编码148个氨基酸, 与大麦和大豆钙调蛋白基因的同源性均高达83%以上, 所编码氨基酸序列同源性达97%以上。以该cDNA作探针进行点杂交, 得到良好的杂交信号。     

苹果LEAFY同源基因的cDNA克隆与表达分析

 从苹果的果台枝顶芽中克隆了两个长约1.4 kb的cDNA片段，分别定名为AFL1和AFL2。它们的碱基序列在编码区有90%的同源性，但在3’末端非编码区仅有约印％的同源性。它们表达的肽链氨基酸序列与小叶杨、大豆、矮牵牛等有70％以上的同源性，与番茄、金鱼草、拟南芥有近70%的同源性，证明它们是LFY的同源基因。RT-PCR的结果表明，生长期AFL2在萼片、子房、根、茎、叶以及果台枝顶芽中都有表达，而AFL1只在果台枝顶芽中表达；在不同发育时期的果台枝顶芽中，AFL1在顶芽停止营养生长转向生殖生长以后才清晰表达，而AFL2在生长期6~10月都有表达。因此认为苹果中的这两个LFY同源基因虽有共同的起源，但是在功能上存在差异，在花和营养组织的发育中起不同的作用。DNA印迹分析表明，在苹果属及近缘的梨属植物中LFY同源基因是多拷贝的。     

外源Ca~(2+)对莲藕幼苗盐胁迫的缓解效应

以莲藕H_2(花藕品种,盐敏感)为材料,利用NaCl与Ca(NO_3)_2处理3片立叶的幼苗,研究外源Ca~(2+)对缓解植株盐胁迫的生理作用。结果显示:采用NaCl处理后,叶片中叶绿素、可溶性蛋白含量和SOD活性显著降低,而细胞膜透性、丙二醛和脯氨酸含量升高;利用不同浓度的Ca~(2+)进行缓解处理,发现外源施加低浓度的Ca~(2+)后,叶片叶绿素、可溶性蛋白含量和SOD活性均显著提高,脯氨酸含量较之前升高幅度更大,而细胞膜透性和丙二醛含量后期显著降低,说明Ca~(2+)对缓解莲藕盐胁迫具有较好的效果。当Ca~(2+)浓度增加时,缓解作用不明显,甚至出现抑制效果。     

30份莲种质资源的RAPD遗传多样性分析

采用RAPD分子标记技术对30份莲(Nelumbo nueifera Gaertn.)种质资源的遗传多样性进行鉴定.筛选出14对有效引物进行PCR扩增,共产生2 146条带,其中有1 516条为多态性条带,各对引物的平均多态性条带为108.29条,扩增条带的多态率达70.64％.对所得到的30份莲种质资源的RAPD图谱...     

镉和铅在莲藕各器官中累积规律的研究

以在施有不同浓度镉（Cd）或铅（Pb）的土壤中栽培的莲藕（鄂莲5号）为材料,对Cd和Pb在莲藕各器官中的累积规律进行了研究。结果表明：莲藕各器官Cd,Pb的累积量随外施浓度的增加而增加,但不同器官对Cd、Pb的累积规律不尽相同。Cd和Pb在匍匐茎中积累量最高,当土壤外施Cd浓度低于0.6mg/kg、Pb浓度低于250mg/kg时,藕中的积累量较低,但当添加量超过该浓度时,藕中的积累量则急剧上升。     

莲种子防御素基因序列分析及表达载体构建

从莲种子发育中期胚cDNA文库中克隆得到的防御素基因cDNA全长561bp,GenBank登录号为EF421192。分析发现该基因234bp的开放读码框编码77个氨基酸的多肽序列,除信号肽序列外与其它不同来源的植物防御素基因有较高同源性,将其命名为NnDefensin。NnDefensin蛋白带有30个氨基酸的信号肽,具有8个半胱氨酸的高度保守结构等典型的植物防御素特征,成熟肽部分含有γ–硫素蛋白功能结构域。在系统进化上NnDefensin与单子叶植物中的粳稻和小麦的同源蛋白,以及车前草同源蛋白亲缘关系较为接近。通过PCR扩增克隆莲胚防御素基因片段并连接到载体pBI121和带有花生油体蛋白种子特异启动子的载体pAhOleo17.8︰GUS中,成功构建了35S启动子控制的植物表达双元载体pBI121-NnDef和种子特异表达双元载体pAhOleo-NnDef,为该基因的功能鉴定及通过基因工程方法提高转基因植物以及种子的抗病能力奠定基础。     

梁山古莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)的种质资源价值研究

对2013年梁山出土的古莲(命名为梁山古莲)进行了种质资源价值研究。断代分析结果显示,梁山古莲籽距今时间最长约为731 a,入土年代处于我国元朝初期,古莲籽发芽率在90%以上,不同方位取得的莲籽大小存在明显差异;表型分析表明,梁山古莲属于中国莲系大株型少瓣红莲类群,为黄河流域野生莲,古莲群体存在较高的遗传多样性;聚类分析显示,梁山古莲与山东地方品种马踏湖白莲亲缘关系最近。     

僵藕生长过程中茎叶内源激素与多胺含量的变化

采用酶联免疫法 (ELISA)及薄层 -荧光测定法分析了僵藕生长过程中茎和叶中内源激素和多胺含量的变化。结果表明 :僵藕茎、叶中IAA、GA1 3和ZRS 水平一般都明显低于正常藕 ,而ABA水平则一直明显高于正常藕 ,这可能是僵藕生长势弱的原因所在 ;生长后期 ,正常藕茎、叶中IAA水平成倍提高 ,ABA维持低水平 ,而僵藕则IAA维持低水平 ,ABA迅速上升 ,这可能是僵藕早衰的生理原因。内源精胺 (Spm)、腐胺 (Put)和尸胺 (Cad)都普遍高于正常藕 ,且变化幅度大于正常藕 ,提示了内源多胺与僵藕的发生有密切关系。     

藕池专用膜应用对浅水藕产量和商品性状的影响

莲藕产业是余杭区的传统产业,但传统栽培技术存在着挖藕成本高、次品率高,连作障碍严重,且肥料流失严重等问题。为此探索藕池专用膜铺底种植技术,因其防渗漏、保水保肥、莲藕水平生长的优点,达到提高莲藕产量和商品性好,并实现机械化采收,省工节本的效果。     

莲藕生长动态观察

莲藕(Nelumbo nucifera Gaertn)是我国主要水生蔬菜之一,以膨大根状茎(俗称藕)供食用,其营养丰富,深受群众喜爱,也是我国主要出口创汇型蔬菜之一.近些年莲藕的种植面积不断扩大,据估计全国栽培面积在50万～70万hm2[1],仅湖北省栽培面积就有9万hm2,然而有关莲藕生长发育研究鲜见报道.本试验研究了莲藕植株及其叶、莲鞭和藕的生长动态、干物质的积累与分配、叶面积的增长等,以阐明莲藕的生长规律,为莲藕根状茎膨大机理研究及莲藕生产提供理论依据.     

莲藕部分种质资源数量性状的聚类分析与育种应用

对 17个不同地区、不同类型的莲藕资源进行了系统聚类分析 ,将莲藕分为野生资源类、地方品种资源类和改良品种类三大类群。品质性状野生资源最优 ,地方品种和改良品种相当 ;农艺性状改良品种最优 ,地方品种居中 ,野生资源最差     

蔗糖浓度对莲藕试管苗质量的影响

研究了培养基蔗糖浓度对莲藕试管苗驯化的影响。结果表明：随培养基蔗糖浓度从3％～8％递增，试管苗含水量降低，碳水化合物含量增加，且各处理间差异明显。驯化过程中各处理试管苗淀粉含量均明显下降，低蔗糖浓度培养的试管苗可溶性总糖、蔗糖、果糖、葡萄糖含量在驯化过程中持续上升，高蔗糖浓度培养的试管苗的上述糖含量则持续下降，至成活时差异明显缩小。5％蔗糖培养的试管苗驯化过程中含水量及碳水化合物的含量变化均最小，试管苗驯化成活快，成活率最高，达97．3％，成活苗新生根数和地下茎生长速度均极显著优于其他处理，试管苗生长势旺。表明驯化前较高的培养基蔗糖浓度有利于提高试管苗的素质，提高驯化成活率。