用抗原免疫构建分泌兔出血症病毒抗独特型抗体的杂交瘤细胞

用纯化的兔出血症病毒（ｒａｂｂｉｔｈａｅｍｏｒｈａｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,简称,ＲＨＤＶ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。正如网络学说所指出的,从免疫鼠的杂交瘤细胞克隆中,不仅筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ抗体（Ａｂ１）的细胞克隆,同时也筛选出能分泌抗ＲＨＤＶ独特型抗体（ａｎｔｉ－ｉｄｉｏｔｙｐｉｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ,Ａｂ２）的杂交瘤细胞,用抗原而不用单克隆抗体（Ａｂ１）免疫,诱导产生抗独特型抗体（Ａｂ２）是一种具有广阔的应用前景的新技术     

兔出血症病料中病毒核酸成分的分析鉴别

将兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）感染死亡兔肝反复冻融，分别经氯仿抽提，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀浓缩，蔗糖垫底超速离心，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析及蔗糖密度梯度离心，得到纯化的ＲＨＤＶ。电镜观察，ＲＨＤＶ粒子无囊膜，大小为３２～３４ｎｍ。核酸展层法显示，病毒基因组核酸长度约为７．０ｋｂ。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸，在琼脂糖凝胶电泳呈现２条主带；当以λＤＮＡ－ＨｉｎｄⅢ消化物为分子量标准时，它们分别位于相当于２０ｋｂ（Ａ带）和２．０ｋｂ（Ｂ带）的位置。用ＤＮＡｓｅ、ＲＮＡｓｅ及Ｓ１核酸酶消化试验分析表明，Ａ带是一种双股ＤＮＡ，而日带为单股ＲＮＡ。在Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ中只有Ｂ带可以与德国提供的ＲＨＤＶ－ｃＤＮＡ克隆探针发生杂交反应，而Ａ带不与该探针显示任何反应。此外，用相同方法也可从临床健康兔肝得到在电泳中的表现与Ａ带一致的核酸提取物。本研究表明，在我国流行的ＲＨＤ病料中，出现的约７．０ｋｂ的单股ＲＮＡ是ＲＨＤＶ病原特异的。     

从感染细胞的胞核和胞浆分离鉴定出2种核酸型的兔出血症病毒

以南京（ＮＪ）株的成都（ＣＤ）株兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）人工感染家兔,取病死兔肝组织制成组织匀浆,用１％ＮＰ－４０处理,离心将核质粗分后,将离心洗涤的细胞核心及超声波裂解。上清和胞核匀浆分别经氯仿处理,ＰＥＧ沉淀和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析获得纯化病毒,血凝检测表明,不同毒株胞浆和胞核病毒的比例有显著差异,ＮＪ株胞核病毒占优势,ＣＤ株则相反。自胞浆和胞浆病毒样品中分别提核酸,经电泳,ＤＮａｓｅＩ     

环磷酰胺预处理制备兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清

以正常鸡胚尿囊液和环磷酰胺预处理试验兔, 再以Ⅰ型鸭肝炎病毒（Ｄｕｃｋ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ Ⅰ, ＤＨＶ Ⅰ） 标准强毒（ＡＴＣＣ, Ｃ９／Ｄ２） 接种后致死鸡胚的尿囊液, 经灭活、乳化制成油佐剂抗原多次免疫试验兔, 获得了鸡胚中和效价（ＥＰＤ５０） 达１∶３２ 以上的兔抗Ⅰ型鸭肝炎病毒高免血清（ＤＨＶ ⅠＳ） 。     

兔出血症病料中病毒核酸成分的分别鉴别

将兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）感染死亡兔肝反复冻融，分别经氯仿抽提，聚乙二醇（ＰＥＧ）沉淀浓缩，蔗糖垫底超速离心，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析及蔗糖密度梯度离心，得到纯化的ＲＨＤＶ。电镜观察，ＲＨＤＶ粒子无囊膜，大小为３２～３４ｎｍ，核要酸展层法显示，病毒基因组核酸长度约为７．０ｋｂ。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸，在琼脂糖凝胶电泳呈现２条主带，当以λＤＮＡ－ＨｉｎｄⅢ消化物为分子量标准时，它     

兔FDP间接血凝抑制法的建立

兔ＦＤＰ间接血凝抑制法的建立赵立红（张家口农业专科学校兽医系，河北宣化０７５１３１）乔健（北京农业大学兽医学院）在兔病毒性出血症弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）发生机理研究中，为准确测定兔血清中纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰ），将人ＦＤＰ间接血凝抑制法加以...     

兔的饲料营养和饲养标准（连载二）

兔的饲料营养和饲养标准（连载二）（日本）大成清著朱钦龙译２兔的饲养标准２．１西班牙的ＤＣＰ和ＤＥ需要量马德里国立大学Ｊ．Ｃ．ｄｅＢｌａｓ等人（１９８５）选用西班牙大型兔４３２只。供试饲料为不同ＤＣＰ和ＤＥ的１２种饲料，研究ＤＣＰ和能量的利用率。结果，...     

兔感染非致病性兔出血症样病毒的血清转化研究

某商业兔场已４年未发生兔病毒性出血症（ＲＨＤ），在对２３８只兔的ＲＨＤＶ抗体普查中发现兔血清转化现象，且其原因是由一株与ＲＨＤＶ抗原性相关、但无致病性的嵌杯病毒所致。３１日龄断奶仔兔的阳性率为３３．３％，断奶后５～７天、１３～１４天、１９～２０天、３２～３３天的阳性率分别为２７．６％、５６．１％、９０．３％、１００％。种兔血清全为阳性。种兔和刚奶仔兔的ＲＨＤＶ抗体主要是ＩｇＧ。然而，在断奶后１３～１４天却主要是ＩｇＭ和ＩｇＡ。大龄育肥兔ＩｇＭ和ＩｇＡ减少，ＩｇＧ增多。血清转化时未出现ＲＨＤ特异症状。由此可知，肉兔在断奶后不久就感染了这种非致病性病毒。     

杆状病毒表达的兔出血症病毒衣壳蛋白的自我装配,抗原性及免疫原性

用杆状病毒系统表达了兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）衣壳蛋白。表达产物的分析表明，用抗ＲＨＤＶ抗体的ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ试验可证实６０ＫＤ重组蛋白的抗原性。细胞培养上清和纯化蛋白的直接电镜表明，在昆虫细胞表达的衣壳蛋白可自我装配形成空病毒样粒子（ＶＬＰ），其大小和形态与天然病毒类似。这些病毒粒子与抗ＲＨＤＶ的多克隆抗体以及四个识别病毒构象表位的单克隆抗体（ＭＡｂ）均有免疫反应性。表明ＶＬＰ     

瘟热病毒的研究现状

瘟热病毒是副粘病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）麻疹病毒属（Ｍｏｒｂｉｌｉｖｉｒｕｓ）内对食肉目、鳍足目等动物致病的一类相关病原,包括犬瘟热病毒（Ｃａｎｉｎｅｄｉｓ－ｔｅｍｐｅｒｖｉｒｕｓ,ＣＤＶ）、海豹瘟热病毒（Ｐｈｏｃｉｎｅｄｉｓｔｅｍ－ｐ...     

犬瘟热病毒的分子生物学研究进展

犬瘟热病毒的分子生物学研究进展耿志贤田克恭（军事医学科学院实验动物中心，北京１００８５０）李钟铎（军事医学科学院微生物学流行病学研究所）犬瘟热病毒（ｃａｎｉｎｅｄｉｓｔｅｍｐｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＤＶ）是犬瘟热病的病原。自然条件下ＣＤＶ感染食肉目中犬科、...     

传染性法氏囊病毒分子生物学研究进展

传染性法氏囊病病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ　,　ＩＢＤＶ）是鸡的重要传染病病原之一,除了直接引起３周龄～６周龄易感鸡发病死亡外,更为重要的是破坏机体的免疫器官,引起免疫抑制,导致鸡群丧失对其它病原的免疫力,给世界养鸡业造成巨大的经济损失。本文主要从病毒的特性、基因组结构和病毒蛋白及变异几方面对ＩＢＤＶ研究进展进行浅述。１主要特性１.１分类由于ＩＢＤＶ在鸡胚肾细胞上培养出现的细胞病变、对某些理化因素的抵抗力及电镜下形态同呼肠孤病毒（ＲＨ）Ｖ相似,所以一开始被误…     

新城疫病毒分子生物学毒力水平研究进展

新城疫病毒分子生物学毒力水平研究进展肖肖郑增忍王树双综述吴时友审校（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）新城疫病毒（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＮＤＶ）属副粘病毒科副粘病毒属成员,由囊膜、核衣壳和核酸三部分组成,其基因组为１５Ｋｂ的单股...     

用PCR技术从同一兔出血症病料扩增和检出2种病毒核酸

应用 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 技术，对兔出血症病毒核酸作了鉴定。分别设计合成 ２ 对 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增特异性引物，即按兔出血症病毒中国分离的 Ｎ Ｊ株核酸序列合成 １ 对引物（ Ｎ Ｊ引物），按德国分离的 Ｆ Ｒ Ｇ 株核酸序列合成另 １ 对引物（ Ｆ Ｒ Ｇ 引物），进行 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ。从纯化的病毒核酸样品和感染 Ｄ Ｊ Ｒ Ｋ 细胞的病毒核酸样品中，均扩增出 ２ 对引物范围内的特异性核酸片段， Ｎ Ｊ引物扩增产物为 ３６４ ｂｐ， Ｆ Ｒ Ｇ 引物扩增产物为 ５１３ｂｐ。模板用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化后，仍出现 ３６４ ｂｐ 带，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，则此带消失；反之，用 Ｄ Ｎａｓｅ Ｓ１ 消化，出现５１３ ｂｐ 带，用 Ｒ Ｎａｓｅ 消化，则此带消失，证实前者模板为 Ｄ Ｎ Ａ，后者为 Ｒ Ｎ Ａ。 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交试验证实， Ｐ Ｃ Ｒ扩增出的核酸片段与各自的地高辛标记特异性探针发生强阳性杂交反应。由此认为，在兔出血症病毒感染中，同时存在着 ２ 种不同核酸型的病毒。     

兔出血症-魏氏梭菌病-巴氏杆菌病三联苗的研究与应用

通过对兔出血症（ＲＨＤ）、魏氏梭菌病（ＣＷＤ）和巴氏杆菌病（ＰＭＤ）三联氢氧化铝甲醛灭活疫苗（兔三联苗）的研究，制备出了安全有效的兔三联苗。用２ｍＬ／只免疫实验兔，４天后对ＲＨＤ和ＣＷＤ、１４天后对ＰＭＤ均产生良好的免疫效果；２１天后测定，疫苗的平均保护率为ＲＨＤ９７％、ＣＷＤ８６．２％、ＰＭＤ６５．２％；６个月后测定，平均保护率为ＲＨＤ１００％、ＣＷＤ８０％、ＰＭＤ５８．８％。该疫苗的保存期为８～１０℃８个月。在此病流行地区使用兔三联苗免疫家兔１５００万头份，有效地控制了该三种传染病。     

应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒

应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）,检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明,感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％,淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外,还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态,并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。     

应用生物素标记的NDV—cDNA探针检测感染尿囊液中DNV—RNA的初…

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＤＮＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体－Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐ ｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后，即成ＤＮＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＤＮＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ，而不与ＩＢＤＶ－ｄｓＲＮＡ，ＡＩＢＶ－ｓｓＲＮＡ，ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ０ｄｓＤＮＡ、Ｆ     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的特性研究

应用杂交瘤技术获得了１３ 株抗传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 的单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） ,经过检测其中有９ 株ＭｃＡｂｓ 为ＩｇＧ 类, ４ 株为Ｉｇ Ｍ , 这些ＭｃＡｂｓ 与新城疫病毒（ＮＤＶ） 、传染性支气管炎病毒 （ＩＢＶ） 和马立克氏病病毒（ ＭＤＶ） 均无交叉反应, 病毒中和试验表明, 有５株ＭｃＡｂｓ 具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔｔｉｎｇ 试验表明, 这５ 株有中和活性的ＭｃＡｂｓ 识别的抗原位点在ＶＰ２ 。传染性法氏囊病最早于１９５７ 年发现于美国东部特拉华州的甘博罗（Ｇｕ ｍ ｂｏｒｏ） 地区,１９６２ 年由Ｃｏｓｇｒｏｖｅ 首次报道, 此后该病相继在全世界许多国家和地区广泛流行。本试验对通过淋巴细胞杂交瘤获得的１３ 株单克隆抗体进行了生物学特性鉴定, 以期应用于对ＩＢＤ 的研究, 现将试验情况报告如下。     

减蛋综合征病毒全基因组DNA文库的构建及物理图谱分析

Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ａ Ａ２ 株纯化 Ｄ Ｎ Ａ 经 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 ＰｓｔⅠ和 Ｓｐｈ Ⅰ水解后, 分别提取 Ｄ Ｎ Ａ 片段并克隆至ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｋ Ｓ（ ＋ ） 和ｐ Ｇ Ｅ Ｍ３ Ｚｆ （ ＋ ） 载体, 构建了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 全基因文库。根据 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 片段和基因组 Ｄ Ｎ Ａ 电泳迁移率计算, Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 基因组大小为３２９ｋｂ , 通过克隆片段酶谱鉴定, 杂交建立了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 限制性内切酶 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓｐｈ Ⅰ的物理图谱。     

一株无血凝性兔病毒性出血症病毒的分离与鉴定

兔病毒性出血症（RHD）俗称兔瘟,是由兔出血症病毒（RHDV）引起的兔的一种急性、烈性、高度接触性、病毒性疫病,我国农业部兽医局将其列为二类动物疫病。该病传播速度快,发病率和死亡率都很高,兔群中一旦有兔感染该病,则迅速蔓延至整个兔群,给兔场带来毁灭性的灾难。