细菌人工染色体荧光原位杂交技术的应用

目前,覆盖人类、植物、畜禽、微生物等100多种物种全基因组的细菌人工染色体文库在不同时间、不同群体中相继产生,为物种基因资源的保存、基因组学和后基因组学的研究提供了可靠的材料。细菌人工染色体与荧光原位杂交技术的结合能够将物种的大片段基因组DNA杂交在染色体上,确定基因或标记物在染色体上的物理位置,从而成为细胞和分子生物学领域中必不可少的工具。论文对细菌人工染色体荧光原位杂交技术在染色体结构与核型分析、疾病与肿瘤病原学研究、基因和标记物的定位与细胞遗传图谱绘制、基因组比较作图及物种进化中的应用和发展进行了综述。     

基因芯片和荧光原位杂交技术在毒理学的应用

基因芯片技术和荧光原位杂交技术是近几年兴起的分子生物学技术。将其应用于毒理学基因突变的检测及染色体畸变分析等方面，推动了毒理学的研究向着更高层次发展，深入到未曾达到的分子水平。     

染色体荧光原位杂交技术的原理及其应用

荧光原位杂交是现代分子生物学及基因工程中广泛应用的新技术,它可以鉴定核酸分子之间的同源性。原位杂交技术是在核酸分子杂交基础上发展起来的一门技术,染色体荧光原位杂交技术是随着绘制高分辨人类基因组图谱需求而出现的。笔者综述了染色体荧光原位杂交技术的原理、方法,并分析了其应用前景。     

荧光原位杂交法分析披碱草和圆柱披碱草染色体构成

采用荧光原位杂交(FISH)和基因组原位杂交(GISH)技术,对披碱草和圆柱披碱草的染色体组组成和亲缘关系进行了分析,结果表明：(1)披碱草和圆柱披碱草均为异源六倍体,染色体数为2n=6x=42,染色体组组成为StStYYHH,核型类型分别为2A和2B。(2)两种披碱草属植物的H染色体组起源于大麦属,St染色体组起源于拟鹅观草属的不同物种;Y染色体组与St染色体组有共同的祖先。(3)披碱草和圆柱披碱草都有6个5SrDNA位点,和4个45SrDNA位点;两个物种中有1对染色体上同时含有5SrDNA和45SrDNA位点,但5SrDNA和45SrDNA在染色体上的定位和所在染色体组别不同。(4)重复序列pAs1和pSc119.2在两种披碱草染色体上的分布呈现多态性,主要集中于H组,在St和Y组的分布较少,可作为披碱草属植物的细胞学标记,用于区分H组和其他染色体组。(5)两种披碱草均有染色体易位或重组的变异。     

家鸡染色体研究进展

近年来,由于现代分子细胞遗传学技术,尤其是荧光原位杂交(FISH)技术的出现,使家鸡的染色体研究又进入了一个新的高潮.作者从家鸡染色体核型研究简史、显带研究及其现代分子细胞遗传学研究3个方面对家鸡染色体研究进展作一概述,旨在对其有一较系统全面的了解,以促进其进一步研究,并为其它禽类的染色体研究提供参考.     

基因组时代荧光原位杂交技术在家蚕研究中的应用

随着家蚕DNA分子标记和物理图谱的发展,基因组序列的释放,以及EST数据库和BAC文库的构建,FISH技术在家蚕的遗传学、基因组学研究,尤其是物理图谱研究中取得重要进展。本文综述了FISH及相关技术原理及近年在家蚕和部分鳞翅目昆虫研究中的应用,并对其在家蚕及鳞翅目昆虫的研究前景作了展望。     

加州野大麦染色体C-分带、荧光原位杂交及其核型分析

以二倍体加州野大麦(Hordeum californicum)及普通小麦中国春(Chinese spring,CS)-加州野大麦的双二倍体为材料,进行依次染色体C-分带和荧光原位杂交(FISH)分析.结果表明:小麦背景中的加州野大麦染色体都显示较强的末端带,7对染色体之间带的数目和强弱均存在明显差异,可以和普通小麦染色体相互区分开来;以45s rDNA为探针进行荧光原位杂交发现,二倍体和双二倍体中加州野大麦的NOR位点均位于第7对染色体短臂上;基于根尖细胞有丝分裂中期染色体C-分带和原位杂交结果,利用Motic images plus 2.0 ML软件"数码显微图像处理系统"进行核型分析,确定加州野大麦的核型为2n=2x=10 m(2SAT) 4 sm,属于较为对称性核型(Ⅱ A);加州野大麦染色体核型的建立,为利用远缘杂交和染色体工程转移加州野大麦的有利基因奠定了基础.     

荧光原位杂交技术在动物肠道微生物定量中的应用

以16S rRNA为靶序列的寡核苷酸探针荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)已广泛应用于分析环境中复杂的微生物群落构成。作者简要介绍了荧光原位杂交技术的原理和操作方法,对其在动物肠道中微生物鉴定和计数上的应用进行了概述,最后探讨了FISH技术的局限性及其应用前景。     

原位杂交技术及其在动物基因定位上的应用进展

原位杂交技术是８０年代发展起来的一门新的生物技术。目前,在动物基因定位研究方面已得到广泛应用。本广文系统综述了该技术及其在动物基因定位研究方面的应用进展情况。     

荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用

荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测方法,快速诊断动物布鲁氏菌病和牛结核病,利用布鲁氏菌探针Bru-996和结核分枝杆菌探针MTB770,通过优化杂交温度、杂交时间和样品处理等关键条件,确定最佳检测程序;根据已知背景的菌株和临床样品,对Bru-996和MTB770探针的特异性和敏感性进行评价,最终建立了荧光复位杂交诊断方法。结果显示:反应条件优化后,该方法可在4h内完成布鲁氏菌检测;荧光标记Bru-996探针与布鲁氏菌待检菌株的杂交结果均为阳性,而与结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌和大肠杆菌杂交结果均为阴性,并从5个已知背景的组织病料中成功检出布鲁氏菌。牛结核分枝杆菌检测则需要6~8h,杂交前必须对样品用二甲苯和溶菌酶进行处理;MTB770探针可特异性识别并能从牛肺部结节中检出牛结核分枝杆菌。结果表明,荧光原位杂交方法快速、简便,而且Bru-996和MTB770探针分别在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测上具有较高的特异性,可替代传统的病原分离鉴定,作为动物布鲁氏菌病和牛结核病的实验室确诊方法。     

荧光定量PCR技术及其应用研究进展

荧光定量PCR是近年发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量PCR的核心.荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应争特点,是对原有PCR技术的革新,扩大了PCR的应用范围.论文综述了FQ-PCR技术的原理、FQ-PCR实时定量检测系统及其应用.     

原位杂交技术在兽医微生物学中的应用进展

根据探针标记方法的差异,对原位杂交技术在兽医微生物研究中各个阶段的技术原理、应用现状、发展前景以及存在的不足进行了综述.     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术.它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点.文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用.     

荧光定量PCR技术的研究进展及应用

聚合酶链反应(PCR)技术白问世以来,在生物学研究领域内取得了巨大的发展并不断地完善,不仅被广泛应用在基础研究领域内。在疾病诊断等方面也有广泛、深入的研究和应用。在PCR对扩增产物定性鉴别的基础上又发展起来的对模板DNA片段进行     

基于荧光原位杂交草莓属野生种的45S rDNA位点分析

草莓属(n=7)植物的分类、进化研究取得了一定的进展,但分子细胞遗传学证据较少。本研究以来自国内外的8个二倍体种、4个四倍体种和1个五倍体种、1个六倍体种、1个八倍体种,不同品种或类型共48份种质为材料,利用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)对所有材料染色体上的45S rDNA位点进行分析。结果显示,45S rDNA位点数量与倍性相同,主要位于染色体的端部和中部;不同材料中,45S rDNA拷贝数与位置存在差异,可分为以下几种情况：第一,不同位点的拷贝数相近,位置也相同;第二,拷贝数不同,位置相同;第三,拷贝数不同,位置不同;第四,拷贝数相近,位置不同。根据45S rDNA位点位置和拷贝数推断：参试的部分二倍体及所有多倍体均为杂种起源。上述结果可为草莓属植物的分类、进化研究提供一定的参考。     

两种猪肺炎支原体原位杂交检测方法的应用

为了比较研究3种猪肺炎支原体(Mhp)的检测方法,利用已建立的显色原位杂交(CISH)和量子点荧光原位杂交(QD-FISH),并结合PCR方法,检测人工感染Mhp的试验猪、自然感染Mhp的试验猪和疑似感染Mhp的临床样品.结果显示,3种检测方法对人工感染组和自然感染组的检测率均为100％;对临床样品,PCR的检测率为90％,CISH的检测率为70％,QD-FISH的检测率为75％.结果表明,用于检测Mhp感染,PCR是最佳检测方法,但CISH和QD-FISH在Mhp检测和致病机理研究方面具有一定的应用价值.     

鸡染色体标本制备技术条件的优化

染色体是基因的载体，细胞的染色体数目和结构是重要的遗传学指标，基因定位的染色体原位杂交；染色体组型分析；受精过程中染色体的行为；核型观察等这些研究，制备染色体标本无疑是这些实验成功与否的先决条件。     

猪肺炎支原体量子点荧光原位杂交研究方法的建立与应用

利用生物素化的猪肺炎支原体核酸探针和量子点荧光显色系统,对人工感染组、自然感染组和健康对照组的试验猪肺样品,以及临床样品进行量子点荧光原位杂交检测。结果表明：按照探针质量浓度为1mg／L、80～90℃变性10min、37℃杂交10h和QDs—SA复合物浓度为10nmol／L的条件进行猪肺炎支原体的量子点荧光原位杂交检测结果比较理想;而人工感染组、自然感染组和健康对照组样品的QD-FISH检测结果与分离培养结果和PCR检测结果相比,符合率均达到100％刘占床样品的QD-FISH检测结果与PCR检测结果相比,符合率为83．3％。从而证明猪肺炎支原体量子点荧光原住杂交法是一种直观和敏感的检测方法,可以用于猪肺炎支原体的检测、定位和致病机理研究,也为其他病原的研究提供了参考方法。     

染色体分析在兽医领域中的应用

一、家畜的正常染色体核型染色体是遗传物质的载体。各种生物的体细胞和性细胞中,染色体的数目和形态都有专一性。一个个体具有独特的染色体组成,通常可在有丝分裂的中期,根据染色体的数目和形态加以鉴别。染色体的数目常用n表示,n是不同倍性程度的缩写。1n代表单倍体,2n代表二倍体。单倍体指的是一种生物染色体的基数,即性细胞的染色体数性细胞只有一个染色体组;二倍体指的是受精卵和体细胞的两个染色体组,一组来自母方,一组来自父方,家畜均为二倍体动物,其染色体数常写成2n,如猪为38,即写成2n=38。     

荧光定量PCR技术在分子检测上的研究进展

荧光定量PCR技术是近年来发展起来的一种核酸定量技术,因其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确等优点成为核酸检测中的重要工具,作者将其研究进展作一综述,以供参考。