菊迪基氏菌生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM抑菌物质防治效果评价及药剂筛选

采用单因素试验方法优化生防菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D2WM抑菌物质的提取效率,并对抑菌物质粗提取的储藏特性展开研究,同时利用市售药剂对菊迪基氏菌(Dickeya chrysanthemi)进行室内药剂筛选,对比生防菌剂与市售药剂的防治效果。结果表明,通过单因素优化提取生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM中的抑菌物质,发现最佳提取溶剂为正丁醇,有机溶剂与发酵液体积比为1∶7、提取时间为0.5 h;抑菌物质具有良好的热稳定性和紫外光照稳定性,在处理温度达100℃,紫外光照射12 h时,抑菌效果均没有显著性下降,抑菌圈仍有23 mm;当抑菌物质储存180 d后,抑菌圈大小仍有16.33 mm。生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物对黑腐果胶杆菌、胡萝卜软腐果胶杆菌、菊迪基氏菌、丁香假单胞菌和黄单胞菌等植物病原菌均有良好的抑菌效果。测定的19种药剂中对菊迪基氏菌有良好抑制作用的仅有新田秀才6号、中生菌素、噻霉酮和氯溴异氰尿酸4种;其中,以生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物作为对照药剂,发现其抑菌效果高于噻霉酮和氯溴异氰尿酸。     

解淀粉芽孢杆菌L-S60生物学特性及其固态发酵工艺研究

以优良植物生防菌解淀粉芽孢杆菌L-S60为研究对象,通过单因素试验研究酸碱、盐浓度、温度对该菌株生长的影响;检测解淀粉芽孢杆菌L-S60的产酶和抑菌特性;并研究优化解淀粉芽孢杆菌L-S60的固态发酵工艺。结果表明:解淀粉芽孢杆菌L-S60具有较宽的酸碱耐受性,盐的质量分数10%时菌落数会显著下降,80℃以下菌落数无明显变化。解淀粉芽孢杆菌L-S60能产生蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶,且对多种病原真菌有抑制作用。L-S60的最佳固体发酵条件为:温度35℃、接种量30%、料水质量比1∶0.45、装瓶量40%和发酵时间42h;最佳固体培养基组成为,m(花生饼粉)∶m(麦麸)∶m(棉粕)=53∶35∶12,外源物质蛋白胨、葡萄糖和MgSO4·7H2O添加量分别为3.00、2.00和0.20g/kg,此时,解淀粉芽孢杆菌L-S60菌落数达到2.42×1010 CFU/g。解淀粉芽孢杆菌L-S60具有很好的开发利用价值。     

内生枯草芽孢杆菌CN181发酵条件优化

为了提高枯草芽孢杆菌CN181菌株在发酵液中的数量,本试验通过采用单因子试验和正交试验对枯草芽孢杆菌CN181的发酵培养基和发酵条件进行优化和筛选。通过单因子试验得出,玉米粉为最适碳源,豆粕为最适氮源,K~+和Na~+为最适金属离子;正交试验法得到了发酵液中各组分的最佳含量,分别是:玉米粉15.0 g·L~(-1)、豆粕10.0 g·L~(-1)、K_2HPO_4 2.0 g·L~(-1)和NaCl 2.0 g·L~(-1);在确定了发酵培养基的含量后,对CN181菌株的最适培养条件进行了优化,其最佳条件为:发酵培养基的初始pH值8.0、250 m L摇瓶装液量30 m L、接种量2%(体积分数)、培养温度30℃、转速180 r·min-1、培养时间24 h。     

激素对冰灯玉露不定芽和不定根分化的影响

为了建立冰灯玉露组培快繁体系,以冰晶玉露的叶片为外植体,在含有不同激素的培养基上进行了不定芽诱导、茎的伸长培养和不定根的诱导。结果显示:在MS+BA 1mg·L~(-1)+IAA 0.5mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)分化培养基上培养60 d后,可以100%诱导出不定芽,每株产生的不定芽数量为30个;在MS+BA 0.25 mg·L~(-1)+IAA 0.5 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)茎伸长培养基上培养30 d后,茎长的最高,茎平均长度为3.4 cm;在MS+NAA 0.2mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)的生根培养基上培养30 d后,生根率100%,单株平均生根数最高(6.4个),根系粗壮(平均根长2.4 cm)。     

白芨种子萌发形态学观察及组培快繁体系的建立

为了建立白芨的组培快繁体系,在实验室条件下,利用显微镜对白芨种子的萌发过程进行了观察,同时针对白芨无菌种子萌发、丛生芽增殖和壮苗生根各阶段,筛选较适宜的培养基类型、激素种类和含量、添加剂种类和用量。结果表明,白芨种子萌发和原球茎发育被划分为5个阶段,以1/2 MS为基础培养基,添加0.5 mg·L~(-1) 6-BA、0.2 mg·L~(-1)NAA及200 g·L~(-1)土豆泥,萌发率可达83.47%±3.11%;基本培养基中添加10 g·L~(-1)蔗糖、0.5 mg·L~(-1)NAA、75 g·L~(-1)香蕉泥和100 m L·L~(-1)椰子汁,适合白芨幼苗壮苗生根。     

解淀粉芽孢杆菌T1增殖培养基配方及培养条件优化

以解淀粉芽孢杆菌T1为研究菌种,从5种培养基中选出最有利于其生长的基础发酵培养基,并通过单因子试验和正交试验,对基础发酵培养基的配方及发酵条件进行了优化。结果表明,解淀粉芽孢杆菌T1的最优培养基配方为复合氨基酸营养液1%、蛋白胨1.5%、糖蜜5%、可溶性淀粉2.5%。最优培养条件为pH 7.0,装瓶量80 mL/250 mL、接种量5%、温度37℃、摇床转速180 r/min、发酵时间36 h。优化后的培养液中解淀粉芽孢杆菌T1活菌数由1.4×109cfu/mL增加至3.5×109cfu/mL。     

春羽细菌性软腐病的病原菌鉴定

对广东省中山地区近年来新发生的春羽(Philodendron selloum)细菌性软腐病病原菌进行了分离、致病性测定和16S rDNA序列分析.结果表明,分离的致病菌CF-1株与GenBank中10株迪基氏菌(Dickeya spp.)(其中包括7株菊迪基氏菌(D.chrysanthemi)、1株达旦迪基氏菌(D.dadantii)、1株万年青迪基氏菌(D.dieffen-bachiae)和1株玉米迪基氏菌(D.zeae))和2株胡萝卜果胶杆菌(Pectobacterium carotovora)的序列相似性超过99%,经系统发育树分析,该病菌与菊迪基氏菌(D.chrysanthemi)在同一分支上,因此将引起春羽细菌性软腐病的病原菌鉴定为菊迪基氏菌(Dickeya chrysanthemi).分离获得的另外1株致病菌ZSC-2株为次要病原菌,初步鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).     

素心建兰无菌播种快繁技术研究

以素心建兰种子为外植体,通过基本培养基(1/2MS、花宝1号、改良MS)、植物激素(6-BA、TDZ、NAA)等关键因子对素心建兰种子萌发、根状茎增殖、分化等各培养阶段影响的试验,探讨了素心建兰无菌播种快繁关键技术。结果表明:种子无菌萌发较适宜的培养基配方为1/2MS+6-BA3.0 mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)+水解乳蛋白2.0g·L~(-1)+活性碳1.0g·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1);根状茎较适宜的增殖培养基配方为改良1号+TDZ 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)+活性碳0.5g·L~(-1)+白糖30g·L~(-1),45d增殖系数高达7.3;根状茎接种于改良1号+6-BA 2.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+白糖30g·L~(-1)培养基上分化培养45d后,再转入1/2MS+IBA 0.5mg·L~(-1)+活性碳0.5g·L~(-1)+白糖20g·L~(-1)培养基上培养60d,可诱导形成完整植株,芽分化率为86.3%,生根率为100.0%。     

利用玉米秸秆酶解液发酵胶质芽胞杆菌WY120的研究

胶质芽胞杆菌WY120是微生物肥料生产常用菌株,传统的生物钾肥菌剂发酵生产的主要原料是采用淀粉、蔗糖和葡萄糖等。以玉米秸秆为原料,通过与淀粉蔗糖培养基发酵培养胶质芽胞杆菌的比较研究,探讨了玉米秸秆酶解液作为碳源发酵生产胶质芽胞杆菌的可行性。结果显示,玉米秸秆酶解液作为碳源发酵生产的胶质芽胞杆菌,其活菌数为3.52×108 cfu/mL,是淀粉蔗糖培养基的1.63倍。秸秆酶解液培养基的优化试验结果显示,其最佳初始葡萄糖浓度为15 g/L,活菌数可达到3.95×108 cfu/mL。当转速为250 r/min,pH控制在7.0~7.2时,5 L发酵罐的试验结果显示,其活菌数高达6.76×108 cfu/mL,是摇瓶培养的1.71倍。研究结果表明,玉米秸秆可替代传统的淀粉蔗糖为碳源发酵生产胶质芽胞杆菌,为玉米秸秆资源化利用提供了一种新途径。     

解淀粉芽孢杆菌LZN01对西瓜专化型尖孢镰刀菌的抑制效应

西瓜专化型尖孢镰刀菌(FON)是西瓜枯萎病的病原菌,生物防治是控制西瓜枯萎病的重要手段。研究解淀粉芽孢杆菌LZN01对FON的抑制效应。试验结果表明,解淀粉芽孢杆菌LZN01对FON的抑菌率为57.07%;FON孢子悬液与解淀粉芽孢杆菌LZN01发酵上清液按体积比1∶1混合培养6、12、24 h,孢子萌发抑制率分别为86.21%、67.50%、56.04%,抑制率随时间的增加呈下降趋势;经解淀粉芽孢杆菌LZN01发酵上清液处理,通过扫描电镜观察发现FON菌丝细胞膨大且畸变,菌丝表面严重受损;温度在-20℃～60℃之间,pH值在4～9之间,解淀粉芽孢杆菌LZN01的发酵液抑菌效果稳定;解淀粉芽孢杆菌LZN01发酵上清液抑菌能力稳定。综上所述,解淀粉芽孢杆菌LZN01对FON具有较好的抑制能力,且抑菌效果稳定,在西瓜枯萎病生物防治方面具有较大的开发和应用价值。     

生防枯草芽孢杆菌210发酵工艺优化

采用响应面法,优化抗真菌的枯草芽孢杆菌210的发酵工艺,提高芽孢产量。结果显示,影响芽孢产量最主要的3个因素为玉米粉、蛋白胨和KH_2PO_4用量,最佳发酵培养基配方为:玉米粉10.75 g·L~(-1)、黄豆粉9.00 g·L~(-1)、蛋白胨6.97 g·L~(-1)、KH2PO40.66 g·L~(-1)、Na Cl 4.00 g·L~(-1)、MgSO_4·7H2_O 0.60 g·L~(-1)、Ca Cl_23.00 g·L~(-1)、MnSO_4·H_2O 0.60 g·L~(-1)。基于优化配方通过单因素优化试验,确定最佳发酵条件为:培养温度31℃、装液量30 m L·250 mL~(-1)、接种量4%。枯草芽孢杆菌210在上述优化后的条件下培养,芽孢产量达到1.64×10~(10)cfu·mL~(-1),较优化前提高6.5倍。     

文心兰杂种胚培养研究

以文心兰‘红狐狸’与‘百万金币’杂种胚为外植体,采用种胚→原球茎→完整植株→移栽的途径,探讨植物生长调节剂、有机添加物等因素对文心兰杂种胚萌发、原球茎分化、生根等各阶段的影响,建立文心兰杂种胚离体培养及植株再生技术。结果表明,适宜萌发的培养基为花宝+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+CM 150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),培养90~100d后相对萌发率为155.6%,原球茎基本不增殖,利于叶的分化;适宜分化的培养基为花宝+6-BA 0.1mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1),分化率显著最高,为87.8%,添加马铃薯泥能显著提高分化率,促进芽苗的粗壮;将分化的芽苗在花宝+NAA 0.2mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.5g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1)培养基上培养40d后生根率为100%,且根系发达,植株健壮;生根苗炼苗后以水苔作为基质,移栽成活率达91.7%。     

红掌‘香妃’组织培养与快繁技术

以红掌‘香妃’茎尖为外植体,进行‘香妃’组培快繁技术研究。结果表明,茎尖的最佳消毒方法为0.1%Hg Cl_2处理20 min,污染率可降低到71.7%;初代培养基为MS+30 g·L~(-1)蔗糖,萌发率可达90.0%;不定芽最适继代增殖培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖,增殖系数达3.47,芽苗生长健壮;生根培养以1/2 MS+0.4 mg·L~(-1)NAA+20 g·L~(-1)蔗糖为最佳培养基,生根率可达100%,根系发达。     

秋石斛离体快速繁殖技术研究

以秋石斛‘三亚阳光’幼芽为外植体,采用丛生芽诱导途径,并利用正交设计法,探讨基本培养基(花宝1号、改良1#、改良2#、改良3#)、植物生长调节剂(6-BA、NAA、IBA)、白糖等对其丛生芽诱导、增殖、生根等关键环节的影响,以期建立秋石斛‘三亚阳光’丛生芽组培快繁技术。结果表明:各试验因素对秋石斛丛生芽增殖影响的主次关系为基本培养基6-BANAA白糖;筛选出丛生芽适宜的增殖培养基配方为改良2#+6-BA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)+白糖30.0g·L~(-1)+琼脂粉3.0g·L~(-1)+卡拉胶3.0g·L~(-1),50d平均增殖系数达6.25;筛选出适宜生根的培养基配方为改良3#+NAA 0.3mg·L~(-1)+IBA 0.5mg·L~(-1)+活性炭0.5g·L~(-1)+香蕉泥100.0g·L~(-1)+白糖20g·L~(-1)+琼脂粉3.6g·L~(-1)+卡拉胶3.6g·L~(-1),生根率为100.0%;试管苗移栽60d成活率达96.5%。     

红阳猕猴桃带芽茎段再生体系的建立

为建立红阳猕猴桃快速繁育高效再生体系,以带芽茎段为外植体材料,通过诱导带芽茎段直接出芽,研究不同浓度激素的MS培养基对腋芽萌发、不定芽增殖及生根的影响。结果表明:最适宜带芽茎段腋芽萌发的培养基是MS+1.0mg·L~(-1) 6-BA+0.1mg·L~(-1) NAA,萌芽率达88.37%。在MS+1mg·L~(-1) ZT+0.1mg·L~(-1)NAA培养基上,不定芽增殖效果最好。1/2MS+0.8mg·L~(-1) IBA培养基最利于不定芽诱导生根,根系发达,再生苗长势健壮。     

1株解淀粉芽孢杆菌发酵培养基的设计及发酵条件的优化

[目的]为解淀粉芽孢杆菌的应用提供科学依据。[方法]从最佳碳源、氮源、初始pH值、发酵时间、发酵温度、接菌量和装液量的确定出发,针对一株新发现的解淀粉芽孢杆菌SAB-1进行发酵培养基的设计及发酵条件的优化。[结果]从8种不同的碳源和氮源中确定了长效碳源水溶性淀粉、长效氮源棉籽粉与速效碳源葡萄糖、速效氮源酵母浸膏。并优化了基础发酵培养基的发酵条件：温度31℃、转速180 r/min、发酵时间26 h、初始pH值6.0、接菌量1%、装液量50 ml/250 ml。该条件下发酵后菌体产量为46.0×109/ml。[结论]该解淀粉芽孢杆菌在设计发酵条件下基本达到了工业规模化生产的要求。     

不同培养条件对菜用大黄组培苗玻璃化的影响

为预防菜用大黄玻璃化苗的产生、提高组培苗的培养质量,以菜用大黄丛生芽为外植体,以1/2 MS为基本培养基,研究了蔗糖、琼脂、6-BA对菜用大黄组培苗玻璃化现象的影响,同时测定了玻璃化苗与正常苗的生理指标差异。结果表明:适于菜用大黄组培苗最大增殖及玻璃化率最小的培养基组合是添加30g·L~(-1)蔗糖+6g·L~(-1)琼脂+1.0mg·L~(-1) 6-BA+1.0mg·L~(-1) NAA的1/2 MS培养基;正常苗的可溶性糖和可溶性蛋白含量明显高于玻璃化苗,而玻璃化苗的组织含水量比正常苗的略高。     

番茄灰霉病菌室内毒力测定及药效试验

【目的】研究解淀粉芽孢杆菌对番茄灰霉病的防治效果,为该药剂的应用提供参考。【方法】采用菌丝生长速率法和孢子萌发法,分别测定了解淀粉芽孢杆菌(WP)、枯草芽孢杆菌(WP)、40%多菌灵(WP)、50%异菌脲(WP)和40%嘧霉胺(WP)对番茄灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用及有效抑制中质量浓度(EC50);采用盆栽试验和田间试验,分别测定了以上5种药剂对番茄灰霉病的防治效果。【结果】解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、40%多菌灵、50%异菌脲和40%嘧霉胺对番茄灰霉病菌菌丝生长抑制的EC50分别为946.28,757.19,75.36,8.95和5.53μg/mL,对孢子萌发抑制的EC50分别为1 665.56,1 416.16,241.90,37.32和21.35μg/mL。盆栽试验结果显示,解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、40%多菌灵、50%异菌脲和40%嘧霉胺750倍液的保护效果分别为68.47%,70.14%,74.18%,74.13%和80.63%。田间试验结果显示,解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、40%多菌灵、50%异菌脲和40%嘧霉胺750倍液的防治效果分别为63.37%,64.83%,69.56%,73.49%和75.55%。【结论】解淀粉芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的室内毒力作用和田间防治效果与枯草芽孢杆菌相当,可以作为田间防治番茄灰霉病菌的一种辅助药剂。     

番茄枯萎病拮抗细菌S13产芽孢发酵培养基及发酵条件优化

[目的]提高番茄枯萎病菌拮抗细菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliauefaciens)S13的芽孢数量和芽孢产率.[方法]采用单因素和正交试验,研究不同的氮源、碳源、pH、温度、培养时间对解淀粉芽孢杆菌形成芽孢的影响.[结果]确定解淀粉芽孢杆菌产芽孢培养基的最佳组分为(g/L):玉米粉0.4,酵母膏0.1,玉米浆1.25,KH2P040.1,K2 HP04 0.1,MgS04.7H20 0.05.对发酵条件进行了研究,产芽孢最适pH为7.0,最适温度为35℃,最适时间为26 h.[结论]通过优化培养基组分和培养基条件,1 000 L罐发酵液中芽孢数达到4.9×109cfu/mL,芽孢产率为90;,为进一步该菌株在复合生物肥中的应用打下基础.     

辽藁本内生细菌ZHAB63鉴定与拮抗菌筛选

采用组织块法,从健康辽藁本中共分离出64株内生细菌,经初筛和复筛,菌株ZHAB63对11种常见中药材病原菌拮抗率均在50.00%以上(P0.01),根据菌株形态特性、16SrDNA基因序列测定以及系统发育树初步鉴定发现,菌株ZHAB63为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);采用L9(34)正交设计试验优化该菌株发酵培养基及发酵条件,确定液体发酵最适培养基为:蔗糖15.0 g·L-1,酵母粉20.0 g·L-1,蛋白胨20.0 g·L-1,硫酸镁5.0 g·L-1;最佳发酵条件:温度30℃,pH 6.5,转速180 r·min-1,培养时间48 h。研究表明,辽藁本中内生细菌资源丰富,以其研制新配方生物农药有待深入开发。