环丙沙星偶联物的制备及其产物的鉴定

采用碳二亚胺法,制备了环丙沙星-小牛血清蛋白偶联物,评价了pH、环丙沙星和碳二亚胺浓度对偶联结合比率的影响。同时采用红外光谱、紫外光谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱方法对偶联产物的基团、分子量等特征进行分析鉴定。正交试验结果表明,pH对环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联结合比率具有显著性差异,碳二亚胺和环丙沙星浓度差异性不显著。在pH5．0,碳二亚胺和环丙沙星浓度分别为60mg/mL和5mg／mL的条件下,环丙沙星-小牛血清蛋白偶联结合比率为30：1。该方法条件下的偶联反应成功。结论：该方法可用于环丙沙星-小牛血清蛋白的偶联,且简便易行。     

鼠源环丙沙星多克隆抗体的制备

为了制备环丙沙星(CPLX)多克隆抗体,将修饰成功的CPLX-NH2分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备完全抗原—CPLX-NH2-BSA和CPLX-NH2-OVA,用CPLX-NH2-BSA免疫小鼠,获得了高效价的环丙沙星多克隆抗体.     

牛脑钙调素的分离纯化、鉴定及其免疫原制备

[目的]从牛脑中分离纯化钙调素(CaM),并进行生化鉴定,同时用碳二亚胺法制备CaM偶联免疫原.[方法]以phenyl-Sepharose层析法从牛脑中分离纯化CaM,用PDE法检测其活性,以SDS-PAGE、PAGE检测其分子量并观察CaM有无Ca~(2+)结合时的电泳行为,检测其紫外扫描光谱,同时用交联剂碳二亚胺制备CaM偶联抗原进行动物免疫,并用间接Elisa法检测动物血清免疫效价.[结果]纯化后的CaM对PDE有明显的激活作用,电泳结果显示为均一条带,分子量约为17.3 kDa,在SDS-PAGE中,CaM结合Ca~(2+)时比未结合Ca2+时迁移率快;而在PAGE中,迁移率在结合Ca~(2+)比未结合Ca~(2+)时慢;紫外光谱扫描显示约在251、260、267、272 和283 nm有5个吸收峰,动物血清免疫效价为1∶800.[结论]用phenyl-Sepharose层析法纯化CaM和用碳二亚胺法制备CaM偶联抗原是成功的.     

碳二亚胺法制备阿莫西林人工抗原及其鉴定

合成、鉴定了阿莫西林(amoxicillin,AMO)人工抗原,并通过动物免疫法生产了亲和力高、特异性好的鼠源AMO多克隆抗血清。采用碳二亚胺(EDC)法将AMO分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,合成完全免疫抗原AMO-BSA和检测抗原AMO-OVA,经紫外分光光度法和SDS-PAGE以及动物免疫进行鉴定。结果表明,偶联后的紫外吸收峰与BSA和AMO相比都发生了一定的位移,AMO-BSA在276nm处出现最大吸收峰,BSA的泳动速度大于AMO-BSA。免疫后获得的3只小鼠多抗血清,通过间接竞争ELISA测定,效价可达1×10-4以上,1号小鼠半数抑制浓度(IC50)为573.75ng/mL,敏感性较好。AMO完全人工抗原的合成以及鼠源多克隆抗体血清的制备,为AMO单克隆抗体的制备奠定了基础。     

氧氟沙星人工抗原的合成及鉴定

采用碳二亚胺法制备了氧氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)的结合物,通过FeCl3显色反应,紫外扫描以及动物免疫证明了人工抗原的成功合成。经紫外光谱法测定,每分子牛血清白蛋白连接的氧氟沙星分子数为11.16个;每分子卵清蛋白连接的氧氟沙星分子数为5.9个。     

左氧氟沙星人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将左氧氟沙星（LVL）与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备合成抗原BSA LVL,并用作免疫抗原,经紫外扫描法和聚丙烯酰胺电泳法对其进行鉴定,并测得偶联的结合比。结果表明,通过紫外扫描和聚丙烯酰胺电泳法的测定证明偶联成功,偶联的结合比为6∶1。用BSA LVL免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗上清（pAb）效价,获得高效价的pAb,为进一步制备左氧氟沙星单克隆抗体提供良好的免疫原。     

环丙沙星单克隆抗体的制备

【目的】制备环丙沙星(Crprofloxacin,CPFX)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行鉴定,为畜产品CPFX残留的快速检测提供技术支持。【方法】采用碳二亚胺法(EDC),将载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA)分别与CPFX偶联合成免疫抗原CPFX-BSA和包被抗原CPFX-OVA,经紫外(UV)扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术筛选分泌CPFX mAb的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备CPFX mAb,并对其染色体核型、效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】UV和SDS-PAGE鉴定结果表明,人工抗原偶联成功;免疫的5只小鼠血清抗体效价均达到了1∶105左右,其中4号小鼠血清CPFX抑制效价较高且IC50最低(17.21μg/L),融合后筛选出1株敏感特异的杂交瘤细胞,命名为3D2。3D2细胞培养上清效价为1∶(1.28×103),腹水效价为1∶(1.6×105)。CPFX mAb对CPFX的IC50为9.95μg/L,对恩诺沙星的交叉反应率为128.39%,与其他同系的喹诺酮类抗生素的交叉反应率很低。【结论】获得了高效价、敏感、特异的抗CPFX mAb,为CPFX残留的快速检测奠定了技术基础。     

培氟沙星人工抗原的合成与鉴定

【目的】制备培氟沙星(Pefloxacin,PEF)完全抗原,并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】以培氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)为材料,用碳二亚胺(EDC)法制备培氟沙星-牛血清白蛋白完全抗原(PEF-BSA),变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及紫外扫描(UV)检测其免疫学特性;利用PEF-BSA免疫BALB/c小鼠,无菌条件下收集血清,用间接ELISA测定多抗血清(pAb)效价。并用同样的方法制备和鉴定培氟沙星-鸡卵清白蛋白完全抗原(PEF-OVA)。【结果】培氟沙星与牛血清白蛋白及鸡卵清白蛋白偶联成功,PEF-BSA偶联比为8∶1,PEF-OVA偶联比为6∶1。间接ELISA测得多抗血清效价均达到4 000以上,得到了较好的免疫效果。【结论】成功得到了培氟沙星完全抗原,该抗原具有较强的特异性及良好的敏感性。     

天然产物分析鉴定

逆流色谱技术在植物药活性部位分离方面的应用;离心分配色谱技术及其在天然产物分离中的应用;半边旗中二萜类化合物的超临界CO2萃取及HPLC-MS分析;苦参药材提取方法的LC／MS研究;HPLC法测定川产苦丁茶中有效成分齐墩果酸的含量.     

环丙沙星多克隆抗体的制备

用合成的CPLX-BSA偶联物免疫兔子,制备CPLX多克隆抗体。用ELISA方法检测抗血清效价。结果表明,2只兔子中1只产生了高效价的抗血清,另1只产生的效价较低。说明用合成的CPLX-BSA偶联物免疫兔子可获得高效价的环丙沙星抗血清。     

半抗原-载体蛋白偶联物的三种电泳鉴定方法

【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致。【结论】3种电泳方法各有优缺点,非变性凝胶电泳简便、廉价、有效,较适合普通实验室使用。     

天然产物分析鉴定

HPLC法研究黄连中表小檗碱等五种生物碱的含量;HPLC法测定银黄制剂中绿原酸的含量;降香抗氧化成分的提取及活性研究;苍术挥发油成分GC-MS分析;紫花前胡挥发油的多种组分的结构表征及其保留时间的估计和预测.     

天然产物分析鉴定

中药指纹图谱共有峰的理论识别——W检验判别方法；HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷的含量及皂苷类成分指纹图谱初步研究；HPLC测定白桦树皮中自桦酯醇的含量；杨树皮不饱和脂肪酸乙酯化学组成及其药效；微柱HPLC法测定苦荞中芦丁的研究。     

环丙沙星对玉米生长的影响及其累积残留特征

[目的]为了解喹诺酮类抗生素环丙沙星对玉米生长的影响。[方法]采用玉米盆栽试验,探讨了鸡粪中环丙沙星抗生素对玉米生长的影响及其在玉米体内的残留特征。[结果]环丙沙星对玉米的株高、根长、茎叶、籽粒的干重及净光合速率、气孔导度和蒸腾速率具有明显的抑制作用,环丙沙星分别迁移至玉米根、茎和叶中,但未迁移至玉米籽粒中,环丙沙星在玉米体中的残留特征为:叶茎根。[结论]通过此研究,可知环丙沙星对玉米生长产生明显的抑制作用,而随着施肥量的增加,环丙沙星对玉米生长的抑制作用和在玉米器官中的残留率趋于减弱。     

化学计量学辅助紫外分光光度法同时测定依诺沙星和环丙沙星

在pH6.5的HAC-NaAc缓冲溶液中,铝能分别与依诺沙星(ENX)和环丙沙星(CPLX)形成络合物,其λmax分别为267nm和276nm,两者紫外吸收光谱严重重叠;本文用偏最小二乘法辅助紫外分光光度法法不经分离,同时测定了模拟样中依诺沙星和环丙沙星,ENX和CPLX的平均回收率分别达98.5%和99.9%,相对标准偏差RSD分别为2.5%和3.5%.     

产十八碳二烯酸真菌的菌种筛选与鉴定

为了筛选生产多不饱和脂肪酸的真菌,经菌株分离培养,采用苏丹黑B染色法初筛、摇瓶法复筛的方法,从土壤中筛选得到16株具有较好合成油脂能力的菌株,其中,产油量和脂肪酸组成以菌株银2.31和11.3的C18∶2较高,经鉴定均为青霉属。     

诺氟沙星人工抗原的合成

采用碳二亚胺(EDC)法将诺氟沙星(NFLX)分别与载体蛋白BSA和OVA进行偶联。用于制备免疫抗原NFLX-BSA和包被抗原NFLX-OVA。通过对产物进行紫外扫描和SDS-PAGE,证明半抗原与载体偶联成功。以免疫原NFLX-BSA免疫BALB/C小鼠45 d后,通过间接ELISA方法检测效价达1:32 000。这一结果为进一步制备抗NFLX单克隆抗体提供了良好的免疫原。     

精氨酰甘氨酰天门冬氨酸三肽的合成

以L-精氨酸、L-甘氨酸、L-天门氨酸为原料,采用二环己基碳二亚胺(DCC)法合成了Arg-Gly-Asp(RGD)。Z-Arg(NO2)-OH经偶联剂活化与H-Gly-OMe.HCl缩合,水解后得到Z-Arg(NO2)-Gly-OH;产物与H-Asp(OBzl)-OBzl.TosOH偶联得到全保护多肽,经Pd-C/H2还原为Arg-Gly-Asp。     

L-苯丙氨酸与精左氨基物偶联反应的研究

采用叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Z)和芴甲氧羰基(Fmoc)这3种保护基保护苯丙氨酸的氨基,顺利得到3个保护的苯丙氨酸(Ⅲa-c);保护的苯丙氨酸与精左氨基物(Ⅱ)进行偶联,较高收率地合成了3个未见文献报道的目标分子(Ⅳa-c),产物的结构通过IR,1H NMR,13C NMR测试得到了验证.对氨基酸的保护及偶联反应的条件进行了优化.

Abstract：

With butyloxycarbonyl (Boc), benzyloxycarbonyl (Z) and fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc)as protecting groups, three amino group-protected L-phenylalanines were successfully obtained. Aided by different coupling reagents, three new conjugated products of the amino group-protected L-phenylalanines with chloramphenicolbase were synthesized with a yield of 70%-78%. The chemical structures of the new compounds were confirmed by IR, 1H NMR, and 13C NMR.The conditions for the reactions mentioned above were optimized.