蜡蚧轮枝菌固体发酵基质优化组合正交筛选

蜡蚧轮枝菌菌株VLFNL95经 5种单一固体基质和 7种一般组合固体基质的发酵 ,分析比较其产孢量和分生孢子活力 ,初筛出麦麸单一基质和玉米碎粒 +黄豆饼粉 +磷酸盐组合基质为最佳发酵基质 ,两者的产孢量很接近 ,孢子活力较高。选取黄豆饼粉、玉米碎粒、磷酸盐和谷壳为 4个组分因子 ,每个因子分别设有不同质量比例的 3个水平进行正交设计。通过对 9种正交配方发酵试验 ,筛选出 3号为最佳组合配方 ,其分生孢子产出量最高为6.90×10¹⁰个/g ,比初筛出的前 2个最佳基质提高约 1倍 ,孢子萌发率为 95.04%。     

基于聚氨酯海绵载体的棘孢木霉固体发酵培养基筛选

以棘孢木霉Trichoderma asperellum THGY-01(CGMCC No:22422)为试验菌株,对其在聚氨酯海绵载体上固体发酵产孢的培养基种类、浓度及促进产孢元素进行了筛选与优化.以聚氨酯海绵载体的单位质量产孢量为指标,通过单因素试验法对11种碳源、6种氮源和14种无机盐(8种含大量元素,6种含微量元...     

简青霉CEF-818固体发酵工艺优化

简青霉Penicillium simplicissimum CEF-818发酵产物能够有效的防治由大丽轮枝菌Verticillium dahliae引起的棉花黄萎病,为获得简青霉CEF-818最佳的发酵条件,本研究采用单因素和正交试验方法对简青霉CEF-818固体发酵培养基的组成以及发酵条件进行了优化。结果表明,简青霉CEF-818固体发酵最适培养物为麦麸,其他添加物为葡萄糖、尿素和氯化钾,添加量按麦麸的质量比分别为2.5%、0.6%和0.6%（M/M）,料水比为1：0.5,固体发酵最佳的培养条件为液体接种量为5%（V/M）、初始pH为7、物料厚度为2 cm、培养温度为28℃、培养时间为7 d。在此条件下,简青霉CEF-818的产孢量为8.28×10⁹ CFU/g。     

棘孢木霉DQ-1分生孢子固体发酵优化及其对4种作物幼苗生长的影响

以麦麸、玉米粉、稻壳、秸秆、甘蔗渣等固体基质为原料,采用单因素和正交试验,对棘孢木霉DQ-1分生孢子固体发酵基质和发酵条件进行了筛选和优化;并通过盆栽试验研究了其发酵产物对黄瓜、辣椒、番茄和西瓜幼苗生长的影响.结果 表明:以单一麦麸为发酵基质时,棘孢木霉DQ--1产孢量最大,发酵5d产孢量为1.51×109 CFU/g...     

莱氏野村菌固体发酵培养基筛选与发酵条件优化

为探索适宜生产莱氏野村菌分生孢子的培养基及培养条件,利用单因素试验对大豆、小麦、燕麦、大米等材料进行筛选,并优化发酵条件。结果表明,不同基质对莱氏野村菌分生孢子产生、孢子活力、抗逆性和毒力有明显影响。莱氏野村菌在大豆上的产孢量和孢子活力明显高于其它三种基质,但小麦上培养的孢子抗逆性和毒力明显高于其它处理。小麦预浸泡12h后进行发酵,产孢量比对照提高25.9%;小麦浸泡后粉碎成颗粒,可显著提高产孢量;在粉碎的麦粒中添加2/5~3/5(w/w)的谷壳增加其透气性,有利于分生孢子产生,产孢量比对照提高34.7%~42.0%。固体基质接种后的初始含水量和培养温度是影响产孢的重要因素,含水量为65%、培养温度为24~26℃适宜菌体生长和分生孢子产生。光照是分生孢子产生的必需条件,连续光照有利于分生孢子产生。     

拮抗尖孢镰刀茵的木霉菌筛选方法评估

利用11株不同木霉菌株分别比较对峙培养法、病原菌存活率测定法、生防菌分泌物降解病原菌测定法、浸种抑菌萌发试验法及种苗接种活体筛选法对抑制黄瓜枯萎病尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum的拮抗木霉菌的筛选效率。试验表明不同的筛选方法获得拮抗木霉菌菌株的结果差异较大,其中病原菌存活率测定法与种苗活体接种筛选法结果一致性较高,可推荐作为生防木霉菌株初筛的有效方法。     

棘孢木霉菌Tr266B微胶囊剂的研制

本研究通过利用喷雾干燥技术,制备一种木霉菌微胶囊剂。采用单因素和正交试验,优化了喷雾干燥工艺和微胶囊剂配方的技术参数,进风和出风的温度（T-in,T-out）分别为（92±2）℃和（55±2）℃;微胶囊剂配方为：棘孢木霉菌（Trichoderma asperellum,Tr266B）发酵浓缩液含固量为20%,黄腐酸（YHA）与麦芽糊精的含量各为15%,阿拉伯胶和甘油的含量各为2%;喷雾干燥后的微胶囊含水量为7.5%~8.5%。同时,还研究了喷雾干燥温度、贮藏温度和微胶囊的含水量对孢子萌发率的影响。结果表明,在喷雾干燥过程中,T-in和T-out对孢子的萌发率有显著的影响。当T-in和T-out分别高于（95±2）℃和（65±2）℃时,孢子萌发率会下降10%~40%;当贮存温度4℃,微胶囊的含水量在7.5%~8.5%时,贮存6个月后,孢子的萌发率没有发生明显变化;当微胶囊的含水量低于6.5%时,随着贮存时间的延长,孢子的萌发率缓慢下降;当贮存在25℃条件下,6个月后孢子的萌发率不到10%。本研究确定了所开发的微胶囊壁材为黄腐酸、麦芽糊精和阿拉伯胶,保湿剂为甘油,这些材料与棘孢木霉菌Tr266B有良好的生物相容性,为产业化生产和贮存木霉菌微胶囊剂提供了依据。     

对斜纹夜蛾高致病性莱氏野村菌Nr19固体培养条件的优化

经前期生物测定,莱氏野村菌Nomuraea rileyi(Nr19)菌株能使斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)幼虫大量感病及死亡,为了提高分生孢子产量,本文采用单因素试验,对影响菌株Nr19生长的固体发酵工艺条件进行了优化。结果表明,大豆与麦麸混合物是菌株Nr19的理想发酵基质,适量麸皮的加入,能有效提高产孢量。培养期间温湿度的分段控制对产孢的影响也较大。优化后的培养条件为:大豆、麸皮混合比例为85:15,液体种子种龄5 d,接种量15.0%,连续光照,期间控制前3 d相对湿度为85%,之后降为60%,而培养温度则采用前2 d与后11 d保持在25℃,中间升温至28℃的分段控温方式培养16 d。此条件下产孢量比优化前提高近2倍,为(6.045±0.061)×10⁹孢子/g,而活孢率可达(93.770±0.278)%,可为后续高侵染力杀虫制剂的研究提供较充足的试验材料。     

禾长蠕孢菌稗草专化型固体发酵产孢培养基及其工艺条件的研究

禾长蠕孢菌稗草专化型（Helminthosporium gramineum Rabenh. f. sp. echinochloae,HGE）是一株稗草生防潜力菌,为了获得该生防菌大量孢子用于田间试验,本文研究了其固体发酵产孢最佳培养基配方及其培养条件。通过试验筛选确定了固体发酵培养基所需碳源及其浓度、氮源及其浓度以及底物基质,适合HGE菌孢子生产的培养基最佳组合为：以珍珠岩为底物基质,在其中添加4%米粉、1%豆粕粉、0.2%Na3PO4.12H2O、0.1%MgSO4.7H2O。同时确定了适合HGE菌孢子生产的培养条件：培养基最适含水量为40%,最佳接菌量为8%菌悬液,25℃静置培养11 d,培养期间用黑光灯12 h循环光照。按优化后培养条件放大培养HGE菌,获得最高产孢量可以达到1.5×107孢子·克-1干物质。温室生测结果显示优化条件生产的HGE菌孢子对稗草防效可达80%以上。     

防治甜瓜枯萎病木霉菌REMI变异株筛选

采用平皿对峙培养的方法从本实验室构建的22株木霉菌REMI变异株及出发菌株T21中筛选出5株抑制率较高的木霉菌变异株,并进行了防治甜瓜枯萎病盆栽试验,最终筛选出2株防治效果较好的木霉菌变异株Ttrm42和Ttrm26,防效分别达到78.66%和74.67%。然后进行田间防效测定,防效分别达到78.05%和73.04%。研究结果表明,木霉菌REMI变异株可以提高对甜瓜枯萎病的防效。     

绿色木霉发酵配方与防治油菜菌核病的研究

以绿色木霉Tv36为农抗产生菌,比较了多种液体培养基对Tv36产生抗生代谢物能力差异。根据几种较优配方的组分与用量,经正交试验得到产抗生代谢物的最优配方OTF。Tv36用OTF发酵并过滤后,对抗生代谢物进行了防治油菜菌核病的生物测定和田间试验。结果表明,Tv360－OTF发酵滤液对核盘菌菌丝生长有明显的抑制效果;Tv36－OTF滤液10、20、50倍3种不同的稀释倍数在油菜离体叶试验中均有明显的抑制病斑扩展的效果;Tv36－OTF农抗液剂20、50倍对油菜核病的田间防治效果分别达80．5％、68．6％,与菌核净防效相当。     

绿色木霉LTR-2菌株的紫外线诱变改良

通过紫外线诱变处理 ,获得了可以在低温下 (1 0℃ )生长的绿色木霉LTR 2的快速生长型突变株LR ,以及对多菌灵具有抗性的突变株LRR。突变株对棉枯萎病菌、棉黄萎病菌、棉立枯病菌的平板拮抗能力一般低于野生型菌株。LR比LTR 2更能适合非根际土壤环境 ,而LRR在健康棉花根际的定殖能力上 ,比LTR 2有明显下降。LR对棉花立枯病基本没有防治效果 ,但对棉花黄萎病和枯萎病的防治效果则高于原始菌株 ;LRR对棉花上述 3种病害的防治效果与原始菌株没有明显的差异     

绿色木霉TR-8菌株对尖镰孢的拮抗机制

对绿色木霉TR-8菌株抑制尖镰孢的拮抗机制进行了研究。平板对峙培养结果表明，绿色木霉生长快于尖镰孢FO-G1，接触后FO-G1生长停止，TR-8继续生长，覆盖FO-G1的菌落并大量产孢，但不形成抑菌圈。观察了TR-8对FO-G1的重寄生现象，TR-8菌丝首先向FO-G1趋性生长，然后紧贴FO-G1菌丝平行生长或穿入菌丝生长，最后FO-G1菌丝瓦解。在扫描电镜下可以看到FO-G1菌丝原生质凝结，菌丝上有孔洞出现。发酵7d，TR-8发酵液中β-1，3-葡聚糖酶的活性为20．15U／ml，几丁质酶的活性为11．67U。发酵原液对FO-G1菌丝生长和孢子萌发均无抑制作用，但TR-8的挥发性分泌物对病菌孢子萌发具有一定的抑制作用。含有TR-8分泌物的培养基对病菌孢子萌发有很强的抑制作用，抑制率高达75．06％。     

不同土壤湿度条件下绿色木霉对尖孢镰刀菌数量的影响

采用平板菌落计数法研究在不同土壤湿度条件下绿色木霉在土壤中的定殖动态及对尖孢镰刀菌数量的影响。结果显示：在3个土壤湿度条件下, 接种木霉后前4周均能显著降低镰刀菌的数量; 与对照2(CK-H06)相比, 处理(B2-H06)中木霉的孢子含量没有显著性变化。第1、2周, 对照1(CK-B2)与处理(B2-H06)的镰刀菌含量与土壤湿度呈显著性正相关; 在第5周, 处理(B2-H06)的镰刀菌和木霉菌含量与土壤湿度呈显著性负相关。     

香菇菌糠对绿色木霉防治黄瓜枯萎病的增效作用

试验以栽培香菇剩余的菌糠为原料,采用室内抑菌试验和盆栽试验相结合的方法探讨了香菇菌糠对绿色木霉防治黄瓜枯萎病的增效作用。菌糠提取液对绿色木霉菌丝生长和孢子萌发表现促进作用,促进率分别为18.20%和9.82%;对黄瓜枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发表现抑制作用,抑制率分别为11.85%和87.78%。香菇菌糠与木霉混合使用对黄瓜枯萎病的防效达70.26%,黄瓜的地上部分鲜重和根重分别增加了65.06%和58.10%。与单用木霉相比,加入香菇菌糠后绿色木霉在土体土、根际土和根系中定殖数量分别提高了251.39%、208.21%和104.76%,黄瓜枯萎病菌数量分别减少了56.98%、77.72%和76.83%。     

绿色木霉几丁质酶基因Tvchi cDNA的克隆、原核表达与活性分析

 利用RT PCR方法从绿木霉ZBS 6中扩增了几丁质酶基因Tvchi,序列分析表明Tvchi 开放阅读框为1 293 bp,编码430个氨基酸残基,Blast 分析表明,与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性。将该基因克隆到原核表达载体pET 28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS PAGE和Western印迹分析表明成功的获得了47 kD 的融合蛋白。该融合蛋白经Ni NTA柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi。Tvchi最适酶活温度为37℃,最适酶活pH值为6.8。表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础。     

木霉Tr-92菌株厚垣孢子发酵条件的优化

利用单因素试验、正交试验方法对木霉Tr-92厚垣孢子发酵培养基及培养条件进行优化,筛选获得了适合此菌株厚垣孢子产生的最佳培养基组成为:草炭2.5%,玉米浆4.5%,葡萄糖2%,酵母膏0.5%;最佳培养条件为:接种量3%,装液量75mL/250mL,转速为180r/min,初始pH 5.0,温度28℃,培养时间7d。在此培养条件下,木霉Tr-92菌株厚垣孢子产量达到3.01×108个/mL。与优化前相比,厚垣孢子产量增长130.80%。通过培养条件优化确定了适合木霉Tr-92菌株产生厚垣孢子的条件,为高效木霉厚垣孢子生防菌剂的研制奠定了基础。     

黄绿木霉发酵液对水稻纹枯病菌作用的研究

利用黄绿木霉菌发酵液处理水稻纹枯病丝核菌,初步探讨了黄绿木霉菌发酵液对水稻纹枯病丝核菌的抑菌能力及抑菌机理。试验结果表明：黄绿木霉菌发酵液抑菌作用稳定,经121 ℃处理25 min后,抑菌率为100%; pH3～8的范围内抑菌率均为100%。经黄绿木霉菌发酵液处理的水稻纹枯病丝核菌菌丝电导率与呼吸强度几乎下降为0,光学显微镜观察到菌体形态发生变化,透射电镜下观察到细胞壁出现孔洞。用处理后的水稻纹枯病丝核菌菌丝接种水稻植株,发病率明显降低。     

木霉D5菌株的鉴定及其杀线活性测定

通过形态学和分子生物学方法鉴定了1株杀线木霉D5菌株的种类,并评价了其孢子悬浮液和发酵液对禾谷孢囊线虫Heterodera avenae 2龄幼虫的毒杀活性。结果表明,木霉D5菌株为绿色木霉Trichoderma viride(ITS序列登录号：OL661629;TEF序列登录号：ON241311)。浓度为1.0×10⁷ cfu/mL的D5菌株孢子悬浮液和发酵液原液处理2龄幼虫72 h后,线虫死亡率分别为85.20%和86.57%。在温度为20～80℃范围内以及pH为2～10时,发酵液均具有较高杀线活性。