制苗用鸡大肠杆菌培养基及培养方法

采用通气搅拌培养方法对鸡大肠杆菌用MM培养基和改良MM培养基进行了对比试验，并用改良MM培养基对鸡大肠杆菌进行了静止培养、通气搅拌培养和连续通气搅拌培养的对比试验。结果显示，改良MM培养基培养的鸡大肠杆菌菌数和光密度（D）值明显高于MM培养基；连续通气搅拌培养和通气搅拌培养的方法明显优于静止培养方法。     

不同固体培养基对虫草菌丝生长及其腺苷含量的影响

试验研究了虫草在不同固体培养基上的生长情况,并采用高效液相色谱法对固体培养物的腺苷含量进行了分析。试验结果表明,虫草在以玉米面为主料的1#培养基上长势好,培养5d菌丝长满瓶。腺苷含量测定结果表明,在一定培养时间内腺苷的含量与菌丝长势呈正相关性,在长势好的1#培养基上的虫草腺苷含量高于2#培养基上的腺苷含量。通过菌丝的生长情况及腺苷含量测定结果,确定1#培养基为虫草固体法培养的适宜培养基,培养周期为5d。     

玉米渣发酵菌种筛选及其发酵条件研究

本试验选取酵母菌Y和纤维素分解菌———担子菌A、C ,木霉T作为供试菌株。菌株初筛采用平板培养法进行单菌培养和组合拮抗试验 ,复筛采用玉米渣固体培养法进行菌株及菌株组合发酵试验 ,并通过发酵培养基配方试验、最佳发酵条件研究、生化指标测定、营养分析、菌丝长速长势对照 ,确定了最优发酵菌种、最佳发酵培养基配方 ,最适发酵条件及发酵期     

安全性试验和冻干经验

我厂于1970年开始用通气培养法试制仔猪副伤寒弱毒冻干菌苗,1971—1973年上半年共冻干193批,经厂监察室按《规程》检验,安全性可靠,外发使用总计达1102,247万头剂,据反映,安全性良好。为了全面掌握通气培养苗安全性的确切情况,1973年3—7月份组织了人员,补做了仔猪注射后安全性的区域性试验,现将试验情况分别报告如下:     

多杀性巴氏杆菌内蒙系679-230株增菌高峰试验

采用通气培养法对多杀性巴氏杆菌内蒙系679—230株进行了增菌高峰试验。结果表明，细菌培养至8h时，活菌数最高。     

禽多杀性巴氏杆菌不同培养方法制备的种子液对高密度发酵培养菌数的影响

本试验用扁瓶固体培养法、摇床液体培养法和10L发酵罐培养法制备禽多杀性巴氏杆菌种子液,采用细菌比浊法和活菌计数法,计算高密度发酵菌液浓度,比较3种方法制备的种子液对禽多杀性巴氏杆菌抗原生产的影响。经过3批次试验,扁瓶固体培养法制备的种子液经高密度发酵培养后测得的活菌数为1.56×1010~1.65×1010 CFU/mL,比浊计数为2.10×1010~2.59×1010 CFU/mL;而摇床液体培养法制备的种子液经高密度发酵培养后测得的活菌数为1.54×1010~1.74×1010 CFU/mL,比浊计数为2.10×1010~2.45×1010 CFU/mL。发酵罐培养制备的禽多杀性巴氏杆菌种子接种200L发酵罐进行高密度发酵培养后测得的活菌数可达1.85×1010~2.05×1010 CFU/mL,比浊计数为2.45×1010~2.80×1010 CFU/mL。结果表明,10L发酵罐培养制备的种子液优于扁瓶固体培养法和摇床液体培养法制备的种子液,而后两者无明显差别;从3批次平均值看,前者比后两者活菌计数结果提高约21.60%,比浊计数结果提高约15.52%。说明采用10L发酵罐培养制备的禽多杀性巴氏杆菌种子进行高密度发酵培养可显著提高菌液浓度,增加单位抗原含量(P0.01)。     

鸡霍乱口服弱毒菌株的选育及其性能的研究

应用选育的禽多杀巴氏杆菌自然弱毒菌株──Ｒ１－２３菌株经固体培养方法制备鸡霍乱口服弱毒活苗。试验测得该口服活苗每羽一次性饮水安全量在１００００亿个活菌以上，至少相当于正常饮水免疫剂量的２００倍。试验测得该苗口服免疫的近期保护车（二次饮苗间隔４８小时组）分别是：浅层静置培养弱毒活苗平均为７６．２％（６批次），深层通气培养弱毒活苗平均为８４．４％（１０批次），因体培养弱毒活苗平均为９３．３％（３批次）。     

试制中的几点改进和试用情况

我厂于1971年开始用液体通气试制仔猪副伤寒弱毒菌苗,经过试验、学习、改进,培养菌数20小时每毫升可达250亿以上,现将几个方面的改进和试用情况介绍如下。一、种子方面:改原来液体种子为克氏瓶固体菌苔悬浮液,并尽量减少传代次数,以期尽可能保持原菌种的各种特性不变。二、培养基方面:选用普通牛肉汤。因据苏联有关资料认为,在培养强毒副伤寒灭能苗时,要求有一定量(60—80mg％)色氨酸——     

凝结芽孢杆菌芽孢高产固体发酵的研究

为研究凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）固体发酵大量生成芽孢的方法,就固体发酵的不同底物（麦麸、糠粉、玉米粉和谷草粉）、湿度、初始pH值和添加物质（碳源、氮源和盐类）等因子进行单因素试验,探索芽孢形成的最佳的培养条件;其次采用正交设计法对固体发酵培养基优化.结果表明底物的理化性质对固体发酵生产芽孢影响明显,其中以麦麸为底物进行固体发酵时,促进芽孢形成的能力最强.在以麦麸为底物,温度37℃,湿度为60％,初始pH7.5,添加外源物质为葡萄糖1.00％、蛋白胨2.00％,KH2PO40.50％,MnSO40.05％所形成的固体培养条件下进行48 h的发酵,芽孢生成进一步提高,优化验证试验结果表明凝结芽孢杆菌的芽孢产量可以达3.80×1010个/克以上,明显高于对照组2.98×109个/克.     

不同培养工艺制备的禽多杀性巴氏杆菌菌苗抗原的免疫原性比较试验

为比较不同培养工艺制备的禽多杀性巴氏杆菌抗原的免疫原性,对禽多杀性巴氏杆菌标准强毒株C48-1株采用固体表面培养法和液体高密度发酵法制备疫苗并进行了免疫对比试验.结果表明,固体表面培养法制备的抗原菌体形态结构较均一,抗原成分稳定一致,并且含有较丰富的荚膜;而液体高密度发酵法制备的抗原形态结构大小不一,抗原成分不够稳定一致,含荚膜也较少.将两种方法制备的抗原按相同工艺制备成禽霍乱蜂胶灭活疫苗,效力检验结果显示二者差异极显著,固体表面培养法制备的疫苗免疫后14 d和90 d时保护率均为80%～100%,平均93%;液体高密度发酵法制备的疫苗免疫后14 d和90 d时保护率分别为40%～60%、60%～80%,平均为53%和67%.     

布氏杆菌猪型Ⅱ号弱毒菌种通气培养试验

用固体培养基生产布氏杆菌猪型Ⅱ号弱毒苗要用大量的猪肝、琼脂等原材料和大扁瓶等设备,工艺复杂用人多,劳动强度大,不便生产。为了简化工艺流程,提高产量,降低成本,我们于1970年进行了猪2号布氏杆菌弱毒苗液体通气培养试验。共试验了六批,每毫升的菌数可达到500—600亿。1972年7月又进行了九批试验,并进行了冻干。经本厂和农林部兽医药品监察所检验,认为生长和生化特性,对海猪的毒力和免疫效力,均合乎试行规程的要求,现将试验方法和结果汇报如下:     

响应面法优化里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶培养条件

本试验采用响应面法对里氏木霉(Trichoderma reesei)固体发酵产α-半乳糖苷酶的培养条件进行了优化。首先根据单因素实验设计Plackett-Burman试验筛选出影响产酶的3个主要因素:玉米芯与甘蔗渣的碳源配比、牛肉膏与硫酸铵的氮源配比和发酵初始pH。在此基础上运用最陡爬坡路径法逼近最大响应值区域,最后利用响应面分析法确定主要因子之间的交互作用及最佳培养条件。结果表明,里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶的优化培养条件为:碳源配比即玉米芯与甘蔗渣比值为3.86,氮源配比即牛肉膏与硫酸铵之比1.17,初始pH为9.12。优化后,里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶的酶活可达到342.98U/g,与模型预测值353.43U/g接近,比优化前的酶活提高113.91%。综上,影响里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶最重要因素分别为碳源、氮源及pH,三者之间相互影响,分别在碳源配比3.86、氮源配比1.17及初始pH 9.12时α-半乳糖苷酶酶活最大。     

响应面法优化里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶培养条件

本试验采用响应面法对里氏木霉（Trichoderma reesei）固体发酵产α-半乳糖苷酶的培养条件进行了优化。首先根据单因素实验设计Plackett-Burman试验筛选出影响产酶的3个主要因素：玉米芯与甘蔗渣的碳源配比、牛肉膏与硫酸铵的氮源配比和发酵初始pH。在此基础上运用最陡爬坡路径法逼近最大响应值区域,最后利用响应面分析法确定主要因子之间的交互作用及最佳培养条件。结果表明,里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶的优化培养条件为：碳源配比即玉米芯与甘蔗渣比值为3.86,氮源配比即牛肉膏与硫酸铵之比1.17,初始pH为9.12。优化后,里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶的酶活可达到342.98 U/g,与模型预测值353.43 U/g接近,比优化前的酶活提高113.91%。综上,影响里氏木霉固体发酵产α-半乳糖苷酶最重要因素分别为碳源、氮源及pH,三者之间相互影响,分别在碳源配比3.86、氮源配比1.17及初始pH 9.12时α-半乳糖苷酶酶活最大。     

微生物浊度法测定抗生素药品效价及其注意事项

微生物浊度法测定抗生素药品的效价采用液体培养基法，消除了多组分抗生素在固体培养基中扩散不同的影响，具有快速、灵敏度高、可信限率低的特点。试验过程中需注意玻璃仪器的选用及清洗、试验菌、培养基、培养条件、测定误差等影响因素，以保证测定结果的准确性。     

鸡伤寒白痢沙门氏菌培养基和培养方法的研究

本试验用5种培养基对鸡伤寒白痢沙门氏菌（Sgp)菌株C79－20和AS96－1进行了静止培养对比试验，结果表明，改良硫代硫酸钠培养基和EMM培养基为最适合Sgp的培养基，硫代硫酸钠培养基次之，普通营养琼脂和SBG琼脂最差；对C79－13菌株用改良硫代硫酸钠培养基进行了通气搅拌培养、静止厌氧培养和静止需氧培养的对比试验及pH值对细菌生长的影响试验，结果表明，通气搅拌培养方法明显优于其它两种培养方法，调整pH的试验组菌悬液的OD值和菌数明显高于不调整pH值的试验组。     

雏鸡白痢菌通气搅拌培养法

制造雏白痢血清诊断抗原用的菌液,在严格规定的条件下用液体培养基培养,是提高制造效率非常有效的方法。本试验,用通气搅拌培养比较了培养基的成分,糖浓度,通气条件,培养基灭菌条件等对细菌增殖的关系。试验用的菌种,以冻干保存的Sal.pullorum9—25株(S型)接种CS琼脂(荣研)斜面,在37℃培养8小时供用。     

用大玻瓶通气连续培养法制造出败菌苗

我厂自1965年试验成功大瓶通气连续培养法制造猪肺疫、牛出败氢氧化铝菌苗,并经原农业部批准投产以来,到1971年共生产猪肺疫菌苗639批,牛出败菌苗151批,质量良好,其效价显较静置培养的为高。在此期间,我们还作了减少免疫剂量及延长保存期试验等,取得满意结果。现将历年来定     

热带假丝酵母固体发酵代谢物提取方法的比较分析

本试验比较了几种提取微生物固体发酵代谢物的方法,旨在筛选出一种尽可能多保留了代谢物的方法.试验采用热带假丝酵母固体发酵棉粕源底物,以液相色谱串联质谱( LC-MS)为分析平台,分别采用50％冷甲醇溶液(甲醇法)、酸性甲醇-乙腈溶液(酸性甲醇-乙腈法)和50％乙腈溶液(乙腈法)提取发酵代谢物.结果表明:采用酸性甲醇-乙腈法、乙腈法和甲醇法分别提取出1 831、1 522和1 262种代谢物,提取效率表现为酸性甲醇-乙腈法＞甲醇法＞乙腈法.本试验中3种方法相比,酸性甲醇-乙腈法提取的代谢物种类最多,提取效率最佳,是微生物固体发酵代谢物提取的有效方法.     

利用三种不同抑菌方法研究中药地榆对奶牛乳房炎常见病原菌抑菌效果的影响

本试验以地榆水煎液为试验药物,以标准金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌为试验菌株,采用琼脂平板扩散法（打孔法）、液体培养基连续稀释法（试管法）和固体培养基连续稀释法,观察中药地榆对奶牛乳房炎常见病原菌抑菌效果的影响。结果表明,药物固体培养基连续稀释法比其他两种方法敏感性高,重复性好,能直接定量测出抗菌药物对奶牛乳房炎常见病原菌的最低MIC值,更适于中药体外抑菌作用的研究。     

癸氧喹酯固体分散体制备及鉴定

本研究旨在通过研制癸氧喹酯固体分散体制剂,来提高其溶解度,为进一步研制水溶性制剂奠定基础.以熔融-溶剂法制备癸氧喹酯-PEG固体分散体,经差示扫描量热法和红外光谱法对固体分散体中药物的分散状态进行了鉴定,同时进行了溶出试验和含量测定试验.本研究成功制备出癸氧喹酯固体分散体,药物在固体分散体中以低共熔物状态存在；固体分散体中癸氧喹酯药物含量为10.97％,癸氧喹酯在水中的溶解度为152.28 μg/mL,癸氧喹酯溶液剂(3％)的推荐使用量15～ 30 mg/L,本试验制备的癸氧喹酯固体分散体满足临床饮永给药要隶.