茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的保护作用

用过氧化氢(H2O2)建立体外奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激损伤模型,研究不同质量浓度茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的影响。MTT法检测细胞存活率,比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,分光光度法检测天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果显示:与H2O2损伤模型组相比,20～100μg.mL-1茶多酚处理组的奶牛乳腺上皮细胞存活率、SOD活性显著升高,而MDA含量、LDH与Caspase-3相对活性与细胞凋亡率均下降,其中以100μg.mL-1茶多酚处理组效果最显著,说明一定质量浓度的茶多酚可以缓解氧化应激所致的奶牛乳腺上皮细胞的损伤,提高细胞存活率,抑制乳腺细胞凋亡。结论:茶多酚对乳腺上皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其保护作用可能与降低MDA含量,增强SOD活性及抑制Caspase-3活性有关。     

CpG-ODN对LPS诱导的大鼠乳腺上皮细胞损伤的保护作用

通过建立LPS诱导的大鼠乳腺上皮细胞损伤模型,探究乳腺上皮细胞在致病原存在时的主动防御功能和免疫生理调节剂CpG-ODN对LPS诱导乳腺上皮细胞损伤的保护作用.结果显示,一定剂量LPS与乳腺上皮细胞共培养后,与正常对照组相比,其NAGase、iNOS酶活性显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05).与阳性对照组相比,低、中、高剂量CpG-ODN处理组TNF-α、IL-1β水平均显著降低(P<0.05),并呈剂量依赖性;IL-2水平显著升高(P<0.05).中、高剂量CpG-ODN处理组NAGase酶活性显著降低(P<0.05);高剂量CpG-ODN处理组iNOS酶活性显著降低(P<0.05).说明,一定剂量LPS能够对大鼠乳腺上皮细胞造成损伤,而Cpg-ODN可以抑制炎性相关细胞因子和炎性相关酶的过度释放,对LPS诱导的大鼠乳腺上皮细胞的损伤有保护作用.     

六月雪水提取物对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的保护作用

前期研究发现六月雪[Serissa serissoides(DC.)Druce]对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤有良好的保护作用,因此进一步在细胞水平上探讨六月雪水提取物对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞的保护作用。采用体外细胞培养人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞,将GES-1细胞用0~10%的乙醇孵育4~6 h,建立胃黏膜损伤模型。将参试GES-1细胞分为正常组、模型组、荆花胃康胶丸组、六月雪水提取物剂量组,正常组不做任何处理培养24 h,其他组加入一定浓度的乙醇处理一段时间后,加入含荆花胃康胶丸、六月雪水提取物各浓度剂量的培养基,正常组、模型组不加入药物,继续培养24 h,利用MTT检测各组GES-1细胞的活性。将MTT筛选后效果最佳的六月雪3个浓度以及荆花胃康胶丸组1个浓度分别定为高、中、低剂量组和阳性药物组,运用吖啶橙荧光染色法检测各组细胞凋亡情况,采用Western-Blot法检测各试验组碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)蛋白的表达情况。结果表明,5%的乙醇孵育GES-1细胞4 h是造成胃黏膜损伤的最佳细胞模型,对GES-1细胞的抑制率达到40%。六月雪水提取物组中,60、70、80μg/m L 3个浓度效果最佳,与该组其他浓度比较差异显著(P0.05);荆花胃康胶丸组中,在浓度为160μg/m L时细胞增殖最明显;均高于其他浓度的荆花胃康胶丸组;吖啶橙染色后显微镜下观察正常GES-1细胞形态均一、生长良好,而模型组大量细胞明显出现衰老或凋亡,荆花胃康胶丸组、六月雪水提取物组GES-1细胞生长情况明显好于模型组;模型组b FGF的蛋白表达水平明显高于正常组,差异显著(P0.05);与模型组比较,六月雪水提取物组的b FGF蛋白表达水平明显增加,差异极显著(P0.01);六月雪水提取物组与荆花胃康胶丸组比较,b FGF的表达水平差异也达极显著水平(P0.01)。说明六月雪水提取物可以保护乙醇损伤的人胃黏膜上皮系GES-1细胞,可以增加b FGF的蛋白表达水平,提高溃疡愈合速度。     

虾青素对牛子宫内膜细胞炎症损伤的保护作用

【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖（LPS）诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1 μg·mL ^-1 LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-α和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10 ^-6 mol·L ^-1 虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST。采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1 μg·mL ^-1 LPS培养子宫内膜细胞6 h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组（P小于0.05）,说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著降低（P小于0.05）,说明LPS诱导的子宫内膜细胞炎症造成了氧化损伤。加入1×10 ^-6 mol·L ^-1 虾青素培养细胞24 h后,发现培养液中IL-6和TNF-α因子的分泌水平显著低于LPS组（P小于0.05）,同时ROS阳性细胞比率显著下降（P小于0.05）,SOD和CAT酶活性都显著升高（P小于0.05）。LPS组与对照组相比,细胞膜处Claudin、CDH1、TJP1蛋白的荧光信号减弱,这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著降低（P小于0.05）。加入1×10 ^-6 mol·L ^-1虾青素培养24 h后,与LPS组相比,在细胞边缘和细胞核内可以检测到荧光信号很强的Claudin、CDH1、TJP1蛋白,而且这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著升高（P小于0.05）。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。     

视网膜色素上皮细胞光氧化损伤及原花青素B2的保护作用

蓝光可诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞发生光损伤,是年龄相关性眼病的主要发病机制之一。随着年龄增长,脂褐素在RPE细胞中沉积,蓝光能诱导RPE细胞中的脂褐素产生活性氧自由基(ROS),导致光氧化损伤。为了进一步研究蓝光诱导RPE细胞损伤的机制,采用累积了脂褐素主要成分N-亚视-N-视黄基-乙醇胺(A2E)的ARPE-19细胞作为RPE细胞光氧化损伤模型,对细胞活性、ROS、内质网应激(ER stress)蛋白及caspases进行检测,结果显示蓝光可降低RPE细胞活性,增加了ROS生成量,并且与内质网应激(ER stress)反应以及caspase-9和caspase-3的活化相关。此外,经原花青素B2处理后,RPE细胞活性显著提高,并且过氧化物歧化酶(SOD)活力及还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著增加。这些结果表明,葡萄原花青素B2可能通过提高细胞内抗氧化酶活力降低氧化应激反应,从而抑制蓝光诱导RPE细胞损伤。     

亚硒酸钠对延边奶山羊乳腺上皮细胞过氧化氢所致氧化损伤的保护作用

研究了亚硒酸钠对过氧化氢导致的延边奶山羊乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用。将延边奶山羊乳腺上皮细胞分为3组:正常组(对照组1)、过氧化氢损伤组(对照组2)、亚硒酸钠保护组。MTT方法检测细胞活力,Hoechst33342/PI双染、Giemsa染色法检测细胞凋亡情况,DHE染色法检测细胞内ROS含量。结果表明,与对照组2相比,浓度为0.25、0.5、1.0μg/mL的亚硒酸钠保护组的延边奶山羊乳腺上皮细胞活力上升,细胞凋亡数目减少,活性氧含量减少。其中以0.5μg/mL亚硒酸钠处理组效果最显著。说明0.5μg/mL的亚硒酸钠可以减少过氧化氢所致的延边奶山羊乳腺上皮细胞的氧化损伤,提高细胞活力,抑制细胞凋亡,减少细胞内ROS含量。表明亚硒酸钠对延边奶山羊乳腺上皮细胞过氧化氢所致氧化损伤具有保护作用。     

白藜芦醇对ZEN诱导的猪小肠上皮细胞损伤的作用效果研究

试验旨在探究白藜芦醇对玉米赤霉烯酮（ZEN）诱导的猪小肠上皮细胞（IPEC-J2细胞）损伤的影响。试验分组为：C组（对照组）、Z组（ZEN浓度25μg/mL）、ZR1组（25μg/mL ZEN+10μmol/L白藜芦醇）、ZR2组（25μg/mL ZEN+20μmol/L白藜芦醇）、ZR3组（25μg/mL ZEN+30μmol/L白藜芦醇）;测定细胞活力、细胞乳酸脱氢酶（LDH）活性、抗氧化酶水平以及Caspase3、Caspase9、Bcl-2和bax等凋亡相关基因mRNA表达水平。试验结果显示：Z组细胞活力、SOD活性T-AOC水平和Bcl-2基因m RNA表达水平极显著低于C组（P<0.01）,ZR2组和ZR3组细胞活力、SOD活性、T-AOC水平和Bcl-2基因mRNA表达水平极显著或显著高于Z组和ZR1组（P<0.01或P<0.05）;Z组细胞LDH活性、MDA水平、Capase-3、Capase-9和Bax基因mRNA表达水平极显著高于C组（P<0.01）,ZR2组和ZR3组细胞LDH活性、MDA水平、Capase-3、Capase-9和Bax基因...     

半夏不同克隆株生物碱含量的比较研究

[目的]测定15个半夏克隆株系间生物碱含量,为提高半夏有效成分在植物体内的富集提供理论依据。[方法]采用氯仿提取,依据酸性染料比色法的原理,在417 nm波长下测定,并作方差分析。[结果]获得良好的线性关系(r=0.9989)和高回收率(100.1%),RSD为2.3%。15个克隆株系间生物碱含量差异达到极显著水平。[结论]克隆株系之间所测成分含量差异显著,短期内通过高含量的变异株进行无性系繁殖来提高半夏的有效成分的含量,可实现从个体选择中较快达到提高有效成分含量的目的。     

硒对铅中毒诱导蛋鸡肾脏炎症损伤缓解作用研究

为研究硒缓解铅致鸡肾脏炎症损伤的作用,试验将72只海兰白蛋鸡随机分为四组,分别饲喂标准日粮和饮用水、添加1 mg·kg-1硒的日粮和标准饮用水、标准日粮和添加350 mg·L-1铅的水、添加1 mg·kg-1硒的日粮和350 mg·L-1铅的水.第4、8和12周测定肾脏中硒(Se)和铅(Pb)浓度、血清中肌酐(CREA)和尿酸(UA)含量、氧化应激指标、细胞因子和炎症因子mRNA和蛋白质相对表达量.结果表明,加铅组蛋鸡肾脏发生损伤,同时铅含量增加、硒含量降低,CREA和UA含量增加;过量铅引起蛋鸡肾脏中MDA含量,IL-1β、IL-6、IL-17、caspase-1、TNF-α、NF-κB、NLRP3、COX-2表达量增加、GSH含量降低、GPx和SOD活性降低及IFN-γ表达量降低;硒缓解过量Pb中毒引起的上述指标变化.从相对表达量看,NLRP3炎症小体、caspase-1和IL-1β可能是铅诱导蛋鸡肾炎症损伤的敏感指标.     

LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞炎症损伤模型的建立

采用LPS诱导子宫内膜上皮细胞炎症模型,通过研究细胞因子IL-1β、TNF-αmRNA的表达验证模型,为进一步对子宫内膜炎发病机理的研究和治疗药物疗效的评价奠定基础。经组织块原代培养和胰酶纯化分离得到奶牛子宫内膜上皮细胞,并通过免疫组化鉴定细胞纯度。采用0、10、30、50、100μg/mL的LPS分别在3、6、9、12、18 h刺激纯化后的子宫内膜上皮细胞,采用MTT法筛选出最佳刺激浓度时间为30μg/mL,12 h,然后以最佳刺激浓度刺激子宫内膜上皮细胞,在12 h后收集细胞,最后通过荧光定量RT-PCR检测IL-1β、TNF-αmRNA的表达差异性。     

半夏中总生物碱及鸟苷含量动态变化研究

[目的]对半夏中总生物碱及鸟苷的含量变化进行动态研究,为半夏的合理采收及GAP种植提供科学依据。[方法]分别采用分光光度法和高效液相色谱法对贵州不同产地、不同采收季节、不同海拔高度半夏中总生物碱、鸟苷进行含量测定。[结果]半夏中总生物碱范围在0．0090％～0．0320％,鸟苷范围在0．0004％-0．024O％,贵州威宁县10月采收的半夏总生物碱及鸟苷含量最高。[结论]该研究方法简单快速,结果可靠,可作为GAP种植半夏药材的质量控制方法。     

N-乙酰半胱氨酸对脓毒症大鼠肠损伤的保护作用及对炎症因子表达的影响

为探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脓毒血症大鼠肠损伤的影响及对炎症因子表达的影响,选取清洁级SD大鼠30只,体重250~300g,随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(SEP组)和N-乙酰半胱氨酸组(NAC组),每组10只;Sham组仅开腹,暴露盲肠,NAC组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予150mg·kg~(-1)NAC和等量生理盐水;3组均于再灌注4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;ELISA检测血中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)和D-乳酸浓度;ELISA法和Western blot法检测血清和小肠中TNF-α、IL-6、IL-10浓度。结果表明:光镜下Sham组未出现病理损伤,SEP组损伤重,NAC组损伤减轻;与Sham组比较,SEP组I-FABP、D-乳酸显著升高(p0.05);与SEP组比较,NAC组I-FABP、D-乳酸显著降低(p0.05);与Sham组比较,SEP组血清中TNF-α、IL-6、IL-10显著升高(p0.05);与SEP组比较,NAC组TNF-α、IL-6显著降低(p0.05),IL-10显著升高(p0.05),小肠炎症相关因子变化趋势同血清检测。N-乙酰半胱氨酸对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,其机制与抑制炎症反应有关。     

清除自由基对脑缺血损伤的保护作用

脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury)是指脑缺血致脑细胞损伤,恢复血液再灌注后其缺血性损伤反而进一步加重的现象。据WHO公布的资料,在57个国家中,有40个国家把缺血性脑血管疾病的死亡率列入了前三位,其中在日本和中国已居首位[1]。自由基在细胞损伤中的作用日益受到重视,其中氧自由基的生成起重要作用[2],深入研究脑缺血损伤的保护机制,对寻找治疗缺血性脑血管疾     

施肥对西北地区各等级半夏总生物碱含量的影响

采用N、P、K肥三因素五水平二次通用旋转组合设计研究了半夏在人工栽培条件下施肥对总生物碱含量的影响.结果表明:影响半夏各等级总生物碱含量的主要因素是N肥;最可取的施肥方案为纯N 419.5~514.1kg.hm-2、K2O 150 kg.hm-2,不施P肥,此时可兼顾各等级半夏总生物碱含量都较高.     

细胞因子与心肌损伤及腺苷对损伤的保护作用

细胞因子是一类能在细胞间传递信息,具有免疫调节和效应功能的蛋白质或小分子多肽,目前细胞因子在心肌损伤中的介质作用已经被深入研究,其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与心肌损伤关系的研究更是当今心血管学的一大热点。近年来的研究进展证明抗炎措施是某些心血管疾病较有前途的治疗方法之一。     

泰山草乌生物碱对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

研究氧化泰山草乌生物碱对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用,采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(Permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)方法,建立脑缺血模型。大鼠pMCAO术后通过灌胃给予草乌生物碱(20,50,100mg·kg-1),以神经行为学变化、脑梗死体积和脑含水量等指标评价草乌生物碱对脑缺血的神经保护作用。草乌生物碱高、中剂量组可改善pMCAO大鼠神经行为障碍、缩小脑梗死体积、减轻脑水肿有明显作用。实验表明泰山草乌生物碱对大鼠局灶性脑缺血有明显的神经保护作用。     

蓝莓提取物对小鼠视网膜光损伤的保护作用研究

[目的]建立视网膜光损伤小鼠动物模型,通过该动物模型评价蓝莓提取物对视网膜光损伤小鼠的保护作用.[方法]综合评价不同剂量蓝莓提取物对视网膜组织结构的影响,以及对视网膜MDA含量,LDH、SOD、CAT和GSH-Px活性的影响.[结果]蓝莓提取物对视网膜光损伤小鼠视网膜组织有显著的改善作用;蓝莓提取物能够显著抑制小鼠视网膜细胞中LDH活性,能够显著抑制视网膜内部的脂质过氧化,还能够显著提高SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶的活性.[结论]蓝莓提取物对保护小鼠视网膜光损伤具有显著作用.     

甘草多糖对小鼠肺组织炎症及氧化损伤的修复机制

【目的】探讨甘草多糖对慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠肺组织炎症和氧化损伤的修复作用.【方法】将30只小鼠随机分为对照组(C组)、致病组(COPD组)和治疗组(L+COPD组),通过烟熏法建立COPD小鼠模型,采用水提法制备甘草多糖,在治疗中观察小鼠生理体征变化并检测血清和肺组织中细胞因子和抗氧化指标.【结果】COPD小鼠在甘草多糖治疗下,精神好转,饮食与活动明显增加;L+COPD组小鼠促炎症因子IL-17、IL-6和TNF-α的表达显著降低(P<0.05),抑制炎症因子IL-10的表达极显著提高(P<0.01);T-SOD、GSH-Px和T-AOC的含量显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05);小鼠肺组织和气管得到有效修复.【结论】50 mg/kg甘草多糖对COPD小鼠肺组织炎症和氧化损伤修复起到较好的治疗作用.     

半夏自毒作用研究

将半夏叶和块茎水浸提液分别配制成不同浓度,采用生物测定方法,对半夏连作障碍的自毒作用进行初步研究。结果表明,低浓度的半夏叶和块茎水浸提液有促进种子萌发的作用,高浓度有抑制作用,同时,不同浓度叶和块茎水浸提液对半夏发芽率、发芽势及发芽指数的自化感作用均为负值,表现为抑制种子的萌发;当浓度为80 mg/mL时,叶和块茎水浸提液对种子萌发的自化感效应值最大,其中,叶水浸提液对发芽率、发芽势和发芽指数的自化感效应分别为-0.29、-0.27和-0.37,块茎水浸提液对发芽率、发芽势和发芽指数的自化感效应分别为-0.41、-0.24和-0.46。因此,半夏具有很强的自毒作用,而且自毒作用还存在部位差异,尤其以块茎水浸液的抑制作用最强,且随浸提液质量浓度的升高,化感作用加强。