家蚕滞育生物钟蛋白质酯酶A4研究进展

生物钟普遍存在于生物体内，协调肌体的功能。与光感知型昆虫生物钟依赖视叶或脑驱动不同，家蚕的滞育生物钟依赖酯酶Ａ４（ＥＡ４）感知低温、盐酸刺激等信息，从而启动基因，开始 胚胎发育。ＥＡ４由 Ｈｉｓ到 Ｔｙｒ的 １５５个氨基酸残基构成，在 ２２位 Ａｓｎ处有糖基结合，ＥＡ４的测时功 能与自身的结构有关，受多肽抑制因子（ＰＩＮ）调控。ＰＩＮ是蚕卵内的一种由Ｓｅｒ到 Ａｓｎ的 ３８个氨基 酸残基的多肽，从卵特异蛋白质（ＥＳＰ）加工而来。     

昆虫的测时功能及作用机制

昆虫测时功能及作用机制的研究是时间生物学前沿研究内容之一。光感应型昆虫生物钟,光信号由复眼、脑-复眼两种感知类型,驱动部位也有视叶边缘腹侧部分的细胞体和脑两类;遗传控制基因是per,不同突变体perDNA之间仅有1个碱基的有效差异。家蚕卵内的酯酶A4(EA4)是一种时间间隔测定酶,感知低温、盐酸刺激等信息,启动倒计时型滞育生物钟,EA4的测时功能与自身的结构有关,受蚕卵内的多肽抑制因子(PIN)调控。     

昆虫生物钟基因及其分子作用机制研究进展

昆虫经过长期的演化,在其生命活动和行为中,有着明显的昼夜和季节的节律性周期变化,通常将这种节律性活动现象称为生物钟。蟑螂是变温动物,体温会随外界环境的变化而变化,生物钟周期是"温度补偿"的。果蝇昼夜生物钟节律是一种"转录-翻译-抑转录"机制构成的反馈环,主钟由位于脑部的两簇神经元组成,其中已确认的主要钟基因有per、tim、clk、cyc、dbt、vri和cry等。家蚕的滞育是一种世代节律现象,但与近日节律密切相关,且无法单纯用近日节律调控方式来解释。家蚕滞育卵内的酯酶A4(EA4)是一种时间间隔测定酶,能够感知低温和盐酸等刺激信息,EA4的测时功能与其自身的结构有关,受蚕卵内的多肽抑制因子(PIN)的调控。聚类分析结果表明,家蚕EA4虽然在SOD蛋白家族,但EA4与其他物种Cu/Zn-SOD进化距离较远。生物钟的进化关系研究表明,生物钟的关键分子构成在果蝇等昆虫和哺乳动物之间是高度保守的。     

家蚕滞育生物钟蛋白质EA4基因的cDNA克隆和序列分析

家蚕滞育生物钟是依赖卵内酯酶A4(EA4)的倒计时型生物钟。EA4是具时间间隔测定酶(time interval measuring enzyme,TIME)功能的蛋白质。根据家蚕EA4测定的氨基酸序列,以第3天龄雌蛹脂肪体和卵巢总RNA为模板,利用简并引物RT-PCR方法,得到308 bp的部分ea4序列,其1-144 nt和145-308 nt分别与家蚕全基因组鸟枪序列(whole genome shotgun sequence,WGS)AADK01019126.1的5595-5738 nt及WGS AADK01014467.1的8636-8473 nt有95%和98%的一致性。根据获得的ea4基因片段序列,利用生物信息学方法和家蚕基因组数据预测了ea4基因的完整cDNA序列,设计特异引物,以雌蛹脂肪体和卵巢RNA为模板,进行RT-PCR得到完整的cDNA。ea4基因的cDNA全长519 bp,其中1-48 bp为信号肽序列,49-519 bp编码的氨基酸与蛋白质纯化后测序EA4部分的一致性为98%,C末端存在3个氨基酸的差异,其中第156位为新确定氨基酸。     

中内毒素（LPS）诱导后家蝇幼虫抗菌肽CecMd基因的克隆、生物信息学分析及其表达载体的构建

从脂多糖（LPS）诱导或非诱导的家蝇幼虫体内抽提总RNA,根据家蝇Cecropin基因（GenBank：DQ 232774）设计特异性引物,应用RT—PCR技术扩增出编码CecMd开放阅读框（ORF）的eDNA序列,将其克隆入pMD18-T载体,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将CecMd亚克隆基因与线性化的pET32a（＋）连接,构建重组表达载体pET32a（＋）／CecMid,并对此基因及其推导氨基酸序列进行系统的生物信息学分析。结果表明从脂多糖（LPS）诱导的家蝇幼虫体内成功的扩增出家蝇抗菌肽Cecropin基因,命名为CecMd,但是从未诱导的虫体内未能获得此基因;CecMd开放阅读框的cDNA全长为192bp,编码由63个氨基酸残基组成的多肽;此多肽最可能的裂解位点在氨基酸残基A23和G24之间,提示1～23氨基酸残基组成信号肽,24～63氨基酸残基构成成熟肽;CecMd的全长肽包含4个螺旋,成熟肽（不包括信号肽）含有2个螺旋,两者均不合二硫键;CecMd与果蝇Cecropins的同源性显著高于其他昆虫,达到81．0％以上;经PCR,限制酶切和DNA测序鉴定表明,成功构建了重组表达载体pET32a（＋）／Cec Md 。重组表达载体pET32a（＋）／Cec Md的构建及其CecMd基因的生物信息学分析对其生物学功能研究和高效表达工程菌的构建具有重要意义。     

浅谈抗菌肽的抗菌活性

抗菌肽（ABP）又称为抗微生物肽（AMP）、宿主防御肽（HDPs）、肽抗生素，是动物免疫防御系统在外界条件刺激下，产生的一类对抗外原陛病原体致病作用的具有免疫活陛的多肽，是动物非特异性免疫防御系统的一个重要组成部分。依据其物种来源的不同，被分别命名为防御素、蛙皮素和蜂毒素等。抗菌肽有着分子量小、活性强、功能广泛、杀菌谱广等特点。抗菌肽的分子量一般在4kDa左右，肽链由12～50个氨基酸残基组成，     

胰岛素样生长因子的生物学效应

胰岛素样生长因子（ＩＧＦ）是一类结构上类似胰岛素原的单链多肽，包括ＩＧＦ－Ⅰ和ＩＧＦ－Ⅱ。ＩＧＦ－Ⅰ由７０个氨基酸残基组成，分子量约为７６００；ＩＧＦ－Ⅱ由６７个氨基酸残基组成，分子量约为７５００。ＩＧＦ绝大部分由肝脏合成，主要存在于血液中。初乳中具有高浓度的ＩＧＦ。哺乳动物几乎所有组织和细胞均能分泌ＩＧＦ肽，表达ＩＧＦ受体。ＩＧＦ具有广泛的生物学效应。     

鸽源冠状病毒PSH株纤突蛋白基因的遗传变异分析

对鸽源冠状病毒PSH株纤突蛋白基因进行了RT—PCR扩增、克隆和测序。结果表明，PSH株S基因由3504个核苷酸组成，编码1条由1167个氨基酸残基组成的多肽。S基因编码产物裂解后形成的S1和S2亚单位分别由541和626个氨基酸残基组成。PSH株S蛋白切割识别位点为精氨酸-精氨酸-苯丙氨酸-精氨酸-精氨酸（RRFRR），与多数鸡传染性支气管炎病毒（IBV）切割识别位点相似（RRF／SRR）。与GenBank中其他冠状病毒毒株S基因的推导氨基酸序列相比较，PSH株与IBV参考毒株的同源性为79．3％～99．6％，而与其他冠状病毒包括火鸡蓝冠病病毒和SARS病毒的同源性均小于37．8％。表明，鸽源冠状病毒PSH株属于第3抗原群冠状病毒，且与IBV亲缘关系较近。     

体外25℃家蚕卵酯酶A4的ATP酶活性变化及其与滞育性的关系

从家蚕卵纯化出EA4酶蛋白 ,调查了温度对EA4的ATP酶最高活性和其出现时间的影响以及与蚕卵滞育性的关系。EA4的酶活性反应温度为 2 5℃时比 5℃时提高约 1 0倍。从滞育性卵和盐酸处理卵纯化EA4 ,或者用EA4的活性抑制多肽 (PIN)体外处理酶蛋白质 ,2 5℃中EA4的最高活性出现时间比 5℃中显著提早。随纯化时卵龄或PIN处理时间的改变 ,2 5、5℃中EA4的最高活性出现时间以及与蚕卵 5℃冷藏时滞育发育时间有相同趋势的变化。体外 2 5℃和体外 5℃一样 ,EA4的最高活性出现时间与蚕卵的滞育发育有密切的关系     

瘦蛋白及其在养猪业上的研究进展

瘦蛋白 (Leptin)是脂肪细胞分泌的一种调节体脂沉积的重要因子 ,由 1 67个氨基酸残基组成 ,其中N端 2 1个氨基酸残基为信号肽 ,成熟瘦蛋白为 1 46个氨基酸残基组成的无糖化的多肽 ,相对分子量为 1 6kDa ,其中mRNA长 4 5kb。Leptin为单链 ,链内的两个半胱氨酸构成一个二硫键 ,这种结构也常见于其他分泌型多肽。就氨基酸序列分析 ,Leptin是一种球型分子 ,无明显的结构域或跨膜区 ,以单体形式存在 ,是由肥胖基因 (Obesegene ,简称ob基因 )编码的 ,其表达具有组织特异性 (Dennis等 ,1 997) ,表达部位主要在脂肪组织。Leptin作用于下丘脑的…     

硫醇活性胆固醇结合细胞溶素的结构与功能研究

硫醇活性胆固醇结合细胞溶素是重要的细菌毒素，通过与宿主细胞膜上的胆固醇结合，经过一系列过程发生致病作用，是重要的致病因子，细胞溶素的三维晶体结构由四个功能区组成，其中功能区4中的十一氨基酸多肽环、色氨酸残基，半胱氨酸残基和β-夹心结构与致病性密切相关。当然，功能区1、2和3也参与其致病作用，本文就以上问题进行了讨论。     

旋毛虫FYVE锌指结构蛋白基因的克隆及表达

用旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库中的T54克隆作为核酸探针，对旋毛虫成虫和新生幼虫混合cDNA文库进行筛选，获得1个全长1464bp的cDNA分子，该cDNA含有1个1290bp的开放阅读框架（ORF），Blastn同源性分析表明，与其它已知生物基因序列无明显的同源性，为一新的cDNA。该ORF编码1个429个氨基酸残基组成的多肽，其分子质量理论推导值为49．9ku，等电点为5．6，在12－14及103－105氨基酸残基处分别有2个糖基化位点NLS及NVS，在C末端344－409氨基酸残基处有1个FYVE锌指结构域（Profile PS50178)。Blastp同源性分析表明，与广东管圆线虫（Angiostrongylus cantonensis)66.0ku蛋白（gi/1743430)同源性最高，为39．0％。在此基础上对旋毛虫FYVE锌指结构重组蛋白进行了表达，表达蛋白占菌体蛋白的24％。     

伪狂犬病病毒Fa株gp63（gI） 基因核苷酸序列测定及分析

对我国最早分离的伪犬病病毒（pseudorabies virus,PRV)Fa株糖蛋白gp63(gI)基因核苷酸序列及的氨基酸序列作了测定与分析，完整的gp63(gI)结构基因从起始密码子ATG到终止密码子TGA共有1050个核苷酸残基，编码由439个氨基酸残基构成的多肽链，4种核苷酸残基的构成比分别为：G35．9％，11.33%,T11.81%,C40.95%,G C含量达76．85％，PRV Fa株gp63基因核苷酸序列与Nice株的相比，两者同源性达98．13％，仅存在3个核苷酸残基的缺失变异，氨基酸推导序列分析表明，糖蛋白gp63具有典型膜蛋白特征，与Nice株相比，同源性为97．42％，gp63基因起始密码子由3个连续的ATG组成，ATG上游区域内无启动子调控区序列。     

鸡传染性支气管炎病毒HH06分离株的鉴定及其S1基因的分子特征

从黑龙江省哈尔滨市某鸡场疑似鸡传染性支气管炎的发病蛋鸡肾组织病料中分离到1株病毒，命名为HH06。该分离毒株经SPF鸡胚传代、血凝试验、负染电镜检查以及动物回归试验，证实为IBV。用RT-PCR扩增得到了HH06株S1基因片段，经测序，并与国内外IBV参考毒株的相应基因进行序列比较分析。结果表明，HH06株S1基因由1620个核苷酸组成，推导的多肽由540个氨基酸残基组成，推导的氨基酸裂解位点序列为5个连续碱性氨基酸HRRRR。HH06株S1基因序列与除LX4外的其他参考株相应基因的核苷酸及氨基酸序列同源性均较低，亲缘关系均较远。初步证实HH06株为不同于IBV疫苗株的一个新毒株。     

鹅下丘脑-垂体-卵巢轴上ghrelin的免疫组化定位

生长激素促分泌素受体的配体(ghrelin)是Ko-jima等人于1999年发现的,目前为止第1个天然的内源性的生长激素促分泌素受体(GHS-R)的配体[1].哺乳动物ghrelin为28个氨基酸残基的多肽,禽类的ghrelin则由26个氨基酸残基组成[2].     

抗菌肽在畜牧业中的应用

抗菌肽是生物体内产生的一类小分子多肽,由20至50个氨基酸残基组成.这类活性多肽具有分子量小、热稳定性好、水溶性好、强碱性、抗菌谱广等特点.     

大熊猫IL-4基因的克隆与序列分析

应用RT-PCR技术从ConA诱导培养的大熊猫外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到大熊猫IL-4基因,并将其克隆到PGEM-T载体中。经菌落PCR鉴定、序列测定及序列分析,结果表明,克隆得到的IL-4基因开放阅读框由396个核苷酸组成,编码一个由132个氨基酸组成的多肽,包括编码24个氨基酸的信号肽和108个氨基酸的成熟肽。与GenBank中已登录的大熊猫IL-4（DQ166512）的核苷酸序列同源性分别为99.5%和100%;与其他哺乳动物如犬、猫、人、猪、牛、羊、马、兔、鼠等的IL-4核苷酸同源性为50.7%（鼠）～87.7%（犬）;IL-4编码氨基酸同源性在35.7%（鼠）～78.8%（犬）;进化树构建结果表明,大熊猫与犬、猫遗传距离最近。     

小肽营养研究进展

1小肽营养理论的提出肽是蛋白质分解成氨基酸过程中的中间产物。动物营养学上通常把含氨基酸残基50个以上的称为蛋白质,把含几个至几十个氨基酸残基的肽链统称为寡肽,更长的肽链称为多肽,而把由2—3个氨基酸组成的肽链称为小肽。小肽又叫纳米胶原蛋白,也称寡肽、微肽、短肽。     

奶牛生产中小肽的研究及其应用效果

前言 小肽和分类肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，氨基酸是构成肽的基本基团。含氨基酸残基超过50个的通常称为蛋白质，低于50个氨基酸残基的称为肽，肽中氨基酸残基低于10个的称为寡肽，含2或3个氨基酸残基的为小肽。饲料中的蛋白质在动物消化道内酶的作用下并非全部降解为游离氨基酸（FAA）而被吸收。生成的部分小肽能够完整地通过肠黏膜细胞。     

巨噬细胞集落刺激因子

巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）是一种糖蛋白，相对分子量为22000，基因定位在第5条染色体长臂q23～q31位置上。它的基因约2．5kb，含有4个外显子和3个内含子。M—CSF的mRNA包括编码成熟蛋白质的127个氨基酸残基和信号肽的17个氨基酸残基的密码子。巨噬细胞集落刺激因子主要是由T淋巴细胞在抗原或有丝分裂原的刺激下产生的，单核细胞、内皮细胞成纤维细胞等也可产生。