性别分子标记在毛花猕猴桃中的通用性验证

【目的】猕猴桃是雌雄异株多年生木质藤本植物,其经济价值的主要载体为雌性植株的果实,将性别鉴定技术应用于早期实生苗对育种工作意义重大。目前已开发出可稳定鉴别中华猕猴桃和山梨猕猴桃种群性别的分子标记,可以检测出生物个体之间在核苷酸序列水平上的差异,极大降低了环境因素的干扰,验证这些标记在毛花猕猴桃种质资源中的通用性可扩大这些标记在猕猴桃属植物中的应用范围,从而在植株早期鉴定出其性别,以提高猕猴桃资源利用率。【方法】利用已知性别的10份江西野生毛花猕猴桃DNA样品作为材料,用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对PCR扩增产物进行检测,对退火温度进行多次筛选,确定最佳退火温度,对已报道的适用于某些猕猴桃品种的性别分子标记A001、A002、UDK96-009及UDK96-013等8个标记在毛花猕猴桃中的通用性进行验证。【结果】(1)8个分子标记中,A001、A002、UDK96-013和UDK96-019这4个标记均在毛花猕猴桃中能扩增出清晰明亮的多态性片段,但未能鉴别出有效的性别特异片段,因此不具备鉴定毛花猕猴桃性别的作用;(2)分子标记UDK96-009只在少量几个样品中扩增出较清晰的条带,但多态性较...     

猕猴桃性别分化与鉴定研究进展

文章对猕猴桃(Actinidia)雌雄性别的分化中细胞形态变化、性别基因的分子标记和性别分化的生理生化基础,以及性别鉴定等方面的研究进展进行了综述,并对今后猕猴桃性别研究的发展趋势进行了展望.     

猕猴桃溃疡病病原菌的鉴定及生防菌的筛选

[目的]探明猕猴桃溃疡病的致病病原,为该病的生物防治提供有效的菌种资源.[方法]采用常规组织分离法从猕猴桃感染溃疡病的染病组织分离致病病原菌,从猕猴桃种植土壤和健康猕猴桃组织中分离细菌,采用抑菌圈法筛选拮抗菌株,通过形态学与分子生物学相结合的方法对分离的菌株进行鉴定.[结果]从猕猴桃感染溃疡病的染病组织中分离到9株菌株...     

扩增SRY基因鉴定塔里木兔性别的研究

[目的]采用分子生物学手段对外部性别鉴别特征缺失的塔里木兔进行性别鉴定.[方法]应用双重PCR法同时扩增SRY和APP基因进行性别鉴定.[结果]在验证PCR有效性的基础上,对未知性别的237例塔里木兔样本成功的鉴定出性别,其中121例为雄性,116例为雌性.[结论]实验所使用的引物具有高度的特异性,只能鉴别兔类动物的性别,对一些不完整的或外部性别鉴别特征缺失的兔类样品提供了可行的性别鉴定途径.     

中华猕猴桃不同性别叶片的形态学和解剖学观察

通过显微和扫描电镜（Scanning electron microscopy, SEM）观察,对中华猕猴桃（Actinidia chinensis Planch．）雌雄植株叶片的形态学差异进行了分析．结果发现,中华猕猴桃不同品种之间在叶片形态上存在着不同程度的差异,可作为品种区分的依据;同一品种不同性别植株叶片在叶形和叶柄直径方面存在着较明显的差异,但没有发现性别相关的特征性参数;气孔器分布在下表皮,气孔形态相似,但保卫细胞长宽比在不同性别之间差异明显;雄株叶片保卫细胞长宽比大于3,雌株长宽比小于3,此标记在不同品种的雌、雄植株中表现稳定．根据猕猴桃气孔器保卫细胞长宽比值,可以有效区分猕猴桃雌雄性别,是一种良好的性别鉴定遗传标记,能够应用于猕猴桃实生苗性别鉴定．     

秦美猕猴桃营养指标分析及猕猴桃粉的研制

[目的]分析秦美猕猴桃营养成分,并探讨猕猴桃粉的初加工工艺.[方法]以陕西秦美猕猴桃为原料,猕猴桃的营养成分通过理化试验测定,结合单因素试验确定猕猴桃粉干燥温度和稳定剂添加量.[结果]秦美猕猴桃中抗坏血酸、多酚、还原糖、总膳食纤维、总酸含量分别达到1 276.0 mg/kg、0.303 rmg/g、22.6％、11.7％、13.1 g/kg;氨基酸的种类有17种,总含量为11 286.36 mg/kg,营养价值极高.研究同时显示,采用热风干燥猕猴桃的最佳干燥温度为80℃,此时Vc含量损失较小并且颜色变化最小;以黄原胶为稳定剂,添加量为4％时,加工的猕猴桃粉的稳定效果最好.[结论]研究可为猕猴桃粉的工厂化生产提供一定的试验依据.     

猕猴桃抗溃疡病基因连锁SSR分子标记初步研究

【目的】研究与猕猴桃抗溃疡病基因连锁的SSR分子标记,为猕猴桃抗病育种提供早期分子筛选标记。【方法】以易感病的雌株西选二号和抗病的雄株SX45872杂交F1代的198株群体以及40份猕猴桃材料为试材,利用离体接种法进行抗性鉴定。利用SSR(Simple sequence repeat)技术,结合集群分类分析法(Bulked segregation analysis,BSA)进行猕猴桃抗溃疡病基因(PR)分子标记筛选。【结果】抗性鉴定结果表明,猕猴桃溃疡病抗/感病分离比符合由1对主效基因控制的1∶1分离比例。通过对51对SSR引物的筛选,获得了与抗溃疡病基因连锁的SSR分子标记UDK97-428116;将获得的SSR标记在40份猕猴桃材料中进行验证,分子标记结果与离体枝条接种结果一致率达95.5%,从而验证了该标记的可靠性。【结论】SSR标记UDK97-428116可用于猕猴桃材料溃疡病抗性鉴定和分子标记辅助育种。     

嗜水气单胞菌的分离与16S rDNA鉴定

[目的]分离并鉴定鱼嗜水气单胞菌,并构建系统发育分析.[方法]从云南某鱼场采集发病鱼的病变组织进行细菌分离与培养,并对分离菌株进行初步鉴定、16S rDNA鉴定和系统发育分析.[结果]分离培养到1株细菌,命名为Ah1305.经表型鉴定、生化试验及16S rDNA系统发育分析,鉴定为嗜水气单胞菌.[结论]该研究可为快捷、准确检测鱼嗜水气单胞引起的疾病提供参考.     

葛根SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

[目的]优化葛根SCoT-PCR反应体系,筛选适用于葛根的SCoT引物,为利用SCoT分子标记进行葛根种质资源鉴定、遗传多样性分析及分子标记辅助育种提供技术支持.[方法]采用正交设计对SCoT-PCR反应体系中的DNA模板量、dNTPs浓度、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶量和引物浓度5个因素进行优化,利用最佳SCoT-PCR反应体系筛选出适用于葛根的SCoT引物,并对该体系进行验证.[结果]最佳葛根SCoT-PCR反应体系20.00μL:DNA模板50.00ng,dNTPs 0.25mmol/L,Mg2+1.50mmol/L,引物0.80μmol/L,TaqDNA聚合酶0.50U.利用该体系从36条SCoT引物中筛选出35条可从葛根中扩增出清晰条带的引物.使用3条引物对18个葛根材料进行PCR扩增,PCR产物表现出良好的重复性、稳定性和丰富的多态性.[结论]建立的最佳葛根SCoT-PCR反应体系和筛选获得的35条SCoT引物可适用于葛根种质资种鉴定、遗传多样性分析、相关分子标记开发等研究.     

猕猴桃实生苗抗性鉴定与砧木筛选

[目的]筛选猕猴桃抗性砧木.[方法]通过接种病菌、抗病性筛选以及CAT、POT酶活性测定筛选抗病性植株.[结果]‘徐香’实生苗2号和‘布鲁诺’实生苗3号,可以作为猕猴桃抗性砧木使用.[结论]‘徐香’实生苗2号和‘布鲁诺’实生苗3号将作为猕猴桃砧木加以利用,为猕猴桃的抗病栽培提供新的方法.     

一种基于基因组RAPD分析的紫山药品种分子鉴定方法

[目的]研究一种基于基因组RAPD分析的紫山药品种分子鉴定方法.[方法]以来自中国不同地区的8个紫山药品种为材料,对RAPD技术在鉴定紫山药品种中的科学性进行技术上的验证与分析.[结果]不同引物的RAPD-PCR结果在8种紫山药中体现出谱带清晰度及数量方面的不同特点,其中引物S1255的多态性较高且谱带清晰,可以此为基础鉴定紫山药的不同品种.[结论]理想的反应条件能保证RAPD技术具有很好的稳定性,是适用于鉴定紫山药品种的简易与理想的DNA分子标记.     

水稻耐盐性SSR标记引物的筛选

[目的]针对两个典型的水稻品种(系)耐盐材料(02-11和津源85)和两个敏感材料(秋田小町和99-28),进行水稻耐盐相关的SSR标记的研究.[方法]选取水稻12条染色体上的565对SSR引物进行亲本间多态性筛选;选择适合的标记引物,并确定PCR扩增的最适退火温度.[结果]在565对引物组合中筛选出68对引物在4个材料间有多态性;明确了主要标记引物的通用退火温度为55℃.[结论]68对可作为该水稻群体耐盐QTL分析的SSR标记引物,为进一步进行水稻耐盐性分子鉴定和耐盐分子辅助育种提供参考.     

半滑舌鳎养殖群体性腺发育观察

[目的]了解半滑舌鳎养殖群体的性别遗传比例及雌、雄性腺发育过程,为高比例雌性育种提供参考依据.[方法]利用性别连锁微卫星标记scaffold 1128_343检测两个半滑舌鳎养殖群体生长过程中雌性比例的变化特征,并结合遗传性别鉴定和石蜡切片技术,跟踪观察半滑舌鳎25日龄至两年性成熟的整个性腺发育过程.[结果]对12~76日龄的两个养殖群体进行遗传性别鉴定,发现群体Ⅰ和群体Ⅱ的平均遗传雌性比例分别为50.00%和50.23%,基本符合1∶1的分布规律.半滑舌鳎性腺发育早期(25日龄)雌鱼和雄鱼的性腺结构无明显差别,至56日龄雌、雄鱼性腺结构开始出现差别,至76日龄雌、雄鱼性腺结构出现明显差别,至106日龄雌、雄鱼性腺出现明显分化,可通过性腺切片鉴定出雌、雄性别.[结论]半滑舌鳎雌、雄鱼遗传性别比例基本符合1∶1的分布规律,雌鱼性腺发育和分化较雄性更快、过程更复杂.     

主载品种镇稻88对水稻条纹叶枯的抗性特征及其遗传研究

[目的]明确镇稻88对水稻条纹叶枯病的抗性特征及其抗性遗传模式,寻找与抗条纹叶枯病基因连锁的分子标记.[方法]利用单分蘖鉴定、苗期接种鉴定、非嗜性测验和抗生性测验分析镇稻88对水稻条纹叶枯病和介体灰飞虱的抗性;分别采用单分蘖鉴定和苗期接种鉴定方法对武育粳3号与镇稻88构建的F2群体、F2∶3家系进行水稻条纹叶枯病抗性遗传分析;以SSR标记连锁分析方法对抗病基因进行定位.[结果]镇稻88表现出较强的病毒抗性和较弱的抗虫性;其对水稻条纹叶枯病的抗性表现为显性单基因的遗传模式;SSR标记分析显示该抗病基因位于水稻第11染色体上,与标记RM229间的遗传距离为4.7 cM.[结论]镇稻88对水稻条纹叶枯病的抗性主要来自于对病毒的抗性,由一对主效核基因控制,以镇稻88为抗病亲本结合本研究结果,可望加快水稻条纹叶枯病抗性品种选育的速度.     

SSR标记技术鉴定新食葵6号品种纯度的研究

[目的]通过利用SSR分子标记技术测定向日葵种子纯度,以期为生产加工应用提供准确、便捷的杂交种种子纯度鉴定方法提供依据.[方法]该研究以新食葵6号及其双亲的DNA为模板,通过DNA提取、PCR扩增反应和 制作电泳的步骤,进行了约100对SSR物分子标记的筛选.[结果]SSR多态引物标记532在新食葵6号母本分别产生特异条带大小为496bp,父本特异标记条带大小为451 bp;引物标记574在母本上特异条带大小为364 bp,父本上的特异标记条带大小为384 bp,同时室内分子鉴定的纯度和田间鉴定纯度基本一致;通过SSR分子标记方法可出可得到区分父本、母本和杂交种的引物标记532和574,这2个引物标记可有效用于鉴定上述新食葵6号杂交种种子的纯度,辨别种子的真伪.[结论]该方法具有简单,快速、准确、重演性高的优点,目前该方法已成为向日葵品种鉴定的主要方法.     

不同浓度氯吡脲对红阳猕猴桃质量及其安全性的影响

[目的]分析不同浓度氯吡脲处理的红阳猕猴桃产量、品质及其安全性,筛选适合红阳猕猴桃生产应用的氯吡脲使用方案.[方法]分别对开花后10d的红阳猕猴桃花朵喷施5.0、6.7、12.5和50.0 mg/L氯吡脲溶液,以喷清水为对照(CK),喷施后0、6、24、72、120和168 h分别测定各处理氯吡脲在红阳猕猴桃花体中的残留量;喷施后95 d测定果实平均单果重,采果后1~12 d测定各处理果实的失重率和可溶性固形物、有机酸、维生素C(Vc)含量及果实中氯吡脲的残留量.[结果]红阳猕猴桃花朵喷施5.0~50.0 mg/L氯吡脲后,其成熟果实内的氯吡脲残留量均低于国家标准(o.050mg/kg).6.7 mg/L氯吡脲处理猕猴桃的平均单果重极显著轻于12.5 mg/L处理(P<0.01,下同),极显著重于CK及其他氯吡脲处理.6.7 mg/L氯吡脲处理的果实储存时间最长,且与CK及其他氯吡脲处理差异显著(P<0.05,下同);可溶性固形物、有机酸含量极显著高于其他氯吡脲处理,Vc含量显著高于其他氯吡脲处理.[结论]6.7 mg/L氯吡脲处理红阳猕猴桃的平均单果重较重、储存时间长、果实外观较好,可溶性固形物、有机酸及Vc含量较高,食用安全,可在红阳猕猴桃花期推广使用.     

草鱼的微卫星亲权鉴定

[目的]从亲权排除率、鉴别准确率、鉴别成功率等方面评价微卫星标记鉴别草鱼亲权关系的可行性,为草鱼系谱信息的确定奠定基础.[方法]利用8个微卫星标记检测5个草鱼家系亲本(F.)及其子代(F1)的基因型,以Cervus 3.0软件进行亲权鉴定,并统计微卫星位点的等位基因数(Na)、多态信息含量(PIC)、观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)等;最后通过模拟分析和试验验证,评估8个微卫星位点最多可鉴定的亲本数及其与鉴定率、置信度之间的关系.[结果]8个微卫星位点中,当两个亲本基因型未知时,单个亲本排除率(E-1P)介于0.342~0.668,平均值为0.520;当一个亲本基因型已知时,另一个亲本的排除率(E-2P)介于0.521~0.802,平均值为0.681;一对亲本组合的亲权排除率(E-PP)介于0.711~0.937,平均值为0.847.以95%置信水平和100%鉴定率为标准,模拟分析及试验验证结果表明,所选择的8个微卫星位点最多可以鉴定598个已知性别的亲本或431个未知性别的亲本.[结论]所选的Hl18、H137、H165、H148、4703、C2489、H57、H81等8对微卫星标记可在生产及科研试验中用于获取草鱼系谱信息.     

乌昌地区传统酸牛奶中乳酸菌的分离鉴定

[目的]新疆酸奶中菌种资源丰富,因地域性差异,其中所含乳酸菌也有所不同,进一步了解乌昌地区菌种资源,为该区酸奶发酵剂的开发提供参考.[方法]采集新疆乌昌地区酸奶样品,采用传统形态学、生理生化特性方法对分离并纯化出的20株乳酸菌进行鉴定.[结果]经传统形态学、生理生化特性方法鉴定为7株德氏乳杆菌乳亚种(L.delbrueckii subsp.lactis),3株干酪乳杆菌(L.casei),2株发酵乳杆菌(L.fermentum),3株乳酸乳球菌(L.lactis subsp.lactis),2株乳酸粪肠球菌(Enterococcus faecalis),1株唾液链球菌(S.salivarius),2株未鉴定到种.[结论]结合生理生化鉴定结果,对样品中分离出的CJ2、QT1、QT2、DBC1四株乳酸菌进行16S rDNA基因序列分析,构建系统发生树.经分析QT2和DBC1两株乳酸菌为Lactobacillus delbrueckii subsp.indicus,CJ2和QT1两株为Enterococcus faecalis.     

解磷拮抗真菌分离鉴定及其对猕猴桃软腐病的生防评价

[目的]筛选可应用于猕猴桃果实软腐病的高效生防菌株,为猕猴桃软腐病生防制剂研发提供菌种资源.[方法]采集有猕猴桃软腐病发生的猕猴桃种植园健康植株根际土壤,利用解磷选择性培养基分离土壤中解磷真菌,采用平板对峙法、菌落直径法、继代培养及发酵液抑菌试验等从中筛选对猕猴桃软腐病菌具有拮抗作用的菌株,通过形态学结合分子生物学方法对拮抗菌株进行鉴定.[结果]从猕猴桃根际土壤中分离得到35株解磷真菌菌株,通过对峙培养从中筛选出5株对猕猴桃软腐病菌具有拮抗作用且抑菌率超过50.00%的菌株,其中MHT0308菌株的抑菌效果最佳,对猕猴桃软腐病菌的抑菌率达87.71%,复筛抑菌圈也明显,抑菌直径达33.50 mm;MHT0308菌株的含菌发酵液和无菌发酵液均对靶标菌生长有抑制作用,抑菌率分别达88.13%和80.87%;猕猴桃果实经MHT0308菌株发酵液处理后对猕猴桃软腐病的离体防效达87.00%;根据MHT0308菌株形态学特征结合其分子生物学鉴定结果,确定MHT0308菌株为哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum).[结论]MHT0308菌株对猕猴桃软腐病具有较好的防治效果,可作为一种重要的生防菌资源用于猕猴桃软腐病防治研究.     

微波消解火焰原子吸收光谱法测定几种猕猴桃中铜和钙

[目的]建立微波消解猕猴桃样品,FAAS法测定猕猴桃中的钙元素和铜元素含量的方法.[方法]以浓硝酸为溶剂,微波消解猕猴桃样品,标准曲线法测定,优化了样品消解条件和原子吸收测定的参数.[结果]测定表明,金艳、红阳、金果3种猕猴桃中的铜含量为0.058、0.076、0.063 mg/g,钙含量分别为1.812、1.530、1.539mg/g,回收率为94％ ～ 106％,RSD为3.3％～4.7％.[结论]该测定方法简单可行、结果准确,可用于测定猕猴桃中的铜和钙含量.