速效救心丸通过肥大细胞促进胎鼠宫内发育的作用

为探讨速效救心丸(QAHR)通过肥大细胞及其主要介质促进宫内胎儿生长发育的作用,将140只雌性小鼠随机分正常对照组、速效救心丸250 mg/kg、500 mg/kg和750 mg/kg给药组。当小鼠妊娠至16 d时脱颈椎处死小鼠,对其子宫组织分别进行组胺(HA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活力测定,子宫肥大细胞(MC)、肝素阳性细胞显色及微血管密度(MVD)测定。结果表明,500 mg/kg和750 mg/kg的速效救心丸给药组小鼠子宫MC数、肝素阳性细胞数、子宫MVD和NOS活力较对照组显著(P0.05)升高,而子宫HA含量显著(P0.05)低于对照组。提示速效救心丸可能通过增加小鼠子宫组织内MC数量及其主要介质的释放,改善血液循环和促进微血管生成,从而促进宫内胎儿的生长发育。     

光照对小鼠下丘脑视上核及乳腺组织钟基因Clock表达的影响

分析光照对泌乳期小鼠下丘脑视上核(SCN)及乳腺组织内生物钟基因Clock表达的影响.采用荧光定量RT-PCR法测定不同光照条件下SCN和乳腺组织中Clock基因的昼夜表达规律.试验发现Clock基因的mRNA不但在SCN,而且在乳腺组织也具有昼夜节律性表达.在光照-黑暗交替光制下,SCN和乳腺组织Clock基因的mRNA表达的峰值相位存在约6 h的相位差;在全黑暗条件下,Clock基因的mRNA表达存在昼夜节律,SCN和乳腺组织Clock基因的mRNA表达的峰值相位基本同步.结果显示,Clock基因的昼夜节律表达具内源性特征;光照影响Clock基因mRNA的表达.     

家蚕DNA甲基转移酶功能预测及其在BmNPV感染下的表达特征

【目的】明确家蚕DNA甲基转移酶基因（BmDNMT）生物信息学基本特征及其在家蚕核型多角体病毒（BmNPV）感染前后的表达情况,揭示DNA甲基化在家蚕抗病毒免疫方面的作用机制,为挖掘家蚕抗病毒标志基因和药物靶标蛋白等提供理论依据。【方法】通过OrthoDB、MultiLoc2、SherLoc2、PSORTII、SMART、SWISS-MODEL及Schr?dinger等在线生物信息学分析软件进行BmDNMT蛋白氨基酸同源比对、系统进化分析、亚细胞定位、功能结构域预测、三级结构同源建模及小分子配体对接口袋预测,并采用实时荧光定量PCR分析BmDNMT基因在家蚕感染BmNPV后不同时间不同组织中的时空表达特征。【结果】BmDNMT基因包含BmDNMT1和BmDNMT2,分别位于家蚕8号染色体和11号染色体上,其推导BmDNMT氨基酸序列均与烟草天蛾DNMT氨基酸序列的亲缘关系最近。BmDNMT1蛋白大量存在于细胞核,少量分布在细胞质;而BmDNMT2蛋白大量存在于细胞质,少量分布在细胞核及线粒体。BmDNMT1蛋白的功能结构域多于BmDNMT2蛋白,二者均含有DNA甲基化酶功能结构域,且具...     

姜黄素对小鼠睾丸细胞株TM4细胞的影响

主要探讨姜黄素(Curcumin,CCM)对支持细胞株TM4体外生长的影响.通过采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测了5种不同浓度的姜黄素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的影响.结果表明,姜黄素抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖效应,当用40 μmol/mL的姜黄素处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TUNNEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异.说明姜黄素在预防和治疗睾丸癌方面有一定的应用价值.     

Cep164基因缺失对小鼠胚胎早期脑发育的影响

利用Foxg1、Gbx2、Otx2、Fgf8和En1探针与小鼠胚胎进行原位杂交,分析Foxg1、Gbx2、Otx2、Fgf8和En1基因在Cep164基因缺失小鼠胚胎脑中的表达情况,确定Cep164基因对脑发育的影响。结果显示,与野生型相比,Cep164基因突变小鼠胚胎头部Gbx2、前中脑Otx2和中后脑的边界Fgf8表达无明显变化,但端脑泡Foxg1表达减少,前神经脊Fgf8表达减少,Otx2在晶状体板和嗅状体板表达减少,背侧中脑和后脑前En1表达减少。这说明Cep164基因是维持胚胎头部正常发育的重要基因,Cep164基因突变会导致前脑发育异常,主要影响嗅觉和视觉功能。     

高钼低铜对小鼠睾丸组织脂质过氧化作用的影响

为研究高钼、低铜及两因素协同作用对小鼠睾丸组织脂质过氧化作用的影响,将80只健康雄性昆明系小鼠随机分为4组,分别为对照组(Cu 3 mg/L,Mo 0 mg/L)、高钼组(Cu 3 mg/L,Mo600 mg/L)、低铜组(Cu 0 mg/L,Mo 0 mg/L)、低钼高铜组(Cu 0 mg/L,M0 600 mg/L...     

卵巢因子对小鼠卵母细胞发育的影响

卵巢因子对卵母细胞发育的影响已成为发育生物学研究的主要内容,卵巢产生的大量生长因子通过自分泌/旁分泌方式对生发泡破裂(Germinal Vesicle Breakdown,GVBD)、第一极体释放、胚胎发生及早期胚胎发育发挥调控作用.对卵巢因子调控作用的深入研究有助于进一步了解卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的细胞通讯系统网,寻找治疗不孕不育的新途径和新方法,为体外成熟、体外受精及胚胎干细胞分化制定更加优化的培养环境.概述了目前卵巢因子在小鼠卵母细胞发育调控中的研究进展.     

苎麻CCoAOMT基因干扰表达载体构建及对烟草的转化

根据已克隆的苎麻CCoAOMT(咖啡酰辅酶-A-氧甲基转移酶)基因cDNA序列,以其编码纤维素合成酶底物结合和催化合成结构域的 cDNA 序列为目标,采用PCR扩增方法引入克隆的酶切位点,分别将其正、反方向克隆到植物RNA干扰表达质粒PFGC5941 T-DNA上CHSA内含子两侧,构建了植物表达苎麻CCoAOMT基因的干扰重组Ti载体.将该载体转入根癌农杆菌LBA4404后,采用农杆菌介导法对木质素研究的模式烟草WS38进行了遗传转化,抗性筛选和分子检测表明,成功获得了转基因植株.转基因植株生长延缓,表明可能存在基因表达干扰现象.     

增效抗凝血灭鼠剂对大鼠、小鼠CT和PT的影响及中毒鼠肝脏病理学观察

以SD大鼠和小鼠为实验动物,检测和比较了增效抗凝血火鼠剂对凝血时间(CT)和凝血酶原时间(PT)的影响.并观察增效抗凝血灭鼠剂中毒鼠的肝脏组织病理变化,结果表明,增效杀鼠醚能引起SD大鼠和小鼠的CT和PT显著延长,相对于杀鼠醚,相同浓度的增效杀鼠醚具有史强的抗凝血功能;中毒鼠肝脏病理学观察结果发现.增效火鼠剂引起更严重的肝组织损伤、坏死,进一步阻碍其凝血功能,其中增效杀鼠醚对SD大鼠的影响程度大于小鼠,说明增效杀鼠醚埘SD人鼠作川效果更明显.     

过量叶酸对小鼠胚胎发育及Vangl1基因表达的影响

为探究过量叶酸对胚胎发育期Vangl1基因表达量、胚胎及神经管发育的影响,通过对昆明小鼠饲喂过量叶酸（4倍标准量）,观察和分析胚胎/胎儿发育情况及神经管闭合的组织学状况;采用逆转录酶PCR(RT-PCR)检测,探讨了平面细胞极性途径信号通路中重要基因Vangl1基因表达情况。结果表明：过量叶酸添加易导致卵裂速度过快、不同程度的胚胎退化、发育与胚龄不一致等发育异常,胎儿发育也呈现颅脑顶部未闭合、脊椎裂、发育迟缓等畸形情况。在小鼠怀孕初期E_1.0～E_2.5时,无法检测出Vangl1基因或表达水平较低;在E_9.5、E_10.5、E_11.5,相比标准叶酸添加而言,过量叶酸组的Vangl1基因同期表达显著下调（P<0.05）。因此,围产期补充过量叶酸对胚胎/胎儿发育产生不利影响,同时对神经管发育相关的重要基因Vangl1表达有一定的抑制作用。     

猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响

研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕初期的猪输卵管上皮细胞可促进与之体外共培养的小鼠早期胚胎的发育;随着早期小鼠转基因胚胎的发育,PCR检测呈阳性的转基因胚胎的比率逐渐降低。     

小鼠植入前胚胎MuERV-L基因表达特征研究

利用实时定量RT-PCR技术,对体外培养的小鼠植入前胚胎发育过程中鼠内源逆转录病毒样基因(MuERV-L)的表达进行研究,并通过appdicolin(DNA复制抑制剂)、TSA(组蛋白去乙酰化酶特异性抑制剂)分别抑制1-细胞期DNA的复制和合子基因组激活(ZGA)过程中组蛋白去乙酰化,探索MuERV-L基因表达的变化.结果表明:MuERV-L基因的转录在受精后9～11 h快速启动,并在2-细胞阶段出现瞬时高表达.抑制试验显示:1-细胞期DNA的复制受抑制后,MuERV-L基因的转录也被显著抑制(P《0.05);在TSA处理的4-细胞胚胎中,MuERV-L基因显著高表达(P《 0.01),且其水平达到正常2-细胞的转录水平.提示:该基因可能对小鼠胚胎ZGA过程起重要作用.     

不同培养液对昆明小鼠体外受精率及早期胚胎体外发育的影响

在TYH受精液中添加促卵泡素（FSH）和苯甲酸雌二醇（E2）,检测不同浓度的FSH和E2对昆明小鼠的体外受精率的影响;检测在M16、CZB两种培养液中添加胎牛血清（FCS）与否对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响．结果表明：在．rYH中添加1．0IU／mL FSH,受精率和2-细胞胚率显著高于对照组;在TYH中添加0．1μg／mL E2,受精率和2-细胞胚率也显著高于对照组．在CZB中添加体积分数为10％FCS,可显著减少2一细胞期体外发育阻断,并显著提高小鼠胚胎体外发育的囊胚率,可见,以TYH添加1．0IU／mL FSH和0．1μg／mL E2为受精液,以含体积分数为10％FCS的CZB为胚胎培养液,小鼠胚胎可获得较高的囊胚率．葡萄糖并不是小鼠胚胎形成囊胚所必需的．     

过氧化氢对小鼠骨髓微核率和孕鼠胚胎着床及生长的影响

通过体内试验研究了过氧化氢对小鼠骨髓微核率和胚胎着床及孕鼠生长发育的影响。将妊娠的昆明种(KM)小鼠分成5个处理组,分别为环磷酰胺(40.00 mg/kg)、蒸馏水和过氧化氢(500.00,125.00,31.25 mg/kg)组。于妊娠后6~15 d,每天采用灌胃给药,环磷酰胺组于妊娠后11~13 d腹腔一次性注射。每3 d称重1次,于妊娠第18 d称重后剖腹检查。另取雌雄各半KM小鼠分成5个处理组,分别为环磷酰胺、蒸馏水和过氧化氢(500.00,100.00,10.00 mg/kg)组,均采用灌胃染毒,每天1次,连续4 d,第5 d处死小鼠,取股骨髓液常规制片,计算红细胞微核率。结果表明,吸收胎和死胎数蒸馏水组为5.56%,中剂量过氧化氢组增加到19.53%(P<0.01),低剂量组增加到13.14%(P<0.05)。蒸馏水组小鼠嗜多染红细胞微核率为0%~0.002%,过氧化氢组增加到0.017%~0.032%(P<0.01)。在本试验剂量范围内过氧化氢有明显的胚胎毒性和遗传毒性。     

活性氧(ROS)对小鼠胚胎分裂指数的影响

小鼠体内发育的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚的分裂指数分别为5．85，4．64，2．16，4．96和6．25，508，2．77，3．03．经统计分析，体内与体外CZB培养的胚胎分裂指数无显著差异，说明体内发育的胚胎和体外CZB培养胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．体外CZB培养的不同时期添加H2O2的胚胎，发育至桑椹胚、早期囊胚、扩张囊胚阶段，制作胚胎标本，胚胎的分裂指数显示：扩张囊胚的0～72h组的分裂指数与0～12h，24～36h组有显著差异（P〈0．05），而与其它各发育阶段的各组分裂指数均无差异，说明经H2O2处理之后存活下来的胚胎与正常体外发育胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．     

小鼠DAZL基因启动子核心区域分析及甲基化对其启动活性的影响

旨在确定小鼠DAZL启动子基本活性区,并分析启动子区域甲基化对其启动子活性的影响,探究小鼠DAZL的表达调控机制。采用PCR法扩增不同长度的小鼠DAZL启动子,插入到p EGFP-N1和p GL3-Basic载体,构建重组载体。将重组载体转染GC-1细胞系,并通过添加适量DNA甲基化转移酶抑制剂(5-azacytidine,5-aza-C)逆转各试验组启动子片段的甲基化水平,然后利用双荧光素酶报告基因检测系统检测DAZL活性变化。双荧光素酶活性检测结果表明,小鼠Dazl启动子基本活性区域为5’侧翼区-370~-36 bp,在-370~-166 bp区域存在不可或缺的重要调控元件;经5-aza-C处理后,各缺失片段载体转染的GC-1细胞DAZL的启动子活性与对照组相比均有不同程度的提升,但差异不显著。本试验确定了小鼠DAZL启动子基本活性区域,证明降低小鼠睾丸DAZL启动子区域甲基化水平,有助于DAZL在生殖细胞中特异性表达,为进一步探究DAZL生物学功能和调控机制提供参考。     

两种鼠蛲虫线粒体cytb基因的种间及种内序列变异研究

首次研究了小鼠四翼无刺线虫和隐管状线虫在线粒体细胞色素b(cytb)基因部分序列的种间及种内变异.从甘肃兰州地区LY和LS两个实验动物中心的小鼠肠道内收集了41个蛲虫样品(LY1-20、LS1-21),PCR扩增其cytb基因部分序列,经测序和序列分析结果发现:四翼无刺线虫cytb有效序列为531bp,而隐管状线虫有效序列为567bp.用软件ClustalX1.83截取两种鼠蛲虫cytb基因长度共同的序列,比对后发现无种内差异,但种间差异高达31.51%.研究结果初步表明,cytb基因序列在鼠蛲虫种内较保守,但种间存在较高的变异率,可作为两种常见鼠蛲虫种间分子鉴定的遗传标记.     

Vc对Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因表达的影响

为探讨维生素C(Vc)调控Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因的转录表达规律,用RT-PCR方法研究小鼠Musclin基因及生脂基因(FAS、PPARγ、TGH)表达水平的变化。结果表明,Cd对小鼠Musclin基因及生脂基因的表达具有显著抑制作用(P0.05),Vc+Cd组与只加Cd组比较,小鼠Musclin基因及生脂基因的表达水平明显升高,Musclin与FASmRNA表达存在显著负相关(P0.01),与PPARγ基因存在显著正相关(P0.05),与TGH基因相关性不显著(P0.05)。研究结果说明,Vc可提高Cd中毒小鼠骨骼肌中的Musclin基因及生脂基因的表达水平。     

卵巢移植对雄性受体鼠精子及生殖能力的影响

将1日龄小鼠卵巢移植入成年受体雄鼠肾囊下,分别于移植后21d(A组)和28d(B组),回收卵巢移植体和卵母细胞,采集附睾尾精子,并对睾丸及精子进行形态学检测,计算畸形精子数.移植受体雄鼠的繁殖能力将依据与雌鼠合笼交配后的窝产活仔记录进行评价.结果表明,卵巢移植体生长并有卵泡发育,A、B组回收卵母细胞数组间无显著差异(P0.05);移植组不同时期卵巢移植体对雄鼠睾丸及精子形态无明显影响,其畸形率与对照组(正常雄鼠)相比差异不显著(P0.05);移植受体雄鼠与母鼠配种的窝产活仔数与对照组无显著差异(P0.05).初步证实在卵巢异性移植构建雌、雄性腺同体的生理环境中,卵巢移植体对受体雄鼠精子及生殖能力无明显影响.     

P450芳香化酶活性调控对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生的影响

［目的］探索P450芳香化酶抑制剂——来曲唑调控内源性雌激素合成,对小鼠睾丸和附睾发育及精子发生产生的影响。［方法］将SPF级昆明系雄性小鼠随机分为对照组和试验组,试验组分为0.001、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010 mg/kg来曲唑剂量组,连续灌服3 d,在停药后的第9、15和30天检测小鼠睾丸和附睾的发育及精子的发生情况。［结果］①各试验组与对照组比较,体重增长率无显著差异;②0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,在灌服后的第15天睾丸系数显著减少（P〈0.05）,其他各试验组与对照组比较无显著差异;③各试验组与对照组比较,附睾系数无显著差异;④在第15和30天,0.006-0.010 mg/kg来曲唑组与对照组比较,精子密度显著减少（P〈0.05）,其他各组与对照组无显著差异。［结论］该研究使用的来曲唑浓度,对小鼠体重增长率及睾丸和附睾的发育率无显著影响或影响很小,但是超过0.006 mg/kg浓度时抑制精子的发生,说明一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性雌激素合成,能够直接影响精子的发生能力。