β-伴大豆球蛋白β亚基的纯化及免疫活性鉴定

等电点沉淀法和凝胶过滤层析提纯的β-伴大豆球蛋白经6 mol·L-1脲变性后解聚为游离亚基,利用DEAE琼脂糖凝胶F F离子交换层析分离纯化β-伴大豆球蛋自亚基,并对纯化亚基进行透析复性.同时将β-伴大豆球蛋白免疫家兔制备抗血清,利用免疫印迹方法检测纯化的亚基与β-伴大豆球蛋白抗血清是否发生免疫反应.结果表明:利用DEAE琼脂糖凝胶F F阴离子交换层析可以纯化出高纯度的β-伴大豆球蛋白β亚基,纯化的β亚基可以志抗β-伴大豆球蛋白抗体结合,具有免疫活性.     

杜兰落花生球蛋白基因家族的生物信息学分析

为了解球蛋白基因家族在杜兰落花生(Arachis duranensis)种子中的特征,利用生物信息学方法对杜兰落花生球蛋白基因进行全基因组鉴定及表达模式分析。结果表明,杜兰落花生含有9个球蛋白基因,家族成员间理化特性总体差异不大,亲缘关系相近的蛋白具有相似的保守基序组成。根据物种间的球蛋白系统进化树,球蛋白进化关系符合物种之间的亲缘关系。杜兰落花生球蛋白在进化过程中较为保守,受纯化选择主导,但在部分进化枝上存在正选择位点。栽培种花生转录组数据分析表明,15个花生球蛋白基因在花生种子中检测到表达,其中4个表达量远超其它成员,在花生荚果成熟后期表达量仍较高。     

花生球蛋白基因片段的克隆

为克隆花生贮藏蛋白基因建立了花生未成熟种子的cDNA文库。根据大豆贮藏蛋白的保守区设计特异引物，从花生cDNA文库中扩增出450bp的特异性产物。经过测序分析表明与大豆球蛋白各亚基基因的同源性均达90％以上，说明已得到花生球蛋白基因的cDNA片段。该片段可以作为探针从cDNA文库中筛选花生球蛋白基因的cDNA全序列。     

大豆属种子蛋白的电泳分析

用SDS梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了Glycine亚属10个种共26份收集物的种子蛋白,片与soja亚属的典型种子蛋白谱进行比较。一般说来,多年生种含有与soja亚属的大豆球蛋白和β—副大豆球蛋白相似的相应迁移率的种子蛋白,但变异更为广泛,除β—副大豆球蛋白各亚基定位的凝胶区域里变异更显著而普遍外,还观察到大豆球蛋白A、B亚基定位的凝胶区域中电泳带型的变异。每种都产生一个独特的电泳谱而能相互区别。根据种子蛋白电泳类型,9个多年生种可分为三组。第一定组仅G.tomentella一种,其电泳谱与soja亚属最为接近。第二组包括G.cladestina、G.canescens G.latrobeana和G.argyraea四种,第三组由G.tabacina、G.latifolia、G.cyrtola6a和G.falcata四种组成。而G.wightii的电泳谱是最为独特的。在多数种内各收集物之间观察到相对小的种子蛋白变异。     

转基因花生对根瘤菌的影响和外源基因向根瘤菌逃逸风险性研究

用含花生条纹病毒壳蛋白基因的转基因花生品系TP-1、TP-7为材料,通过水培生长试验表明在花生不同生长时期,转基因花生对单株花生根瘤菌结瘤数量和结瘤重量无明显影响.对从转基因花生品系TP-1、TP-7上分离的100个根瘤菌样品PCR检测结果,花生根瘤菌中无花生条纹病毒壳蛋白基因特异性片断.结果初步说明导入花生的花生条纹病毒壳蛋白基因不会对根瘤菌结瘤生长特性产生影响,外源基因从花生向根瘤菌逃逸的机率很小.     

黑龙江省大豆品种球蛋白含量比较及其豆腐产品的研究初报

从省内各地区收集53个栽培大豆品种,按Appu Rao和Narasinga Rao的方法,分离鉴定各品种种子蛋白中球蛋白的数量。结果表明,黑龙江省栽培大豆品种种子球蛋白含量占种子蛋白质含量的34.54—80.77％,含量的变幅较大,表明品种间有明显的差异。其中球蛋白含量在60％以上的有11个品种,占品种总数的20.75％,含量在50％以上的品种有22个,占41.51％,还有20个品种其含量低于50％,占品种总数的32.1％。 大豆种子蛋白中的球蛋白占绝大部份。各品种球蛋白含量明显影响豆腐产品的数量。品种的球蛋白与豆腐湿重呈显著正相关,回归分析表明,豆腐湿重对球蛋白存在着线性关系。豆腐干重与球蛋白组分7S/11S值达显著水平,回归分析表明,豆腐干重对7S/11S的回归分析存在着线性关系。     

大豆蛋白的结构、营养及功能性质的研究进展

简要综述了大豆分离蛋白、大豆伴球蛋白及大豆球蛋白的结构、营养价值及功能等方面的研究进展,对大豆蛋白在食品体系中的广泛应用提供参考。     

等电点沉淀法分离大豆球蛋白酸性亚基和碱性亚基

利用β-巯基乙醇切断大豆球蛋白酸性亚基和碱性亚基之间二硫键的基础上,根据两类亚基等电点的差异分离纯化大豆球蛋白亚基,从而建立了分离大豆球蛋白酸性亚基和碱性亚基的等电点沉淀法.利用这一方法分离得到的酸性亚基和碱性亚基纯度分别为92.69%和80.76%,酸性亚基和碱性亚基的净产率分别达31.40%和41.64%.该方法是一种简单有效、价格低廉的大豆球蛋白亚基分离方法.     

利用蛋白质组学技术鉴定大豆籽粒贮藏蛋白A1aB1b亚基缺失体

利用SDS-PAGE对220份大豆种子贮藏蛋白亚基含量进行筛选,在获得大豆籽粒贮藏蛋白11S组分组I亚基变异种质的基础上,经双向电泳分辨大豆贮藏蛋白亚基正常品种(南农大黄豆)和亚基变异品种(桂阳紫金豆)成熟种子总蛋白的蛋白质组.用PDQuest软件分析双向电泳凝胶图谱,发现在大豆贮藏蛋白11S酸性亚基位置有等电点和分子量分别为5.40和37.85kDa、5.24和37.2kDa、5.15和37.05kDa的蛋白质点在正常种子中表达而在变异种质种子中未表达.对这3个蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(PMF),对获得的PMF用Mascot软件在NCBInr数据库中查询比对,鉴定出这3个蛋白质点均为大豆球蛋白A1aB1b亚基同源三聚体,表明变异种质种子缺少贮藏蛋白A1aB1b亚基.     

花生种子总RNA提取的一种有效方法

从植物中提取RNA的方法有多种,由于花生种子富含脂肪、蛋白质、多糖和酚类化合物,有些方法并不适于花生种子RNA的提取.本文设计了一种从花生种子中分离高质量总RNA的方法,并提取了花生的根、茎、叶、种子等不同器官的RNA.结果证明,利用该方法提取的花生种子总RNA质量较高,完全能满足后续的分子生物学研究.同样也适于花生根、茎、叶总RNA的提取.     

大豆属贮存蛋白的研究——Ⅰ、大豆及某些野生类型大豆球蛋白构成的比较

从三个栽培种及六个野生类型的大豆种子中分离出三种不同的球蛋白,即11S,7S和2S球蛋白,并以超速离心和凝胶电泳加以鉴定。各类型大豆的球蛋白组成有很大差别。从野生、半野生和栽培的演化趋势来看11S蛋白逐渐增加,7S蛋白逐渐减少(见表2)。2S蛋白在含量上表现为多种多祥。同时在半野生类型的大豆中找到了一个富含11S球蛋白的类型。     

微小毛霉凝乳酶对大豆蛋白进行组分分离的研究

大豆球蛋白（7S）和β-伴大豆球蛋白（11S）是大豆中两种主要的贮藏蛋白,在结构和功能特性上具有很大的差异,广泛应用于食品及非食品领域。传统分离大豆蛋白组分的方法都需要添加还原剂,其残留成为影响人体健康的安全隐患。利用微量凯氏定氮方法比较了微小毛霉凝乳酶作用于大豆蛋白和牛奶蛋白后产生的凝聚效果,发现其对大豆蛋白和牛奶蛋白有着不同的蛋白沉淀率。进一步试验表明：微小毛霉凝乳酶具有特异性的凝聚大豆蛋白11S组分的特性,且这种分离作用与酶反应降低了蛋白溶液的pH值无关。因此,微小毛霉凝乳酶可以用于大豆蛋白7S和11S组分的分离。     

花生青枯病种传研究初报

１９９１和１９９３年从湖北红安花生青枯病病地采集的花生种子，未经晾晒直接播于温室，青枯病发病率分别为４．８％和７．７％；种子进行青枯菌分离，带菌率４．９％；但风干２个月后播种，未见传病现象。另外，花生种子用病菌悬浮液浸泡２４小时后，经烘，晾，晒干燥处理３天，当含水量降到１０％左右时，分离不到青枯菌。     

玉米叶片总蛋白提取和双向电泳技术的改进

针对植物组织蛋白质含量较低,有些组分在两性电解质中的溶解性低以及绿色组织中的色素、酚类、醌类等次生代谢产物干扰蛋白质双向电泳分离效果的问题,以玉米苗期叶片为材料,对蛋白质裂解液、蛋白质浓度测定体系、等电聚集电泳电压和时间、聚丙烯酰胺凝胶浓度等技术参数做了改进。用改进的裂解液提取的蛋白质样品浓度达3.8μg/μL,比改进前提高90%。通过在浓度测定体系中加入HCl并用裂解液代替超纯水配制标准蛋白,可得到线性更好的蛋白浓度测定标准曲线。用改进后的等电点聚焦电泳的电压、时间和聚丙烯酰胺凝胶浓度,可从玉米叶片总蛋白质样品中分离出963个清晰的蛋白点,在其他条件相同的情况下,比改进前的技术体系多分离出429个蛋白点。     

基于已有序列信息快速获得花生目的序列的方法

提出了一套基于已有DNA序列信息快速获得花生目的序列的技术流程。运用花生籽仁未成熟叶片简单预处理PCR技术，根据一个种子中特异表达的基因cDNA序列设计特异性引物，用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增，4个花生基因型中有3个得到预期长度的产物。随后取其中育种品系02-B4籽仁未成熟叶片，简单预处理后采用Pyrobest DNA聚合酶作高保真扩增，得到产物后直接测序。结果表明，该基因片段与已报道的花生PSC33羽扇豆球蛋白cDNA序列表现出高度同源性。本研究为分离其编码区上下游序列奠定了基础。     

国内报刊花生文摘(四)

花生种子贮藏蛋白质与活力的关系及其在萌发时的降解模式/黄上志(中山大学生物系),傅家瑞∥植物学报。-1992,34(7). 543～550 花生种子的贮藏蛋白质与活力之间有很高的相关性。在种子萌发和幼苗生长过程中,子叶中的盐溶蛋白质全部被利用。花生球蛋白中分子量为23.5、38.5、41kD的亚基首先被分解,而18kD亚基最后被     

大豆主要贮藏蛋白组分遗传改良研究进展

大豆种子贮藏蛋白在种子形成过程中逐渐合成和积累,又在种子萌发过程中逐渐降解。不同的大豆贮藏蛋白通过影响蛋白的性质改变其营养和功能品质。包括脂氧酶在内的7S球蛋白与11S球蛋白是构成大豆贮藏蛋白的主要成分,是大豆品质改良的重要目标。本文主要从脂氧酶缺失改良育种、11S球蛋白缺失的高7S球蛋白含量改良、7S球蛋白亚基缺失的高11S球蛋白含量改良、7S球蛋白与脂氧酶双缺失改良等几个方面,介绍大豆主要蛋白组分改良育种的研究进展,以期为中国大豆品质改良育种提供借鉴。     

茶树蛋白质双向电泳样品制备技术研究

为探索一种适用于茶树蛋白质双向电泳的样品制备方法,研究比较了TCA/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl抽提法,以及酚-甲醇/醋酸铵沉淀法3种植物蛋白质样品制备方法。结果表明,改良的Tris-HCl抽提法较适合于茶树蛋白质双向电泳的样品制备。该改良方法制备的茶树蛋白质样品经双向电泳分离,可获得1117±9.89个蛋白质点,其中大部分蛋白质的等电点集中在pI5~7之间,相对分子质量集中在15.00~95.00kD之间,背景清晰且蛋白质得率较高,能满足茶树蛋白质组学研究的需要。     

花生分离蛋白超声波辅助提取工艺的优化

在碱提酸沉的基础上采用超声波辅助的方法从低变性花生蛋白粉中提取花生分离蛋白.在单因素实验的基础上,以花生分离蛋白的提取率为指标,固定超声波频率为28kHz,pH值为9,应用响应面法优化超声波辅助提取花生分离蛋白的提取工艺.得到花生分离蛋白的最佳提取工艺为:超声功率为210W,超声时间为30min,超声温度为40℃,料液...     

花生蛋白碱性蛋白酶水解物对血管紧张素转化酶抑制作用的初步研究

分别以碱性蛋白酶Alcalase和中性蛋白酶Neutrase对花生分离蛋白进行水解．制备花生分离蛋白水解物．并测定不同水解时间所得产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性。未水解的花生分离蛋白没有ACE抑制活性．用中性蛋白酶Neutrase水解所得的水解物显示弱ACE抑制活性。然而，碱性蛋白酶Alcalasc水解物具有很强的ACE抑制活性．水解0．5h时水解物活性最高，其半抑制浓度为(IC50)0．56mg／mL。本研究表明，当用碱性蛋白酶Alcalase水解时，花生分离蛋白是生产ACE抑制肽的良好蛋白质来源，花生分离蛋白碱性蛋白酶Alcalase水解物可作为具有降压功能的功能食品添料。