甲基睾酮对雌斑马鱼内分泌干扰效应的研究

甲基睾酮(MT)广泛存在于造纸废水中,为了研究其对水生动物内分泌的干扰效应,选用斑马鱼为模式生物,开展甲基睾酮对斑马鱼的慢性毒性暴露实验。将雌性斑马鱼分别暴露在含10、50、100和150μg/L的甲基睾酮水环境中48 d,另设空白对照和0.01%甲醇对照,观察斑马鱼的个体生长指标及组织结构的变化。结果表明:当MT浓度为150μg/L时,斑马鱼全部死亡;而在0~100μg/L的MT暴露处理中,随着MT浓度的增加,斑马鱼的体重逐渐减轻,体长逐渐缩短,臀鳍逐渐变大,体色转向偏黄,出现了雄性化的特征;而且肝脏和性腺重量均明显减轻,卵巢出现明显的退化特征,肝细胞逐渐肿大,细胞核偏移中央,且伴随细胞中空等现象;其中,50和100μg/L MT处理的斑马鱼鳃丝变得高低不一,有的开始断裂甚至结构无法辨认。     

双酚A对鲫雌激素受体表达和雌二醇水平的影响

运用定量PCR技术和免疫荧光法研究了内分泌干扰物双酚A（BPA）对雌鲫的雌激素效应。以不同浓度的BPA[质量分数分别为1mg／kg,50mg／kg,100mg／kg（注射剂量／鱼体重）]对雌鲫进行腹腔注射,然后分别于24h和48h检测肝脏中的仅型雌激素受体（ERct）mRNA表达以及血清雌二醇（E2）水平。结果表明1mg／kg和50mg／kgBPA处理组ERamRNA水平与对照组相比在48h内均没有明显变化;100mg／kgBPA处理组ERamRNA水平在注射后24h显著上调（P〈0．05）,48h时仍维持较高水平。1mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著下降（P〈0．05）,48h回升至正常水平;50mg／kg和100mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著增加（P〈0．01）,48h时仍维持较高水平。结果表明,BPA具有雌激素样效应,高浓度的BPA能够诱导雌鲫肝脏ERαmRNA表达和血清E2水平的上升。     

双酚A对鲫雌激素受体表达和雌二醇水平的影响

运用定量PCR技术和免疫荧光法研究了内分泌干扰物双酚A（BPA）对雌鲫的雌激素效应。以不同浓度的BPA[质量分数分别为1mg／kg,50mg／kg,100mg／kg（注射剂量／鱼体重）]对雌鲫进行腹腔注射,然后分别于24h和48h检测肝脏中的仅型雌激素受体（ERct）mRNA表达以及血清雌二醇（E2）水平。结果表明1mg／kg和50mg／kgBPA处理组ERamRNA水平与对照组相比在48h内均没有明显变化;100mg／kgBPA处理组ERamRNA水平在注射后24h显著上调（P〈0．05）,48h时仍维持较高水平。1mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著下降（P〈0．05）,48h回升至正常水平;50mg／kg和100mg／kgBPA处理组E2水平在24h显著增加（P〈0．01）,48h时仍维持较高水平。结果表明,BPA具有雌激素样效应,高浓度的BPA能够诱导雌鲫肝脏ERαmRNA表达和血清E2水平的上升。     

土壤对双酚A的吸附性能研究

采用平衡吸附法研究了内分泌干扰物双酚A(BPA)在3种土壤表面的吸附动力学和等温吸附特性,同时考察了土水比对BPA吸附的影响,结合傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)初步探讨了BPA在土壤表面的结合机制。结果表明,土壤对BPA的吸附率随着土壤用量的增加而逐渐增加,当土水比为1∶10时达到平衡。土壤对BPA的吸附分为快吸附和慢吸附2个过程,二级动力学方程能较好地描述吸附过程。土壤对BPA的吸附符合Langmuir方程。FTIR图谱显示,氢键作用参与了土壤对BPA的吸附。     

双酚A对土壤微生物的影响

利用不同浓度的双酚A处理土壤,探讨在不同浓度双酚A的影响下对土壤中的放线菌,细菌,真菌三大类微生物种群的数量的影响,总结双酚A的胁迫对土壤中微生物影响的变化规律,为土壤环境的保护,土壤肥力的提高提供理论依据。试验结果表明:经过不同浓度双酚A处理过的土壤中所含的细菌、真菌、放线菌三大类微生物数量都呈减少趋势,并且随着双酚A浓度的增加,微生物数量减少趋势愈明显。     

双酚A测定方法的研究进展

双酚A是合成塑料包装制品的一种添加剂,可通过食品包装和塑料薄膜迁移到食品中,被人体吸收后会严重危害人体健康。通过近年的文献及相关资料,综述了食品及塑料包装材料、生物样品及自然界水中双酚A的含量测定方法,分析比较不同检测方法的优缺点,为双酚A的检测提供指导。     

双酚A与对硝基酚对泥鳅的联合毒性效应

【目的】探讨双酚A(bisphenol A,BPA)与对硝基酚(p-Nitrophenol,p-NP)对泥鳅(Misgurnus anguillicadatus)的联合毒性效应,为评价酚类化合物对水生生物的毒害作用提供理论依据。【方法】根据预试验确定的BPA、p-NP对泥鳅的最大耐受质量浓度和最小全致死质量浓度,按等对数（常用对数）间距将BPA与pNP分别设置5个质量浓度（BPA：4.8,5.8,6.9,8.3,10.0 mg/L;p-NP：11.6,13.6,15.8,18.4,21.5 mg/L）处理泥鳅,同时设空白对照（加蒸馏水）,每处理3个重复,每个重复放置10条泥鳅,试验开始后,连续8 h观察泥鳅的活动、中毒情况及体色变化,每24 h统计1次泥鳅的死亡率,计算 24,48,72 和 96 h 泥鳅的半数致死浓度（LC₅₀）。按 BPA与 p-NP 单一毒性 96 h LC₅₀值进行毒性1∶1的联合毒性试验,并采用 Marking 水生毒理联合毒性相加指数（AI）法评价 2 种化合物对泥鳅的联合毒性效应。【结果】24,48,72 和 96 h 时,BPA对泥鳅的LC₅₀分别为 8.31,8.02,6.95 和 6.43 mg/L,p-NP对泥鳅的LC₅₀分别为19.25,17.58,17.04和14.70 mg/L。不同染毒时间下,BPA与p-NP对泥鳅的联合毒性作用AI均小于0,且随着时间的延长,AI的绝对值逐渐变小。【结论】BPA与p-NP均为高毒性污染物,且前者比后者的毒性更大;二者的联合作用表现为拮抗作用,并且随着作用时间的延长拮抗作用逐渐减弱。     

环境雌激素双酚A对小鼠睾丸功能的影响

为探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对雄性小鼠睾丸功能的影响及可能机制,用低剂量(50μmol/kg)、中剂量(250μmol/kg)、高剂量(500μmol/kg)的BPA连续5 d对雄性小鼠腹腔注射给药0.1 ml,以注射E2为阳性对照,阴性对照组腹腔注射等体积大豆油溶剂,首次给药15 d后对小鼠睾丸及附睾的脏器系数、精子数、活动精子百分率、精子畸形率进行统计分析,并对睾丸进行组织病理学研究。结果表明:BPA处理后,小鼠睾丸重量、附睾重量变化不显著;睾丸和附睾脏器系数变化不显著;精子数下降,其中BPA中剂量组下降显著(P<0.05),BPA高剂量组下降极显著(P<0.01);活动精子率下降,其中BPA高剂量组显著下降(P<0.05);精子畸形率BPA各剂量组均升高非常明显(P<0.05);BPA各处理组睾丸精细小管排列出现了松散现象,睾丸间质出现不同程度的水肿,睾丸间质细胞分布稀疏,精细小管管腔内生殖细胞排列层次发生不同程度的紊乱,生殖细胞周围的Sertoli细胞数目稀少,Sertoli细胞脱落到管腔,管腔内的精子细胞数目稀少,损伤程度随BPA浓度增加而愈加严重。认为BPA对雄性小鼠的睾丸功能有损伤作用,并可能对子一代的发育有不良影响。     

青春期双酚A暴露对老年CD-1小鼠海马 齿状回Synaptotagmin 1含量的影响

探讨青春期双酚A暴露对老年期齿状回Synaptotagmin 1（Syt 1）含量的影响。结果显示,18月龄CD-1小鼠齿状回Syt 1相对含量显著高于6月龄小鼠（Ps<0.05）;青春期双酚A暴露高剂量小鼠齿状回Syt 1表达量显著高于同年龄对照小鼠（Ps<0.05）,雌鼠更明显。这些结果进一步支持小鼠海马Syt 1呈年龄相关性增加的结论,青春期双酚A暴露可加剧这种增加。     

双酚A对大豆幼苗叶绿素荧光参数的影响

双酚A(Bisphenol A,BPA)是酚类化合物中具有代表性的环境污染物之一,具有广泛存在性与潜在致癌及生殖毒性。迄今为止,BPA对植物生育及生理影响报道较少。叶绿素荧光参数可表征植物光合作用光反应对光能吸收、传递、耗散、分配等特征。本文以大豆(Glycinemax)幼苗为试材,选择BPA饮用水安全值(1.5mg·L-1)、垃圾渗滤液最大浓度(17.2mg·L-1)等2个剂量胁迫大豆幼苗7d,对照与各处理组均3盆,每盆3株,3次重复。处理第7d与14d时取样,采用叶绿素荧光测定仪(PM2000,Germany)测定植株叶绿素荧光参数Fm(最大荧光产     

暗适应条件下斑马鱼的光谱敏感性

为研究暗适应条件下斑马鱼Danio rerio视网膜电图(ERG)试验中的最佳试验参数和光谱敏感性,选取体长为3.5～4.0 cm的6月龄斑马鱼,探究了斑马鱼视网膜电图试验中的最低暗适应时间和闪光刺激时间间隔,以ERG的b波振幅分量作为对光刺激的响应分析了斑马鱼的暗视光谱敏感性。结果表明：斑马鱼的ERG试验中暗适应时间至少为90 min(t检验,P>0.05),闪光刺激时间间隔至少为50 s(配对t检验,P>0.05);暗适应条件下,斑马鱼的光谱敏感性函数在可见光波段和紫外光波段均出现了敏感峰值,敏感峰值分别出现在500 nm和365 nm波长处,且紫外敏感峰值相较于可见光敏感峰值降低约0.28个lg单位。研究表明,暗适应的斑马鱼对可见光和紫外光均表现出敏感性,其视网膜中的U-视锥细胞和视杆细胞共同参与了暗视视觉,增加了暗视光谱敏感范围,从而提高了暗视视觉的灵敏度。     

3种三唑类杀菌剂对斑马鱼的毒性研究

探究戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑3种三唑类杀菌剂对斑马鱼的急性毒性、两两等毒性和等浓度配比时对斑马鱼的联合毒性。同时,通过6 d胚胎发育试验,研究3种三唑类杀菌剂对斑马鱼胚胎的发育毒性。研究显示,戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑3种三唑类杀菌剂对斑马鱼胚胎、仔鱼和成鱼的急性毒性为中毒,苯醚甲环唑和丙环唑在等毒性和等浓度配比下对斑马鱼胚胎和仔鱼阶段为协同作用,其余组合对斑马鱼胚胎和仔鱼阶段为拮抗作用。发育毒性试验结果表示,3种三唑类杀菌剂对早期生命阶段毒性更强,可诱导斑马鱼胚胎、仔鱼出现一系列不良症状,包括孵化率下降、心率异常、生长抑制等。     

斑马鱼Tph1a蛋白表达、纯化及对脂代谢基因的影响

对斑马鱼色氨酸羟化酶1a(Tph1a)进行原核表达、纯化,探究其在斑马鱼脂代谢中的作用.根据大肠埃希菌的偏爱密码序列,优化斑马鱼tph1a编码区,插入原核表达载体pET-28a,构建融合蛋白表达质粒,并诱导表达、纯化和复性后,腹腔注射斑马鱼,检测其对脂代谢基因表达的影响.结果表明:重组蛋白Tph1a表达形式为包涵体;纯...     

色温对斑马鱼趋光行为影响的研究

为研究斑马鱼Danio rerio对不同色温光源的选择及趋光反应,采用了暖白光(3122 K)、中性光(4021 K)和冷白光(6567 K)3种不同色温的光源,采用水平光梯度法,在实验室环境下研究了白色光源光照环境对体长2.5～3.5 cm斑马鱼趋光行为的影响。结果表明:斑马鱼对3种色温的瞬时反应强度为暖白光组(5 s)>冷白光组(15 s)>中性光组(25 s);斑马鱼区域分布数量的变化规律表现为近光区较高、过渡区较低、弱光区较低、远光区较高的U形分布,3种色温情况下出现U形分布的时间分别为3、2、4 min;短时间曝光(1 min)内斑马鱼对3种色温光照环境的敏感程度为中性光组>冷白光组>暖白光组;长时间曝光(30 min)内斑马鱼正趋光性最强,其中,暖白光组第30 min时趋光指数为+0.127,中性光组第30 min时为+0.04,冷白光组第25 min时为+0.113,即暖白光组>冷白光组>中性光组。研究表明,斑马鱼对暖白光光照环境更为敏感,但相较于中性光和冷白光快速反应式的趋向性,暖白光的适应过程表现为缓慢的趋向性,且为稳定的正趋光性。     

斑马鱼Hoxa-11a基因克隆及序列分析

用PCR法从斑马鱼基因组DNA中扩增了Hoxa-11a基因的完整编码序列,并将其克隆到PCR-TOPO载体.该基因包括两个外显子,长度分别为622 bp和233 bp,其间的内含子为726 bp,共编码284个氨基酸.它与人、鼠、鸡、爪蟾和矛尾鱼Hoxa-11基因氨基酸序列的同源性分别为50.0%、51.3%、53.3%、56.7%和59.7%.除同源异型盒外,外显子Ⅰ区和内含子中也存在保守序列.外显子Ⅰ中丙氨酸同聚物与其两侧富含甘氨酸和丝氨酸亚区的积累是不同动物Hoxa-11基因长度变化的主要因素.     

斑马鱼实验室繁育方法研究进展

近年来,斑马鱼因其独特的生物学特性及优势已成为一种新型的脊椎动物模式生物,并渐渐引起世界各国科研人员的重视。但目前在我国斑马鱼实验室养殖及繁育等方面的文献、资料并不多见。笔者对斑马鱼实验室人工饲养及繁育等方面做了较为详细的介绍,旨在为斑马鱼这种重要模式生物的研究提供基础的参考资料。     

甲基睾酮对雌性斑马鱼性腺发育的抑制作用

用含雄性激素甲基睾酮(MT)的饲料饲喂经产雌性斑马鱼(Danio rerio)来探讨外源激素对其性腺发育的影响。通过投饲含0、30、60、120、240和400 mg.kg-1 MT的饲料30 d后,石蜡切片观察斑马鱼卵巢的发育情况。结果表明,随着MT剂量的增加,斑马鱼性腺的发育受到抑制,卵巢结构变化明显。30 mg.kg-1剂量组的成熟系数有明显的降低,至400 mg.kg-1剂量组,成熟系数仅为对照组的1/6;同时外源雄性激素严重影响或抑制了卵巢的进一步发育,较低剂量组性腺发育停滞在Ⅲ时相左右,较高剂量组的性腺明显的退化,至400 mg.kg-1剂量组,卵巢已呈明显的萎缩状态,卵母细胞几乎不可见;卵母细胞在甲基睾酮作用下的退化过程为:抑制卵母细胞发育—细胞核结构变化—累及细胞器—形成凋亡小体、破坏细胞膜结构—凋亡小体逸散、细胞固缩—崩解。结果显示外源雄性激素对雌性斑马鱼的性腺发育影响明显,较高剂量时可导致外源激素的阉割作用。     

斑马鱼性腺的荧光组织学观察

【目的】探索斑马鱼性腺经不同染色剂染色后在不同激发光激发下的荧光特性。【方法】以斑马鱼性腺为材料,用Bouin＇s液固定,石蜡切片未经染色或单染伊红、单染苏木精、HE染色后,分别在白光（明场）、绿色激发光、蓝色激发光和紫外激发光下观察斑马鱼性腺的荧光特性。【结果】未染色的斑马鱼性腺组织切片,经不同激发光激发后,可观察到自发产生较弱的荧光;而以单染伊红、单染苏木精或HE染色后,经不同激发光激发,斑马鱼性腺中的生殖细胞和体细胞分别呈现不同的荧光特性,且不同染色切片经相应的激发光激发后所发出的荧光及细胞结构的清晰度均存在明显差异。【结论】将组织学技术中最常用的苏木精和伊红染色方法与荧光技术、荧光观察结合起来,可更简易而快速区分不同细胞类型、不同细胞周期等。     

克螨特农药对斑马鱼急性毒性的研究

[目的]寻找克螨特用于水生动物斑马鱼病虫害防控的安全浓度.[方法]通过室内急性毒性测定试验,设置7个克螨特浓度梯度来检测其对斑马鱼的致死情况,从而计算其半致死浓度(LC50)与安全浓度(SC).[结果]克螨特对斑马鱼在用药96h后的LC50为0.909 mg/L,置信区间分别为0.876～0.943 mg/L.克螨特对斑马鱼的SC为0.091 mg/L.[结论]该研究为克螨特杀灭斑马鱼寄生虫的用药量提供了重要的数据支持.