鲤鱼脑垂体中促性腺激素含量的周年变化

经丙酮干制的垂体粉用40％乙醇抽提，冷冻干燥，用放射免疫测定法测定鲤鱼垂体中促性腺激素含量的周年变化。年平均含量为56．1微克／毫克。2月份临近产卵期时，雌、雄鲤鱼垂体中的促性腺激素含量都达到最大值(雌鱼为154．0微克／毫克，雄鱼为160．0微克／毫克)。雄鱼9月份含量最低(8．3微克／毫克)，雌鱼10月份含量最低(3．8微克／毫克)，并分别在10月份和11月份后开始逐渐上升。其周年变化并与其性腺的发育成正相关关系。     

鲤鱼血清中促性腺激素、17β雌二醇含量的周年变化

应用放射免疫测定法,对雌、雄鲤血清中促性腺激素(GTH)和17β-雌二醇(17β-E_2)的含量进行周年测定。GTH的常年分泌量,雌鲤平均为8.94±5.94ng/ml(12月份含量最低,峰值在1月份);雄鲤常年平均为8.72±5.20ng/ml(10月份含量最低,峰值在11月份)。17β-E_2的含量,雌鲤1-4月份较高,平均为2019.48±754.49pg/ml(全年峰值在2月份)。产卵季节后,卵巢开始退化,17β-E_2含量下降。5—8月平均为454.58pg/ml,产卵前后差异性显著。这表明性腺的发育和成熟与血清中17β-E_2含量变化的密切相关性以及雌二醇对GTH分泌的反馈抑制作用。     

怎样采集鲤鱼脑垂体

鱼类脑垂体促性腺激素是促使鱼类性腺成熟和排卵的重要激素．鲤鱼脑垂体是我国鱼类人工繁殖中常用的鱼类催情物。鲤鱼脑垂体的采集技术要点是：     

镉对鲤血清促性腺激素和生长激素的影响

采用ＣｄＣｌ２浸没法处理鲤，研究镉对鲤血清促性腺激素（ＧｔＨ）和生长激素（ＧＨ）水平的影响，结果表明，较镐浓度镉（ＣｄＣｌ２９ｍｇ／Ｌ）处理引起血清ＧｔＨ水平降低，ＧＨ水平升高，提高水中钙浓度，能使由镉引起的ＧｔＨ水平的降低恢得取正常水平，并对镉引起的ＧＨ水平升高起延迟作用，镉处理使鲤对ＬＨＲＨ－Ａ刺激ＧｔＨ分泌的反应性下降，提高水中钙浓度也不能恢复正常，实验结果提示，镉引起的ＧｔＨ和ＧＨ的变化可     

草鱼、鲢鱼催产前后血液中促性腺激素含量的变动

应用放射免疫测定法,研究了草鱼、鲢鱼催产前后血液中GTH含量的变化。催产后草鱼、鲢鱼血液中GTH的含量增加到“排卵阈值”水平,也就是比产卵前增加30-40倍,产卵活动才能实现。由此阐述了鱼类也象其他脊椎动物一样,存在着丘脑下部——垂体——性腺系统的调节机制。     

低剂量鲤鱼垂体激素和固醇激素对鲤鱼卵母细胞成熟的影响

为了保证充足的鲤鱼茁种，采用了鲤鱼人工催产的方法。虽然可以采用注射鲤鱼垂体激素诱使鲤鱼排卵，但鲤鱼垂体很难采集，成本也很高，因此企图寻找一种替代物或一种可以诱使鲤鱼排卵的有效药物。Jalabert（1976）证实雌激素（雌酮、雌二醇）稍微提高了群鱼垂体促性腺激素的有效剂量，睾九激素提高促性腺激素的有效剂量的2倍，低剂量固醇激素在卵母细胞水平上加强了群鱼垂体促性腺激素的效果。Epler发现1μg／ml剂量的固醇激素和100μg／ml剂量的垂体激素对鲤鱼的诱熟效应。按此剂量固醇激素和垂体激素一起使用比固醇激素或垂体激素分别单…     

牙鲆脑中促性腺激素释放激素受体的克隆和鉴定

GnRH（gonadotropin-releasing hormone）是下丘脑-垂体-性腺轴中重要的十肽信息分子，在所有的脊椎动物的生殖神经内分泌调控中具有重要的作用。GnRH成熟的十肽沿着轴突被运送到下丘脑正中隆起（median eminence）末端，然后进入下丘脑垂体门脉循环（hypothalamo hypophyseal portal circulation）（四足动物）或直接通过轴突末梢（大多数硬骨鱼）把信号传递给刺激性腺的细胞，与特异性受体结合，刺激促性腺激素（GtHs，gonadotropins）的合成与释放，参与脊椎动物繁殖的起始和维持正常生殖功能。伴随着GnRH的研究，研究者对鱼类GnRH受体的研究也越来越感兴趣，牙鲆（Paralichthys olivaceus）是中国重要的海水养殖鱼类，本研究从牙鲆脑组织中克隆得到全长的Type Ⅰ GnRH受体，并对其组织特异性表达作了分析，为牙鲆的神经生殖内分泌研究奠定了一定的基础。 在本研究中，以海水养殖牙鲆为材料，从牙鲆脑组织中采用巢式PCR、5′-和3′-RACE技术克隆得到了1671bp牙鲆促性腺激素释放激素受体（GnRH-R）全长cDNA序列，包括147bp的5′-UTR、1248bp的开放阅读框和276bp的3′-UTR，GenBank登录号是DQ011872。牙鲆GnRH-R和其他物种GnRH-R的氨基酸序列的多序列比对结果显示，其存在许多保守的特征，牙鲆GnRH-R显示有3个主要的功能区域：1个N端胞外结构域（1～44个氨基酸残基）、1个大的跨膜结构域（45～324个氨基酸残基）和1个C端细胞质区域（325～415个氨基酸残基）。空间结构预测显示牙鲆GnRH-R跨膜区域包含7个高度保守的跨膜α螺旋（45—64、76—95、114—135、156—176、207—224、267—286、305—324），这些α螺旋是受体锚定到细胞膜上必需的。 氨基酸序列系统进化分析表明，牙鲆GnRH-R与琥珀鱼GnRH-R1具有高度同源性（85％同源性）。已知的硬骨鱼GnRH—R基因的系统进化分析表明，存在两种类型的GnRH-R基因：Type Ⅰ GnRH—R和Tpye Ⅱ GnRH-R基因。在牙鲆GnRH—R的氨基酸序列中，具有Type Ⅰ GnRH—R共有的典型基序：CAFVT（TMⅢ）和DlLEGKVSHSLTH（TMⅦ开始的序列处），表明克隆得到的牙鲆GnRH-R属于Type Ⅰ GnRH—R。 GnRH-R跨膜α螺旋之间的区域形成了胞内或胞外loops，这些区域参与受体信号转导和肽选择性功能上。牙鲆GnRH-R在TMⅢ的细胞质边界处具有一个保守的DRQSA／（DRXXXI／V）基序，这个基序被认为参与G蛋白偶联信号转导和GnRH肽诱导受体的激活；另一个保守的区域是位于TMⅦ内的NPXXY或DPXXY基序同样存在于牙鲆中（DPVIY），这个基序参与到一些GPCRs（包括GnRH-R）的内在化（internalization），同时这个基序特别是基序中的Tyr残基对于受体激活和信号转导起到关键作用。在第三个胞内loop中，鱼类GnRH—R有个保守的Ala残基（在牙鲆中为Ala^250），其也在G蛋白偶联和受体内在化方面具有重要作用。 在哺乳动物或非哺乳动物GnRH-R中，在第一个和第二个胞外loop之间由2个Cys形成1个保守二硫桥，是受体的正确折叠必需的。和其他的GnRH-R一样，牙鲆GnRH-R在第一个和第二个胞外loop之间存在由2个Cys（Cys^112和Cys^190）可以形成的潜在的二硫桥。这个二硫桥的完全缺失将会影响受体的结构完整性和降低鱼类GnRH—R对GnRH肽的选择性。 GnRH-Rs的NH2-末端区域不是很保守，但含有糖基化位点，是GnRH—Rs表达、GnRH—Rs穿梭到细胞胞表面或受体稳定必需的。将mouse的GnRH—R糖基化位点引进到人GnRH-R中，可以增加受体的数量，但不影响受体结合力或肽选择性。牙鲆Type Ⅰ GnRH—R中在NH2-末端含有3个潜在的糖基化位点（N^11SSW、N^15GSS和N^22WTA），此外，在第一个胞外loop和第二个胞外loop中分别存在1个糖基化位点（N^100ITV和N^178VTI），牙鲆Type Ⅰ GnRH—R含有的糖基化位点比哺乳动物要多，牙鲆糖基化位点的数目是否／怎样影响牙鲆GnRH-R的表达、降解率或亲和力，应该进一步研究。 在牙鲆GnRH-R的第一个胞内Ioop中，存在1个和tGnRH-R Ⅲ基序（^80KRKSH^84）一致的基序（^69KRKSH^74），这个基序是Gs识别基序（BBXXB，B代表碱性氨基酸，X代表任何一种氨基酸）。已经证明这个基序和cAMP产生相关，cGnRH-Ⅱ能通过cAMP-PKA途径提高stbGnRH-R在COS7细胞中的活性。 和其他非哺乳动物GnRH-Rs相似，牙鲆GnRH-R含有1个C-末端细胞内尾巴。这种胞内尾巴是鱼类GnRH-Rs功能必需的，在第三个胞内loop中，牙鲆GnRH-R含有2个PKC磷酸化位点（^233SKR^235和^262TLK^264）；在C端尾巴中，存在1个PKC磷酸化位点（^402TAR^404）。牙鲆GnRH-RC-末端尾巴中含有鱼类GnRH-R具有的Src同源区3（SH3）结合区域（PxxP序列）（^340PPAP），能够潜在地传送偶联的能力到丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs），GnRH通过PKC和PKA调控GtHα和LHβ转录，二者都集中于MAPK水平。 RT—PCR分析表明，GnRH-R在牙鲆脑和垂体有表达，暗示牙鲆GnRH-R参与到生殖行为如产卵行为；RT-PCR也检测到牙鲆GnRH-R在卵巢和睾丸中有表达，其能与牙鲆cGnRH-Ⅱ和sbGnRH在卵巢中共表达，GnRH肽在卵巢中具有自分泌／旁分泌功能，对牙鲆卵巢中的GnRH受体可能起到调控作用。[中国水产科学，2006，13（4）：536—546]     

Pimozide和LRH——A对鲢鱼的排卵作用

<正> 近年来Chang等(1982,1983)在金鱼上的研究证明,多巴胺对于调节促性腺激素(GTH)本身的释放具有抑制作用。Chang和Peter(1983)发现Pimozide(一种多巴胺拮抗物)在金鱼中,能极大地加强促黄体生成素释放激素类似物(LRH—A)     

促黄体素释放激素和多巴胺拮抗物对鲇促性腺激素释放的作用

以珠江流域鲇为研究对象，分别在性腺发育早期、性腺发育晚期、性腺发育成熟与产卵前期、性腺退化期注射促黄体素释放激素类似物和多巴胺D2受体拮抗物，处理后6h、12h、24h测定血液中的促性腺激素水平变化。结果表明，在性腺发育的各个时期，促黄体素释放激素类似物和多巴胺D2受体拮抗物联合注射能显著剂激鲇促性腺激素分泌；鲇脑垂体促性腺激素的分泌受下丘脑释放的促性腺素释放激素和多巴胺的双重调节，多巴胺只能抑制促性腺素释放激素诱导的促性腺激素分泌。在建立鲇人工繁殖技术时，可采用促黄体素释放激素类似物和多巴胺D2受体拮抗物联合注射方法。     

血浆促性腺激素和性类固醇的年、日变化与真骨鱼类性腺周期的关系

刺激鱼类的各种外界因子综合作用于中枢神经系统。它们与下丘脑——垂体——性腺系统相互作用，因此在一定程度上，随着激素分泌的变化，促进配子形成和产卵。     

促黄体生成素释放激素类似物对团头鲂血清中促性腺激素和17β-雌二醇含量变动的研究

本文报道了团头鲂(Megalobrama amblycephala)血清中17β-雌二醇放射免疫的测定方法,将所建立的测定方法用于鱼类血清测定,并对方法的准确性(回收率92.8±8.16％)、特异性(抗血清与雌酮、雌三醇的交叉反应分别为<3.20％、<2.99％)和灵敏度(2.36—2.50pg)作了检验。标准曲线的r=-0.998,s=0.023-0.051,检测范围为10—400pg/管。 团头鲂催产后血清中促性腺激素(GTH)含量增高,为产卵前的17倍左右,而未产卵个体的GTH含量则为产卵个体产卵前的3—5倍。与草鱼和鲢鱼一样,当血清中GTH达到一定浓度时,才能实现产卵。 随着团头鲂卵巢的发育,血清中17β-雌二醇(17β-E_2)含量和成熟系数同步逐渐上升,至第Ⅳ期卵巢发育成熟阶段,血清中17β-E_2含量形成一个高峰,达到2004.11±1136.31pg/ml,可作为卵母细胞卵黄迅速积累的指标。过后,血清中的17β-E_2含量略有下降,催产前为1392.71±399.09和1219.29±420.51pg/ml,产卵后,血清中17β-E_2含量在短时间内迅速下降到346.71±129.51和324.28±228.00pg/ml。 雄鱼则与雌鱼相反,17β-E_2含量随精巢发育而逐渐下降,并一直维持在一个低水平。     

卵巢不同成熟期的白鲢雌鱼脑垂体中促性腺激素含量的动态

当前，激素刺激鱼类性腺机能的方法已广泛用于养鱼实践中。可是，在激素调节鱼类性周期这一方面，虽然有大量新资料，但是性腺激素对各不同发育和成熟时期性细胞的作用机制问题，仍有很多争论。众所周知，鱼类脑垂体的促性腺激素活性与卵巢中发生的性周期过程密切相关。脑垂体激素的积累、     

人工诱导花鳗鲡卵巢发育成熟及相关激素和组织的作用

采用多次肌肉注射黄体生成素释放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH-A2)和鲤脑垂体匀浆(carp pituitary extract,CPE)的方法诱导花鳗鲡卵巢发育成熟。在任意挑选的15尾实验组鱼中,5尾卵巢发育完全成熟,平均性腺系数(gonadosomatic index,GSI)为(20.9±5.04)%(最大达到27.3%);5尾卵巢发育至成熟期,平均GSI为(7.2±2.86)%;5尾卵巢发育至卵黄生成期,平均GSI为(2.32±1.5)%;而对照组的性腺停留在未发育的Ⅱ期[GSI为(1.18±0.39)%],这表明注射的激素能诱导雌性花鳗鲡性腺发育直到完全成熟。检测卵巢发育过程中脑垂体GtH的mRNA水平,血清中类固醇激素水平以及肝脏和消化道组织学变化。结果表明,脑垂体中GtHα、LHβ和FSHβ的mRNA水平随着卵巢的发育而逐渐增加,在卵巢发育成熟后下降,其中GtHα和LHβ的含量在卵巢发育成熟时虽比发育时期略有下降,但仍然呈现高表达量,而FSHβ在卵巢发育成熟时的表达量极低,几乎检测不到。血清雌二醇的含量在卵巢开始发育和卵黄生成期时的含量...     

鲤、鲢、草鱼促性腺激素垂体含量及血清浓度日周期变化的关系

淡水鱼类有的在池塘中能自然产卵,如鲤(Gyprinus carpio)、鳊(Megalobrama amblyocephala)等,有的鱼必须给予外源激素才能产卵,如青鱼(Mylopharyngodon piceus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobilis)。为探索产生这种差别的原因,本文用放射免疫方法测定了鲤、鲢、草鱼产卵季节促性腺激素(GTH)在垂体中的含量和血清中浓度的日周期变化。鲤、草、鲢24小时血清GTH浓度呈脉冲式波动,白天出现3-4次高峰,夜间雌的有时还有一次高峰。鲤高峰值多在20-40毫微克／毫升血清,峰谷在5—15毫微克／毫升血清,GTH浓度始终保持高水平,而草、鲢高峰值仅2—8毫微克／毫升血清,峰谷0．1—1毫微克／毫升血清。草、鲢每只垂体GTH含量较高,约为鲤的2．5倍。以上数据说明草、鲢垂体释放GTH比鲤少。这种差别可能反映了在池塘中鲤能自产,而草、鲢不能自产的原因。草鱼垂体离体培养,白天和黑夜取材,对LRH-A的反应性不同,白天的反应较弱,对此进行了讨论。     

鲟鱼GtH放射免疫测定方法的建立及催产前后史氏鲟血清GtH含量的变化

用蛋白质快速液相层析(FPLC)分离俄罗斯鲟鱼脑垂体促性腺激素（GtH）,共获得GtH纯化蛋白4.6mg。用SDS-PAGE变性胶电泳图谱初步分析纯化蛋白,用反相高效液相色谱（rpHPLC）分离出两个亚基,质谱测定α亚基分子量：15603KD,两个β亚基分子量分别为14338KD和14694KD。制备了鲟鱼GtH的兔抗血清多克隆抗体,采用氯胺T法用125I标记抗原,用羊抗兔γ球蛋白做二抗,建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。测定了催产前后不同时间史氏鲟血清中GtH含量的变化,统计分析表明成功排卵的雌鱼比未排卵和阴性对照组在催产后12小时和16小时GTH分泌量升高显著,最高达到234ng/ml;催产效应时间与催产后血清中GtH的含量紧密相关。     

多巴胺拮抗物 pimozide(PIM)或排除剂 reserpine(RES)和促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)诱导养殖鱼类促性腺激素分泌和排卵的研究

由多巴胺拮抗物PIM或排除剂RES组成的高效新型鱼类催产合剂能有效的诱导主要的淡水养殖鱼类促性腺激素分泌和产卵，其中青鱼催产率为80％，鲢鱼为84％，鳙鱼和草鱼为88％，长春鳊为94％，鲮鱼为96％。试验表明这种催产剂的主要优点是：催产效果高而稳定，可以完全取代鱼脑垂体；对当年第二次成熟和产卵的亲鱼同样有效；有利于保护亲鱼；节省劳力和成本。     

外源性促性腺激素诱导日本鳗鲡精子发生和成熟的作用机制

用兔抗血清对抗促黄体素生成素受体（LHR）或称绒毛膜促性腺激素受体（CGR）和雄激素受体（AR）进行LHR和AR免疫组织化学定位,以揭示外源性促性腺激素（鲤脑垂体激素和hCG）诱发日本鳗鲡精子发生及其内分泌机制。结果表明,经过注射激素处理后的实验组与注射前的对照组相比较,其精巢发育和精子发生出现十分显著的变化。组织学切片观察显示,激素处理前鳗鲡精巢处于精原细胞增殖期,而两种激素混合注射后第10天,实验组可见精小叶中精原细胞的有丝分裂和初级与次级精母细胞的数量显著的增加。注射后第35天,靠近生殖上皮除有少量精原细胞外,精小叶中有大量初级精母细胞和次级精母细胞和少数精子细胞以及管腔中存在少量精子。在注射后第83天,日本鳗鲡完成了精子发生和精巢发育成熟以及释精。免疫组织化学染色结果进一步揭示,激素处理前,LH受体免疫活性分布在生殖上皮,显示强的免疫阳性反应;激素处理后,LH受体定位在Sertoli细胞和间质细胞以及精原细胞和初级与次级精母细胞的胞膜上,均显示强的免疫阳性反应。激素处理前,雄激素受体定位在生殖上皮和早期生精细胞的胞膜上;激素处理后,AR则定位在这些生精细胞的核或胞质,而精子细胞和精子显示免疫阴性反应。这些结果首次证明了这两种激素诱导鳗鲡精子发生和成熟的作用机制是通过LH受体和雄激素受体的介导。     

长吻鮠人工催产及脑垂体促性腺激素细胞的超微结构的变化

通过对催产和未催产的长吻鮠脑垂体中腺垂体促性腺激素分泌细胞（ＧＴＨ 细胞） 的分泌活动分析,证实了用促黄体素释放激素类似物（ＬＲＨ－ Ａ） ５０μｇｋｇ 加ＤＯＭ５ｍｇｋｇ 混合注射催产长吻鮠,能有效地促使ＧＴＨ细胞分泌促性腺激素,诱导卵母细胞成熟和排卵,催产效果显著。超微结构的进一步观察,揭示了长吻鮠脑垂体ＧＴＨ 细胞中存在两种分泌颗粒,即分泌小球,直径１２００～２０００ｎｍ ,电子密度低;分泌颗粒直径３００ ～５００ｎｍ ,电子密度高。分泌小球释放与卵母细胞的发育成熟有关,分泌颗粒的释放则与排卵相关。