卵巢质量和保存液对牛卵母细胞体外发育能力的研究

为研究卵巢质量和保存液对牛卵母细胞孤雌发育能力的影响,本实验将采集卵巢按其质量分为A、B 2组,于生理盐水中运输到实验室,利用切割法采集卵巢表面卵泡中的卵母细胞培养,成熟后孤雌激活;将采集牛卵巢随机分到D-PBS保存液与生理盐水中,运送到实验室后采集卵母细胞培养。以卵母细胞的成熟率、孤雌胚的卵裂率、囊胚率来评价卵巢质量、保存液对卵母细胞发育能力的影响。结果表明:A组卵巢平均获得的卵母细胞数(2.1枚)显著低于B组卵巢获得的卵母细胞数(5.5枚),从A组卵巢上获得的卵母细胞成熟率(56.98%)、卵裂率(42.86%)及囊胚率(9.52%)显著低于B组卵巢上获得的卵母细胞成熟率(84.38%)、卵裂率(70.17%)及囊胚率(31.50%)(P<0.05);使用含离子丰富的D-PBS溶液,较对照组保存液生理盐水,其卵母细胞的成熟率、卵裂率及囊胚率均没有显著差异(P>0.05)     

卵巢质量和保存液对牛卵母细胞发育能力的影响

随着胚胎工程技术的不断发展,体外授精、转基因、核移植等胚胎生物技术需要大量的卵母细胞。对于一些小家畜以及优良的种畜禽、珍稀野生动物和人而言,从其本身采集的卵母细胞比较有限,已远远满足不了当前科研和生产的需求。目前,胚胎生物技术研究主要是从屠宰场收集卵巢,获取大量未成熟的卵     

冷冻保存对猪卵母细胞超微结构及发育潜力的影响

随着辅助生殖技术的发展,配子与胚胎的超低温冷冻保存已成为动物种质资源保存的新热点,有可能在相当程度上替代活畜保种。但由于猪卵母细胞中含有大量脂滴,对低温敏感,耐受性差,给猪卵母细胞的冷冻保存带来很大的困难。目前还没有关于猪卵母细胞冷冻-解冻后经体外受精,然后移植产仔的成功报道,其原因可能是冷冻破坏了细胞骨架的结构。因此本文主要分析了冷冻保存对猪卵母细胞细胞骨架及其冻融后发育潜力的影响。     

提高绵羊卵母细胞发育能力的研究

近年来，研究者对羊卵巢在培养前的保存温度与时间，采卵方法等因素进行了研究，取得一些重要成果。在绵羊的体外受精研究中也发现，从不同温度保存的卵巢中采取的卵母细胞色泽变化明显。此次试验就绵羊卵巢的不同保存温度以及不同的采卵方法对卵母细胞发育能力的影响进行了研究，以期为提高绵羊胚胎体外生产效率提供有用的参考依据。     

不同冷冻方法对牛卵泡卵母细胞发育潜力的影响

本试验探讨了不同方法冷冻保存的牛卵泡卵母细胞体外受精后的发育潜力。尽管用不同方法冷冻的牛卵母细胞大多（79．1％）形态正常，但体外受精后的受精率（13．2％）和卵裂率（8．8％）均明显低于对照组（66．7％和46．0％），卵裂后继续发育的能力严重受损。在3种方法中，玻璃化冷冻效果最好，受精率分别达到15．0％和11．1％，是值得进一步研究的一种方法。     

钼对子代小鼠卵母细胞发育潜能及卵巢超微结构的影响

在饮水中添加终质量浓度分别为100、200、400mg/L的钼,于试验处理第90天时,将试验雌性鼠与健康雄性昆明鼠合笼,产生子代(F1和F2代),分析子代小鼠2-细胞、囊胚、怀孕率、产仔数和仔鼠初生质量,采用HE染色和透射电镜观察钼对子代小鼠卵巢组织形态学和卵巢细胞超微结构变化。结果显示:过量的钼显著降低了F1和F2代雌鼠的怀孕率、产仔数和仔鼠初生质量,使卵母细胞和受精卵发生了明显的病理形态学损伤,诱导了小鼠卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞超微结构的损伤。结果表明:过量的钼降低了小鼠卵母细胞的发育潜能,具有较强的雌性生殖毒性。     

屠宰绵羊卵巢卵母细胞的体外培养

为了使屠宰绵羊卵巢卵母细胞能够用于体外受精,本文着重探索了使卵巢卵母细胞体外培养成熟的方法和条件。实验结果表明,以TCM-199加10％FCS作为基本培养基,培养24～25小时,可以使绵羊卵巢卵母细胞培养成熟,其成熟率可达55.5％(435/784)。如果在培养液内添加hCG(0.02mg/ml)或LH(0.01mg/ml),并且尽可能保持卵丘细胞的完整,则可以使成熟率提高到76.9％(140/182)～82.9％(112/135)。     

褪黑素对猪卵巢在不同时间和温度条件下保存后卵母细胞体外成熟的影响

本研究旨在探讨不同温度和时间保存猪卵巢后对猪卵母细胞体外成熟的影响,通过培养液中添加不同浓度褪黑素,探索褪黑素对卵母细胞体成熟的最佳浓度,为远距离运输卵巢最适温度和时间条件的研究提供理论依据,进而改善胚胎体外生产效率。本实验将卵巢分别在4、17、25、37℃保温杯内保存0、4、8、10 h,筛出最适温度与时间后,在卵母细胞体外培养液中分别添加10^-5、10^-7、10^-9 mol/L浓度褪黑素,体外成熟44 h,采用孤雌激活的方式发育为胚胎,统计极体排出率、卵裂率、囊胚率。结果显示：卵巢37℃保存10 h,4℃保存4 h后卵母细胞均未达到MII期;与37℃和4℃相比,17℃、25℃保存卵巢后卵母细胞成熟质量得到大幅度提升(P<0.01);卵巢在25℃随着保存时间的延长,卵母细胞成熟率无显著差异,囊胚率高于17℃(P<0.01),且25℃保存卵巢8 h与4 h囊胚率无显著差异;25℃保存8 h后培养液中添加褪黑素,发现卵母细胞发育能力不受损伤,添加10^-7 mol/L褪黑素对卵母细胞体外发育...     

绵羊NYD-SP27基因对卵母细胞体外发育的影响

为探究绵羊精子提取物NYD-SP27影响绵羊早期胚胎体外发育的分子机理,研究其是否可以作为一种新型的卵母细胞激活物质,为进一步揭示哺乳动物早期胚胎发育的分子机制提供理论基础。分别将pEGFP-N1-NYD-SP27重组质粒,pEGFP-N1显微注射到MⅡ绵羊卵母细胞中,在显微镜下观察绵羊卵母细胞体外发育的情况,统计发育率。结果显示,注射pEGFP-N1-NYD-SP27组出现卵裂情况并可继续发育到桑葚胚,然而注射pEGFP-N1组发育停滞。表明NYD-SP27基因可以促使绵羊卵母细胞在体外发育。     

保存卵巢生理盐水温度的下降对猪卵母细胞体外成熟的影响

本试验研究了在37～38.5℃生理盐水中保存猪卵巢,卵巢运回实验室后生理盐水温度对猪卵母细胞体外成熟的影响。37～38.5℃的生理盐水中保存猪卵巢,运回实验室后,当温度下降为31℃、32℃、33℃、34℃及36℃时卵巢上抽取卵母细胞的成熟率分别为24.86±7.31%、21.34±5.12%、28.32±7.49%、21.14±4.82%和17.70±2.27%,淘汰率分别为53.42±12.10%、48.05±21.04%、43.93±12.77%、58.19±6.82%和62.06±12.03%,各组间差异不显著。结果表明:在37～38.5℃的生理盐水下保存猪卵巢,运回实验室后,当温度下降到31～36℃时对卵母细胞的成熟没有显著影响。     

鱼类卵巢发育的研究进展

随着鱼类社会需求量的增加及自然环境的破坏 ,鱼类自然资源明显减少。为了弥补自然资源不足和满足市场需求 ,并且对其增殖和资源保护提供一定的参考资料 ,从 50年代以来 ,国内外许多学者对多种鱼类的性腺发育及其周年变化进行了研究 ,其中关于雌性性腺 (卵巢 )的研究较多。1　卵母细胞的发育1 1　卵母细胞的发育分期对于硬骨鱼类生殖细胞和生殖腺发育阶段的分期 ,苏联、日本和美国都提出过分期的方法和标准 ,比较起来并不完全一致。我国的水产工作者基本上都是按照Мейен(1 939)提出的标准来划分的。Мейен认为 ,从卵原细胞到成熟…     

不同冷冻方法对GV期绵羊卵母细胞发育效果的影响

卵母细胞冷冻保存具有广泛而潜在的应用价值。文章主要分析了不同冷冻方法对绵羊GV期卵母细胞发育效果的影响。GV期卵母细胞程序化冷冻解冻后形态正常率（54.8%）和体外培养成熟率（14.7%）均显著或极显著低于细管玻璃化冷冻（71.8%,29.5%;P〈0.05）和OPS玻璃化冷冻（78.3%,P〈0.01;35.4%,P〈0.05）;3种不同方法冷冻GV期卵母细胞成熟率与对照组相比均差异极显著（P〈0.01）。     

不同冷冻和解冻方法对绵羊卵母细胞发育效果的影响

卵母细胞冷冻保存具有广泛而潜在的应用价值.试验主要分析了不同冷冻及解冻方法对绵羊GV期和MII卵母细胞发育效果的影响.GV期卵母细胞程序化冷冻解冻后形态正常率(54.8%)以及体外培养成熟率(14.7%)均显著低于细管玻璃化(71.8%,29.5%;P＜0.05)和OPS玻璃化(78.3%、35.4%;P＜0.05),卵裂率OPS玻璃化高于细管玻璃化,但差异不显著(26.1%,16.7%;P＞0.05);MII期卵母细胞形态正常率程序化冷冻显著低于细管玻璃化和OPS玻璃化冷冻(67.2%,77.6%,84.8%;P＜0.05),卵裂率OPS玻璃化显著高于程序化冷冻法(31.3%,10.3%;P＜0.05);3种不同方法冷冻不同发育时期卵母细胞成熟率和卵裂率与对照组相比较均差异极显著(P＜0.01).解冻后卵母细胞形态正常率三步与五步解冻法极显著高于一步解冻法(85.9%,82.7%,63.1%; P＜0.01);成熟率为三步法和五步法显著高于一步法(10.8%,26.9%,25.3%;P＜0.05);卵裂率三步法和五步法高于一步法,但没有差异显著性(14.3%,23.9%,21.1%; P＞0.05).     

不同保存条件对绵羊卵巢组织卵泡存活的影响

研究旨在通过组织学方法评估卵巢保存形式、温度、时间、保存液对绵羊卵巢组织短期保存以及培养后卵泡存活的影响。结果表明:碎块或整个卵巢组织39℃保存6 h或12 h后,正常卵泡比例与新鲜组织和其他组比较显著下降(P0.05)。经过6 d的组织培养后,在生理盐水中4、20℃保存6、12 h和39℃保存2 h以及在MEM中39℃保存2 h的组织碎块中正常卵泡比例显著低于整个卵巢保存后组织中正常卵泡比例(P0.05)。在MEM中4℃保存6 h或12 h,培养后卵泡存活率显著高于相同条件保存于生理盐水中的组织(P0.05)。此外保存12 h培养后正常卵泡比例显著低于保存2 h处理组(P0.05)。表明在生理盐水和MEM中整个卵巢4、20℃保存2~6 h,或者卵巢碎块20℃保存在MEM中2~6 h都可以用于卵巢体外培养的研究。     

卵母细胞去核方法及其对卵母细胞发育的影响

自1938年Spermann为研究不同发育时期细胞核的发育能力而提出的细胞核移植构想以来,核移植技术已经取得了极大的成就,特别是1997年由英国科学家Wilmut等经体细胞核移植克隆出绵羊"多莉"而带来的克隆风暴更是以迅猛之势席卷全球。     

屠宰母牛卵巢卵母细胞体外受精与发育的研究

将从屠宰母牛卵巢采得的卵母细胞用含有LH或hCG的M199培养24～26小时,然后用经钙离子载体Ionophore A23187诱导获能的牛新鲜或冷冻精子进行授精处理。授精6～7小时后再用含有乳酸钠和EDTA的M199培养至48～60小时后观察受精及受精卵的发育情况。结果表明,卵子的受精率及受精卵的发育率与卵母细胞成熟用培养基、授精用精子(新鲜或冷冻)以及供卵牛的品种均有关系。将用含有hCG的M199培养成熟的卵子,以获能处理过的新鲜精子授精后,其受精率和受精卵子中单精子受精并发育为2～8细胞期胚的比率在蒙古牛为91.4％(265/200)和19.6％(52/265),在黑白花奶牛为69.7％(62/89)和4.8％(3/62)。     

山羊卵母细胞冷冻保存及其对发育效果的影响

在程序冷冻条件下,冷冻保护剂种类对山羊卵母细胞发育效果有显著影响。对于山羊GV期卵母细胞,解冻后的形态正常率,PROH(83 1%)和DMSO(81 7%)均高于甘油(70 7%)(P<0 05);而体外成熟率则是PROH(20 3%)高于DMSO(14 2%)和甘油(9 8%),DMSO又高于甘油(P<0 05)。对于山羊IVM卵母细胞,解冻后的形态正常率,PROH(84 5%)和DMSO(86 4%)均高于甘油(74 2%)(P<0 05);而受精率则是PROH(23 2%)高于DMSO(17 5%)和甘油(13 1%),DMSO又高于甘油(P<0 05)。冷冻方法和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有显著影响。从冷冻方法看,程序冷冻和OPS玻璃化冷冻,GV期卵母细胞的成熟率分别为19 7%、27 6%,受精率为3 3%、8 6%;培养9h卵母细胞的成熟率分别为20 6%、30 9%,受精率为4 4%、10 3%;IVM卵母细胞的受精率分别为20 9%、29 4%,2 细胞率为4 4%、8 8%,均是OPS玻璃化高于程序冷冻,差异显著(P<0 05);从卵母细胞发育阶段看,不论是程序冷冻还是OPS玻璃化冷冻,GV期和培养9h卵母细胞的成熟率、受精率差异均不显著(P>0 05),但受精率均显著低于IVM卵母细胞(P<0 05)。     

半胱氨酸对猪卵母细胞体外发育潜力及谷胱甘肤水平的影响

探讨mTCM199中添加不同浓度的半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟及体外受精的影响,并研究了体外成熟过程中谷胱甘肽(GSH)浓度的变化.结果表明:0.10 mg/mL半胱氨酸可明显改善猪卵母细胞体外成熟和体外受精的效果(P<0.05),经测定,猪卵母细胞内GSH浓度随着半胱氨酸浓度提高与培养时间的延长而逐渐升高,且添加0.05 mg/mL和0.10 mg/mL半胱氨酸的猪卵母细胞培养48 h时可使GSH浓度达到最大值(P<0.05).因此,GSH的浓度可作为卵母细胞细胞质成熟度的一个特征性指标,且0.10 mg/mL半胱氨酸的猪卵母细胞成熟培养48 h的效果最好.     

不同生殖周期阶段对犬卵巢卵母细胞体外发育的影响

试验以屠宰场犬卵巢为材料,研究了不同生殖周期阶段(卵泡期、黄体期和乏情期)对犬卵母细胞体外发育的影响。结果表明,从卵泡期卵巢采集A类COCs的数量为22.67±11.02个,显著高于黄体期10.67±5.51个和乏情期7.25±4.92个(P＜0.05);体外培养48 h时,卵泡期、黄体期和乏情期卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率分别为19.2%±15.3%、26.8%±21.1%、9.8%±10.4%,卵泡期与黄体期之间差异不显著(P＞0.05),但两者均显著高于乏情期(P＜0.05);体外培养72 h时,卵泡期、黄体期和乏情期卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率分别为25.2%±13.5%、6.6%±6.7%、9.2%±5.5%,卵泡期显著高于黄体期和乏情期(P＜0.05)。同时,随体外培养时间延长,不同生殖周期阶段犬卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率存在不同变化。说明不同生殖周期阶段对犬卵巢卵母细胞体外发育有一定影响,且与培养时间有关。