氨苯磺胺多克隆抗体的制备

采用重氮化法将氨苯磺胺与人血清白蛋白偶联形成免疫原，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过紫外扫描分析，免疫原中药物分子与蛋白质分子的偶联比为32：1，改良辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗体，多克隆抗体效价达1：10^5，间接ELISA建立的氨苯磺胺检测的线性范围为1ng／mL～100μ/mL，70％抑制率可检测最低浓度为0．09μ/mL，以抗体与氨苯磺胺的反应率为100％，抗体与其他7种磺胺药交叉反应率很低。结果表明，制备的氨苯磺胺多克隆抗体具有很高的特异性，可用于动物性食品中氨苯磺胺残留的检测。     

磺胺甲噁唑的控温相变免疫分析

将已制备的抗磺胺甲噁唑（SMX）单克隆抗体（AbSMX）与温度敏感水凝胶（pNIPA）偶联形成水凝胶复合物（pNIPA—AbSMX），用异硫氰基荧光素（FITC）标记的抗原（FITC-AgSMX）和游离半抗原SMX竞争地与有限量的AbSMX和pNIPA—AbSMX反应，根据水凝胶相变温度以上免疫复合物沉淀的特性进行分离，结合接原抗体免疫反应测定SMX，建立了一种检测SMX的控温相变免疫分析方法。结果表明，SMX浓度在0．1ng／mL-100μg／mL范围内有良好的线性关系，60％抑制率时灵敏度为0．03μg／mL。     

一种快速的免疫分析法测定磺胺地索辛

利用热敏感性水凝胶作为磺胺地索辛(SDM)多克隆抗体载体,通过异硫氰基荧光素(FITC)标记SDM全抗原,建立一种快速的荧光免疫分析法测定SDM。实验结果表明,该法具有较高的灵敏度,对SDM测定的线性范围在1ng/mL￣100μg/mL,60%抑制率时检出限为0.114μg/mL。     

重氮氨苯脒抗血清的制备

重氮氨苯脒作为一种动物抗寄生虫药物,应用广泛,多个国际组织和国家将其列入需要检测残留的兽药。我国虽然也严格规定了其残留限量,但还未制定相关检测标准,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测该药物在我国更是空白。本研究通过改造免疫原免疫实验兔,获得了抗血清,该血清效价大于1∶50 000,线性范围在500³.9 ng/mL之间,线性系数R=0.99(R2=0.985 6)以上,特异性良好,为建立ELISA方法检测重氮氨苯脒提供了物质基础。     

双波长系数倍率法测定复方磺胺嘧啶钠注射液中甲氧苄氨嘧啶的含量

利用磺胺嘧啶钠（ＳＤ－Ｎａ）和甲氧苄氨嘧啶（ＴＭＰ）在硫酸（０．０５ｍｏｌ／Ｌ）中溶解度的不同,将其不完全分离,降低干扰组分ＳＤ－Ｎａ的比例,再用双波长系数倍率法消除其干扰,测定ＴＭＰ的含量。浓度Ｃ与△Ａ线性关系良好。相关系数ｒ＝０．９９９９,平均回收率９９．６％,ＣＶ＝０．５４％。     

酶免疫法测定磺胺喹恶啉残留的研究：磺胺喹恶啉抗体的制备

磺胺喹恶啉（ＳＱ）常用于鸡球虫病的防治，但它有一定的毒性，因此该化合物在肉类食品中的残留日益受到人们的关注。本试验用戊二醛法将ＳＱ与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）联接形成完全抗原，用紫外扫描对其进行鉴定，并测定其ＳＱ与ＢＳＡ的分子比为１２．１∶１。随后将此抗原免疫家兔制备高效价的抗ＳＱ血清，并用ＥＬＩＳＡ法和琼脂扩散法对其进行鉴定。     

紫外分光光度法测定氨苯胂酸预混剂的含量

紫外分光光度法测定氨苯胂酸预混剂的含量孙涛李西汉陆梅陕西省兽药监察所西安７１００１６氨苯胂酸（别名阿散酸Ａｒｓａｎｉｌｉｃｉ）能促进猪、鸡的生长发育。其含量测定《兽药质量标准》１９９６年第一册采用重氮化滴定法,本法易受滴定温度和速度的影响。本试验根据...     

紫外分光光度法测定氨苯胂酸的含量

采用紫外分光光度法测得百分吸光系数E1m为735,用其测定样品中氨苯胂酸的含量,并与永停法进行对照,结果基本一致.本法具有简便、快速、准确、重现性好等优点,可作为氨苯胂酸含量的另一种测定方法.     

磺胺甲噁唑人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

将磺胺甲噁唑以重氮化方法使之分别与人血清白蛋白(HSA)、卵清蛋白(OVA)载体蛋白连接,分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验,结果产生了特异性抗体。交叉试验表明:产生的特异性抗体与磺胺甲口恶唑反应明显,与其他类似物交叉反应不明显。     

副猪嗜血杆菌PCR快速诊断方法的建立

副猪嗜血杆菌营养要求比较苛刻,常规生化试验检测方法比较烦琐,本研究针对副猪嗜血杆菌16SrRNA基因特异性PCR引物序列,合成一对PCR引物,建立相应的PCR检测方法,同时对该方法的灵敏性、特异性等实验。结果显示可检测出浓度为2．8×10^3CFU／mL的副猪嗜血杆菌表明该方法灵敏度高;对大肠杆菌、链球菌、巴氏杆菌、沙门氏杆菌、金黄色葡萄球菌进行PCR扩增均不获得任何条带,表明该方法特异性较强。所以该方法对于临床快速检测副猪嗜血杆菌具有重要意义。     

麝属动物源性成分PCR检测方法的建立

为了对麝属动物源性成分进行有效鉴定,根据麝属动物线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Oligo7.0设计了特异性引物,用来建立PCR检测麝属动物源性成分的方法。结果显示:使用麝特异性引物优化的PCR体系可以对两份麝样品进行扩增,凝胶电泳均出现特异性条带。方法特异性好,只扩增麝属动物样品,16份其他物种的样品均为阴性结果。方法灵敏度较高,可检测到100个拷贝DNA的数量级。表明本研究建立的方法可应用于动物组织及其加工产品中的麝属动物源性成分的检测。     

应用间接荧光免疫技术检测牦牛致病性大肠杆菌

建立了用于检测牦牛致病性大肠杆菌的间接荧光免疫技术,对人工感染动物和自然感染病例进行了致病性大肠杆菌的检测,并作了阻断试验和类症试验。结果表明,试验建立的间接荧光免疫技术具有较高的特异性和敏感性,适用于牦牛致病性大肠杆菌的常规检测。     

卡氏住白虫病PCR诊断方法的建立

根据已测得的卡氏住白虫ITS-2序列，在3'端设计一种特异引物，另外采用一个位于5’端的保守引物，建立了鸡卡氏住白虫病的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验表明，该诊断方法与其他虫体如疟原虫，弓形虫，微孢子虫，球虫等无交叉反应性，能检测的卡氏住白虫最低DNA浓度为1000fg，可用于本病的早期诊断。     

鸡白细胞介素-6活性MTT检测方法的建立

采用白细胞介素-6依赖细胞株B9建立了鸡白细胞介素-6活性的MTT检测方法。每孔培养细胞数在2.5×103~4×104范围内D值与细胞数显示有良好的线性关系,MTT的最佳保留时间为4 h,最低检测限为0.1 U/mL。应用该方法检测了健康艾维茵肉鸡25例,血清chIL-6活性为(4.33±0.75)U/mL,而25例葡萄球菌病患鸡血清chIL-6的活性为(14.05±6.87)U/mL,与健康肉鸡比较差异极显著(P<0.01),为该方法进一步临床应用奠定了基础。     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及其化学发光酶免疫法的建立

以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得了一株分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)的杂交瘤细胞5D7,并对其进行效价、亲和力和特异性测定。结果显示,其分泌的抗体亚类为IgG1,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1∶512,诱生的腹水经纯化后效价为1∶2×105,亲和常数为3.6×108L/mol;应用上述单抗建立的检测氯霉素的化学发光酶免疫分析法(ci-CLIA),其检测范围为0.001μg/L~10μg/L,检出限达0.0025μg/L,IC50为39.6μg/L,且与L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、青霉素、四环素、庆大霉素等的交叉反应率均小于0.01%,可满足我国对水产品中氯霉素残留检测的要求。     

禽呼肠病毒套式RT-PCR检测方法的建立

根据GenBank中登录的禽呼肠病毒(ARV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为247 bp,建立了适合ARV快速检测的套式RT-PCR方法(RT-nested-PCR).采用该方法对REV毒株进行了检测,均能扩增到247 bp的条带,而禽流感病毒(H9亚型)...