广西农村养蚕生产应用的10种消毒剂对家蚕主要病原的消毒效果

针对目前广西农村养蚕生产使用的消毒剂产品质量参差不齐问题,选择农村养蚕生产应用的10种消毒剂:戊二醛、福尔马林、聚维酮碘、癸甲丙二醇氯铵复合碘、苯扎溴铵、癸甲溴铵、月苄三甲氯铵、二氧化氯、优氯净和漂白粉精,按消毒剂的生产实用浓度开展对家蚕病原体的杀灭效果试验,并调查其酸碱度和腐蚀性。结果显示:10种消毒剂对家蚕病原体的杀灭效果有很大差异,其中含醛类的戊二醛、含碘类的聚维酮碘和癸甲丙二醇氯铵复合碘对家蚕病原体基本没有杀灭效果;季铵盐类的苯扎溴铵、癸甲溴铵、月苄三甲氯铵对家蚕灵菌和白僵菌有杀灭效果,但对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和家蚕微孢子虫(Nb)没有杀灭效果;含氯类的优氯净和其他类的二氧化氯对家蚕灵菌、白僵菌和Nb病原体有较好的杀灭效果,但对BmNPV的杀灭效果差;对家蚕病原体的杀灭效果是含氯类的漂白粉精最佳,含醛类的福尔马林次之。消毒剂酸碱度对其杀灭家蚕病原体具有重要影响,戊二醛、福尔马林、聚维酮碘、癸甲丙二醇氯铵复合碘、苯扎溴铵、癸甲溴铵、月苄三甲氯铵、二氧化氯、优氯净等9种消毒剂呈酸性或弱碱性,杀灭BmNPV的能力差。醛制剂、碘制剂和季铵盐类消毒剂属于轻度腐蚀,对养蚕用具腐蚀性低;氯制剂类型消毒剂属于中度、重度腐蚀,腐蚀性强。为达到有效控制蚕病的发生,及满足农村养蚕既能消毒防病又能降低成本的需求,仍需要进一步研发广谱、高效、低毒、低刺激、低腐蚀的新型蚕用消毒剂。     

三种兽用消毒剂对伪狂犬病病毒的灭活效果研究

为了解兽用消毒剂对DNA病毒的灭活效果,本研究选择了猪伪狂犬病病毒为模式病毒开展消毒效果评估,指导消毒灭源工作。经对三种兽用消毒剂在不同浓度、不同作用时间和不同温度下对伪狂犬病病毒的杀灭效果进行实验室评价,结果显示,在20℃和37℃条件下,0.2%戊二醛癸甲溴铵溶液作用5 min, 0.05%的碘酸混合溶液作用10 min和有效氯为300 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液作用20 min,均可完全灭活伪狂犬病病毒;在4℃条件下,0.2%戊二醛癸甲溴铵溶液作用30 min,有效氯为300 mg/L的二氯异氰尿酸钠溶液作用40 min仍不能完全灭活伪狂犬病病毒。表明按生产厂家说明书推荐的病毒类和疫源地消毒浓度,在常温下和高温环境下,碘酸混合液、戊二醛癸甲溴铵溶液和二氯异氰尿酸钠均可有效地灭活伪狂犬病病毒,灭活率均在99.99%以上;而低温状态下,戊二醛癸甲溴铵溶液和二氯异氰尿酸钠溶液的灭活效果有所下降,应予以重视,必要时需提高作用浓度。     

犬瘟热、犬细小病毒胶体金二联检测卡研制

本研究通过细胞融合、间接ELISA方法筛选出4株可稳定分泌犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制了一种可同时检测CDV和CPV的胶体金二联检测卡,并对其特异性、灵敏度及准确性进行了测试。结果显示：4株杂交瘤细胞可稳定传代,分泌的单克隆抗体纯度高,效价均在1:320以上。制备的胶体金二联检测卡特异性强,只与CDV和CPV产生特异性条带,而不与其他犬类病毒反应;灵敏度高,最低检测限可达到10²拷贝/μL;准确性好,与荧光定量PCR结果的符合率高于88.0%,与市面上单一病毒检测卡的符合率高于97.2%。结果表明,本研究制备的CDV、CPV胶体金二联检测卡特异性强、灵敏度高、准确性好,兼具操作简便、肉眼可判读、结果易保存和无需特殊仪器设备等优势,可用于两种疾病的临床快速诊断和大规模检测工作。     

不同消毒剂对PRV、PPV和TGEV的灭活效果试验

为了确定癸甲溴铵-碘溶液消毒剂和癸甲溴铵消毒剂对猪主要疫病病原如猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的灭活效果,通过细胞观察法,用不同浓度的癸甲溴铵-碘溶液消毒剂和癸甲溴铵消毒剂对PRV、PPV和TGEV进行灭活来观察其灭活效果。结果表明,癸甲溴铵-碘溶液和癸甲溴铵溶液对细胞的最大无毒剂量分别为1∶80和1∶10。1∶320的癸甲溴铵-碘溶液消毒剂,1∶80的癸甲溴铵消毒剂与相应浓度的中和剂的反应产物已无毒副作用。癸甲溴铵-碘溶液消毒剂1∶800稀释时可使PRV TCID₅₀降低5个滴度,TGEV TCID₅₀降低4个滴度;癸甲溴铵消毒剂稀释到1∶400时,可使PRV和TGEV的TCID₅₀均降低约3个滴度。两种消毒剂对PPV的灭活效果均不理想。     

四种常用化学消毒剂对猪2型圆环病毒杀灭效果研究

试验应用复合碘制剂、2%戊二醛消毒液、优氯净消毒粉(二氯异氰尿酸钠)、苯扎溴铵四种常用的化学消毒剂对猪2型圆环病毒杀灭效果进行研究,采用病毒滴定、中和剂鉴定及病毒灭活试验进行检测。结果表明,二氯异氰尿酸钠的杀灭效果最好,其次是戊二醛,复合碘制剂也有一定的杀毒作用,苯扎溴铵消毒液的杀灭效果最差,建议将二氯异氰尿酸钠和戊二醛作为控制猪2型圆环病毒的消毒剂,可有效防止猪2型圆环病毒的传播。     

同时检测犬瘟热病毒和犬细小病毒双重PCR方法的建立

为建立可以同时检测犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的CDV N蛋白序列和CPV NS基因保守序列,设计合成2对特异性引物。通过优化反应条件,对CDV阳性病毒株反转录后的cDNA模板和CPV的DNA模板进行双重PCR扩增,同时得到2条与试验设计相符的669 bp(CDV)和392 bp(CPV)特异性条带,建立了同时检测CDV和CPV的双重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测这2种病毒,而对犬腺病毒Ⅰ型、犬腺病毒Ⅱ型、狂犬病毒检测均为阴性;CDV和CPV的最低检出限分别为101.8TCID50和101.4TCID50。采用该方法对在黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为30%;CPV阳性率为23.33%,表明建立的PCR方法可以用于临床诊断。     

新型复合消毒剂——癸甲丙二醇氯铵复合碘实验室抗病毒试验

通过对新型复合消毒剂——癸甲丙二醇氯铵复合碘抗病毒效果的定量试验和定性试验,结果表明,癸甲丙二醇氯铵复合碘（含碘50g／L）按1：500稀释,对猪瘟兔化弱毒和鸡新城疫病毒的灭活率均为100％,对新城疫病毒10min即达到完全灭活作用;按1：1000稀释对猪瘟兔化弱毒、鸡新城疫病毒及牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的灭活率分别为99％、100％和100％,而1：1000稀释的聚维酮碘（含碘50g／L）对照灭活率为90％,癸甲丙二醇氯铵复合碘的抗病毒效果好于聚维酮碘。     

几种消毒剂消毒效果观察

本文针对鸡场常见的4种主要致病茵（大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌）和1种病毒（NDV病毒）,选取13种消毒剂,进行细菌和病毒杀灭比较实验。结果表明：三氯异氰尿酸粉,碘＋磷酸溶液（2）,癸甲溴铵溶液（2）,过氧化氢＋过氧乙酸在低浓度下作用10min即可杀死新城疫病毒和4种主要致病细菌,为综合效果最好的消毒药;癸甲溴铵溶液（1）,碘＋磷酸溶液（1）,戊二醛甲溴铵溶液．复合酚消毒剂（1）,复合酚消毒剂（2）,复合酚消毒剂（3）应适当提高浓度或延长时间才能有效消毒;月苄三甲氯铵溶液,癸甲溴铵溶液（3）,癸甲溴铵＋碘溶液在任一推荐浓度下30min内均存在杀细菌或杀病毒无效的情况。     

犬瘟热病毒、犬细小病毒二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种特异、高通量检测犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)的二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,本研究选取高度保守且具有型特异性的CDV H基因和CPVVP2基因序列,设计CDV和CPV特异性引物对及TaqMan MGB探针;经反应条件优化,建立了检测CDV和CPV的二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,该方法检测CDV、CPV的标准曲线线性相关系数(R~2)分别为0.997和0.993,最低检出限均为10拷贝/μL,具有较高的灵敏性;对犬副流感病毒等4种病原对照和阴性对照均未出现扩增,特异性良好;CDV、CPV标准品批间试验结果显示,该方法具有很好的重复性;对48份临床疑似CDV或CPV感染样品检测结果显示,14份为CDV阳性,19份为CPV阳性,4份为CDV/CPV双阳性,与CDV H基因、CPVVP2基因测序结果符合率为100%。本研究建立的二重TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有灵敏、特异、高通量和可准确定量等优点,可用于临床CDV/CPV病毒感染各个时期的快速鉴别检测。     

3种常用消毒剂对基因Ⅶ型新城疫病毒的灭活效果

为评价种禽场常用消毒剂对基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)的灭活效果,采用悬液定量法和鸡胚接种试验对癸甲溴铵溶液、聚维酮碘溶液和戊二醛苯扎溴铵溶液3种消毒剂的最低杀毒浓度及其工作液的稳定性进行了研究。在试验条件下,3种消毒剂对基因Ⅶ型NDV均有良好的杀灭效果。癸甲溴铵、聚维酮碘和戊二醛苯扎溴铵溶液杀灭病毒的最低有效浓度分别为25、44.44 mg/L和0.27 mL/L(含戊二醛和苯扎溴铵各约26.67 mg/L)。配制的5 g/L聚维酮碘溶液和0.1 g/L癸甲溴铵溶液消毒工作液完全杀灭病毒的时间分别可保持10 d和135 d,而10 mL/L戊二醛苯扎溴铵溶液则至少可保持180 d。     

十种消毒剂对番鸭“白点病”病毒的体外杀灭效果试验

为了提高防制番鸭“白点病”的效果,本试验筛选了目前较为常用的10种消毒剂分别对番鸭“白点病”病毒进行不同时间的体外杀灭效果试验。试验结果表明,各种消毒剂在与“白点病”病毒体外作用15min、30min的情况下,百毒杀、复合酚(消毒灵)、过氧乙酸、二氯异氰尿酸钠、氢氧化钠、甲醛、苯酚、络合碘、戊二醛、乙醇等消毒剂对该病毒均有不同程度的杀灭作用,但百毒杀、过氧乙酸、苯酚、络合碘、戊二醛、乙醇等消毒剂只能致弱或灭活少数病毒,因此杀灭效果并不是很理想。而在0.5﹪甲醛、1∶200复合酚(消毒灵)作用15min,1﹪NaOH、1∶200020%二氯异氰尿酸钠作用30min的情况下,对该病毒的杀灭效果较佳,杀灭率均为100%。     

5种常见犬腹泻病毒基因芯片检测方法的建立

为建立一种简便、快速、高效的可同时区分犬腺病毒1型（canine adenovirus type 1,CAV-1）、犬腺病毒2型（canine adenovirus type 2,CAV-2）、犬冠状病毒（canine coronavirus,CCV）、犬瘟热病毒（canine distemper virus,CDV）、犬细小病毒（canine parvovirus,CPV） 5种常见犬腹泻病毒的基因芯片诊断方法,本研究以CAV-1、CAV-2、CCV、CDV、CPV 5种犬腹泻病毒为靶病毒,根据NCBI上收录的病毒基因序列在其保守区域内设计引物,在此基础上根据变异区域设计针对每种病毒的探针2~3条,优化检测体系的各反应条件,确定该检测方法的特异性与敏感性,建立可同时区分5种病毒的基因芯片检测方法。结果显示,建立的基因芯片检测方法可同时检测以上述5种犬腹泻病毒,其中PCR的退火温度为55℃、延伸时间为1 min 15 s;探针与PCR产物的杂交温度40℃、杂交时间2.5 h时,该方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒标准品的检测限分别为0.2 fg/μL、2 fg/μL、2 fg/μL、20 pg/μL和0.02 fg/μL,具有较高的灵敏性;同时对犬副流感病毒进行特异性试验,发现无阳性信号出现,具有较强的特异性;对14份临床腹泻样品检测结果显示,基因芯片方法对CAV-1、CAV-2、CCV、CDV和CPV 5种病毒的阳性检出率分别为28.57%、50.00%、64.28%、14.28%和85.71%,并且基因芯片检测方法的敏感性较PCR要高10~100倍。以上结果表明,本研究建立的基因芯片检测方法具有特异、敏感等特点,对临床中犬类混合感染病毒检测具有一定的诊断意义。     

复方季铵盐泡沫消毒剂成泡性能的优化及对病毒的杀灭效果评价

【目的】研究复方季铵盐泡沫消毒剂的成泡性能,并评估该消毒剂对新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）和猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）的杀灭效果,以及不同作用浓度和时间对消毒效果的影响。【方法】通过响应面法对复方季铵盐泡沫消毒剂中苯扎溴铵、癸甲溴铵和癸基葡萄糖苷3种成分的含量进行优化;采用悬浮杀灭试验,以细胞感染方法,测定该消毒剂稀释度为1：100、1：200、1：400、1：500、1：600、1：800和1：1 000时分别作用5、10和15 min对NDV LaSota株的灭活率;采用悬液定量法,测定该消毒剂稀释度为1：200、1：300、1：400、1：500、1：600时分别作用3、5、7、10和15 min对CSFV Thiveral株的灭活率。【结果】复方季铵盐泡沫消毒剂中主要成分苯扎溴铵、癸甲溴铵和癸基葡萄糖苷含量配比分别为1.4%、3.8%和0.75%时,成泡时间达到83 min。该消毒剂在稀释度最高为1：400（以总含量计约为137.5 mg/L）时,最短作用时间5 min,对NDV LaSota株灭活率为100%;最短作用时间为3 min时,对CSFV Thiveral株灭活率达到100%;作用时间延长至15 min时,对2种病毒的灭活率均稳定保持在100%。复方季铵盐泡沫消毒剂的稀释度低于1：400时,对NDV LaSota株杀灭效果不佳;稀释度为1：500（以总含量计约为110 mg/L）、1：600（以总含量计约为91.67 mg/L）时,作用时间10 min,对CSFV Thiveral株灭活率达到100%,作用时间延长至15 min时,灭活率稳定保持在100%。【结论】复方季铵盐泡沫消毒剂中苯扎溴铵、癸甲溴铵和癸基葡萄糖苷含量为1.4%、3.8%和0.75%时成泡效果最优,该消毒剂对NDV和CSFV杀灭效果较好,为其在养殖场的规范使用提供参考与理论依据,也为畜禽养殖业场地环境消毒效果评价提供更多的可能性。     

17种消毒剂对大肠杆菌、沙门菌及金黄色葡萄球菌的杀菌试验

为了评价蛋鸡场常用消毒剂的消毒效果,本研究进行17种消毒剂对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌最小杀菌浓度的比较,在此基础上选取9种性价比较高的消毒剂进行定量杀菌试验,比较不同浓度有机物干扰下,9种消毒剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果。结果:在无有机干扰物的情况下,戊二醛癸甲溴铵、新欧福、百敌克、月苄三甲氯铵、安立消5 min即可对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌杀灭率达到100%。不同浓度的有机干扰物对消毒剂杀菌作用的干扰程度不同,其中新欧福、百敌克、百能、月苄三甲氯铵受有机干扰物影响较小;戊二醛癸甲溴铵抗干扰能力较弱。在同种有机干扰物浓度下,金黄色葡萄球菌比大肠杆菌更难杀灭。结论:月苄三甲氯铵、百敌克、安立消、新欧福性价比较高,抗有机物干扰的能力较强。     

犬细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速的犬细小病毒(CPV)病原检测方法,本试验根据GenBank上登录的CPV基因序列,在保守的VP2基因内部设计合成内外2对引物,建立了检测CPV的套式PCR方法。该方法对犬瘟热病毒(CDV)、犬冠状病毒(CCoV)、犬腺病毒(CAV)、犬副流感病毒(CPIV)的扩增结果均为阴性;该检测方法最低可以检测出0.1 ng的病毒核酸,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。建立的套式PCR方法具有良好的特异性、敏感性,可以准确快速检测出极低含量的CPV,将为CPV的病原检测及分子流行病学调查等提供一种高效、快速、特异、灵敏的检测方法。     

CDV、CPV和CPIV多重PCR检测方法的建立

为了建立一种快速诊断犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的多重PCR方法,参照GenBank中的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)基因序列,设计了3对引物分别用于特异扩增犬瘟热病毒F基因、犬细小病毒VP2基因和犬副流感病毒F基因上的目的片段.通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(740 bp)、CPV(419 bp)和CPIV(559 bp)的多重PCR方法.结果表明特异性和敏感性良好,对CDV、CPV、CPIV3种病毒的最低核酸检测量为1 ng/μL.临床样品的多重PCR检测结果表明,建立的多重PCR方法能够对CDV、CPV、CPIV单个感染或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断.     

凹凸棒复合氯消毒剂消毒效果研究与安全性评价

目的：观察凹凸棒复合氯消毒剂的消毒效果和安全性。方法：将凹凸棒复合氯消毒剂和强力消毒灵按照不同的稀释度稀释后,与金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、蜡样芽孢杆菌、禽巴氏杆菌、丝状霉形体山羊亚种、鸡新城疫病毒、猪瘟病毒兔化弱毒分别作用不同时间,检测其抑菌、杀毒效果。通过急性毒性试验、皮肤刺激性试验和急性眼刺激试验评价该消毒剂的安全性。结果：凹凸棒复合氯消毒剂在不同稀释倍数下对细菌和病毒有一定的抑制和杀灭作用,且无明显毒性。结论：凹凸棒复合氯消毒剂对细菌和病毒有抑制和杀灭作用,且安全、有效。     

同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、Ⅰ型和Ⅱ型犬腺病毒多重PCR方法的建立

为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物.通过优化反应条件,建立同时扩增CDV (507 bp)、CPV (287 bp)、CAV-Ⅰ (590 bp)和CAV-Ⅱ(1 027 bp)的多重PCR方法.实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测以上4种病毒,而狂犬病病毒检测为阴性;CDV、CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的最低检出限分别为101.9 TCID50、101.7 TCID50、101.7 TCID50和102.2 TCID50.利用该方法对由黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为23.33％(7/30)、CPV阳性率为20％(6/30)、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的阳性率均为3.33％(1/30),证明建立的PCR方法可以用于临床诊断.     

复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒作用机理研究

为探讨复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒(CPV)感染F81细胞作用机制,以F81细胞为宿主细胞,复方苦芩和黄芪多糖作药物对照,从复方苦芩总多糖对CPV的直接灭活作用、阻滞作用、抑制吸附、穿入及其复制5个方面探讨复方苦芩总多糖抗CPV活性机理.结果显示,复方苦芩总多糖在CPV病毒复制过程中均有一定的抑制作用,其中直接灭活作用效果优于复方苦芩组,P＜0.05,复制试验效果优于复方苦芩组,P＜0.05,与阳性药物组差异不显著,P＞0.05.从而表明复方苦芩总多糖体外抗CPV感染F81细胞效果明显,且主要通过直接灭活CPV和抑制其复制而发挥作用.     

2005—2014年青岛市犬类重要传染病流行的相关因素分析

<正>犬瘟热、犬细小病毒病和犬冠状病毒性腹泻是目前在城市犬群中广泛流行的3种高度接触性传染病,各个品种的犬均易感且发病率和死亡率较高,尤其是对幼犬具有极大的危害性。这3种犬类最重要的传染病分别由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)和犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)引起,在临床上混合感染