巨竹ISSR反应体系的建立与优化

以巨竹叶片提取的基因组DNA为材料,用引物UBC810(序列为GAG AGA GAG AGA GAG AT)研究了PCR反应体系的主要成分、退火温度及循环次数对该种植物ISSR扩增结果的影响。结果表明,20μL的反应体系含40 ng模板DNA、0.6μmol.L-1引物,1.0 U Taq DNA聚合酶,2.5 mmol.L-1Mg2+,0.25 mmol.L-1dNTPs,1×Buffer。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性45 s,54.5℃复性30 s,70℃延伸90 s,循环40次;72℃延伸10 min,置4℃保存。     

芍药设施栽培品种筛选

基于现有的芍药设施栽培品种评价,增加衡量芍药在设施弱光环境下光能利用能力的指标,初步建立了基于层次分析法的芍药设施栽培适用品种的评价体系。评价模型的层次分为:目标层（优良的设施栽培芍药品种）,约束层（植株性状、开花性状、光能利用能力、抗病性）,指标层（复叶数、开花率、抗病害能力等18个指标）。运用层次分析法对18个具体指标的权重进行计算,结果表明着花量、花径、茎粗、单朵花期、最大净光合的总排序权重值分别为0.127 9、0.109 9、0.088 9、0.085 5和0.080 2,所占比重较大。运用该体系对14个芍药品种进行评价,筛选出4个整体性状良好的设施栽培品种:‘蓝田飘香’、‘蓝海碧波’、‘粉玉奴’、‘莲台’。评价结果与实际栽培效果相符,具有良好的适用性。     

麻栗坡兜兰ISSR引物筛选及反应体系的优化

[目的]对麻栗坡兜兰ISSR引物进行筛选,并建立一个稳定性高、重现性好、适合麻栗坡兜兰ISSR反应体系。[方法]以麻栗坡兜兰DNA为模板,分别对Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、DNA等PCR反应成分进行优化,并用优化的体系对25条兰科中报道的ISSR引物进行筛选。[结果]确立了麻栗坡兜兰最适ISSR-PCR反应体系:在25μl反应体系中,Mg2+2 mmol/L、引物0.4 mmol/L、dNTP 0.20 mmol/L、DNA 1.5μl、Taq酶1.4 U。利用该体系,共筛选得到10条ISSR引物用于麻栗坡兜兰分析,并对21份麻栗坡兜兰材料进行扩增,获得了较好的扩增效果。[结论]该体系稳定可靠,为今后ISSR标记在兜兰属植物的种质鉴定、遗传多样性等方面的广泛应用奠定了重要基础。     

芍药性状聚类分析及其在育种上的应用

对33个芍药栽培品种的34个性状观测,采用欧氏距离通过最短距离法(shortest distance)进行聚类,各品种在3类性状下均聚为4类.对同一类群中确定能稳定表达特定性状的品种,并进行归类:紫霞映雪、朱砂判、大富贵,适于做庭园绿化品种选育的亲本;妒花魁,适宜做庭园绿化品种和盆栽品种选育的亲本;紫碟系金、合欢娇、紫金龙,适宜做庭园绿化品种和切花品种选育的亲本.     

黑龙江林蛙ISSR反应体系的建立与优化

以黑龙江林蛙为材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、DNA聚合酶、模板进行体系优化,对引物的最佳退火温度进行选择,建立适合黑龙江林蛙的ISSR-PCR分析的最佳体系:在25μL总体积中,包含10×PCR Buffer 2.5μL,Mg2+4.0 mmol.L-1,dNTPs 0.15 mmol.L-1,引物0.3μmol.L-1,TaqDNA聚合酶0.5 U,DNA模板2.0 ng.μL-1,最佳退火温度53.8℃。为利用该技术对黑龙江林蛙遗传多样性分析和构建遗传图谱提供一定的依据。     

独尾草DNA提取方法优化及ISSR反应体系的建立

为研究独尾草(Eremurus chinesis Fedtsch.)的遗传多样性,以独尾草的干燥叶片为研究材料,比较了SDS法和CTAB法提取独尾草总DNA的效果,并对CTAB法提取方法进行了优化.采用正交试验以Mg2+、dNTP、Taq酶、引物4因素3水平建立了独尾草的ISSR反应体系.结果表明,优化的CTAB法提取独尾草DNA的质量较好,在l0 μl的反应体系中,含10×PCR Buffer、1.0 mmol/l MgCl2、200 μmol/l dNTP、0.75 U Taq酶、0.4mol/l的引物和20 ng模板DNA.基于上述ISSR反应体系,筛选出了适合独尾草遗传多样性分析的21条ISSR引物.     

早稻孢囊线虫ISSR反应体系的建立与优化

采用正交设计对早稻孢囊线虫ISSR-PCR反应体系的4因素(Taq酶、模板DNA、dNTPs、引物)在4个用量水平上进行优化试验.结果表明,早稻孢囊线虫ISSR-PCR最佳的反应体系为:在25μL反应体系中,含TaqDNA聚合酶(5U/μL)0.3 μL、模板DNA 1μL、dNTPs(2.5 mmol/L)2 μL、引物(10 μmol/L)1 μL、10×PCRBuffer(20 mmol/L Mg2+ plus)2.5 μL.引物UBC887最适退火温度为48℃.优化的早稻孢囊线虫ISSR-PCR的反应体系和程序有较好的重复性和稳定性.     

大豆孢囊线虫ISSR反应体系的建立与优化

采用正交设计对大豆孢囊线虫ISSR-PCR反应体系的4因素(Taq酶、模板DNA、d NTPs、引物),在4个用量水平上进行优化试验。结果表明:大豆孢囊线虫ISSR-PCR的最佳反应体系为在25μL反应体系中,含Taq DNA聚合酶(5 U/μL) 0. 34μL、模板DNA 1. 2μL、d NTPs(2. 5 mmol/L) 1. 5μL、引物(10μmol/L)0. 8μL、10×PCR Buffer 2. 5μL。引物PTY26最适退火温度为55℃。用引物PTY188和PTY888对大豆孢囊线虫最佳ISSR-PCR的反应体系进行验证,结果表明该反应体系和程序有较好的重复性和稳定性。     

枣ISSR反应体系的建立及其指纹图谱构建

对影响枣ISSR反应的相关因子进行了研究。优化的反应体系包含:2.5μL 10×buffer,50 ng模板DNA,2.5 mmol.L-1 Mg2+,0.3 mmol.L-1 dNTPs,0.3μmol.L-1引物,2 U Taq DNA聚合酶,反应体积为25μL;优化的PCR扩增程序为:94℃2 min;94℃l min,退火1 min,72℃2 min,循环35次;72℃延伸10 min;退火温度根据引物温度设定。该ISSR体系被用于17个枣栽培品种遗传图谱分析,结果表明所构建的遗传图谱能较好地反应供试品种的遗传多样性。     

油楠基因组DNA提取·ISSR反应体系优化及引物筛选

[目的]对油楠基因组DNA提取、ISSR反应体系优化及引物筛选进行探讨。[方法]运用改良CTAB法对油楠树皮进行基因组DNA提取,利用单因素试验,对油楠ISSR-PCR反应各因素水平进行优化。[结果]运用改良CTAB法对油楠树皮进行基因组DNA提取效果最佳;最优体系:20μl反应体系中,模板用量20 ng,引物浓度0.6μmol/L,d NTPs浓度0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶用量1.5 U,10倍反应缓冲液2μl,dd H2O补至20μl;以该体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR随机引物中筛选出13条多态性较高、扩增条带清晰、重复性好的引物。[结论]该研究丰富了油楠遗传学基本资料,为油楠遗传多样性研究奠定基础。     

梨品种ISSR-PCR反应体系的优化与应用

以海子梨渊Haizili冤品种的DNA 为材料袁对影响ISSR-PCR 扩增的重要因子进行单因素的优化设计袁建 立了最佳体系: 25 滋L 反应体系中含2.5 滋L 10伊buffer尧0.75 U Taq DNA 聚合酶尧0.2 mmol/L dNTPs尧2.5 mmol/L MgCl2尧0.25 滋mol/L 引物尧10~60 ng 模板DNA遥将最佳体系应用于黔西南的22 个梨品种袁证实了该体系的重复性好袁 很稳定遥     

粗毛淫羊藿ISSR-PCR体系的正交优化

采用正交试验设计方法,建立了粗毛淫羊藿ISSR分析的优化反应体系：即20μL反应体系中含有10×buffer、2．0mmol·L^-1Mg^2＋、0．10mmol·L^-1 dNTP、1．5UTaq酶、40ng模板DNA和0．6μmol·L^-1引物;PCR反应程序为：95℃5min;94℃30s,52℃45s,72℃2min,共35个循环;72℃10min,4℃保存。     

Optimization of ISSR-PCR system in licorice

甘草是中国最大宗的药材之一,具有重要的药用、生态及工业价值。利用ISSR技术对甘草种质资源的遗传多样性进行深入研究,对甘草物种生物多样性的保护及新品种培育具有重要意义。研究了影响甘草ISSR-PCR扩增效果的一些因素,实验结果表明:最适宜用于甘草ISSR PCR分析的反应条件为:20μl反应体系中,1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10mmol/LTris-HCL,pH9.0,50mmol/LKCL,0.1%TritonX_100,2.0mmol/LMg2 ),0.8UnitTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,200μmol/LdNTP,10ng模板DNA。     

茶树ISSR-PCR反应体系优化研究

通过优化影响茶树ISSR PCR的主要参数,确立适合于茶树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明,在20μl反应体系中模板DNA的用量、T aq酶用量、引物浓度、M g2 浓度、dNT p浓度分别为:模板DNA为40 ng;T aq酶为0.5 U;引物为0.25μm o.lL-1;M gC l2为1.5 mm o.lL-1;dNT p为0.2 mm o.lL-1。适宜退火温度比Tm值高2~3℃。     

单雌蓖麻ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以单雌蓖麻提取的基因组DNA为材料,采用单因子试验方法,分别研究了Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶以及模板DNA用量5种因素对ISSR-PCR反应的影响;建立了适合单雌蓖麻IS-SR-PCR扩增的反应体系,即在20μL反应体系中,10×PCR buffer 2.5μL(Mg2+free),模板DNA 20 ng,2.0mmol/L MgCl2,引物浓度1.0μmol/L,dNTP 0.4 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U。     

葡萄种质资源ISSR-PCR反应体系的建立与优化

【目的】建立并优化葡萄种质资源稳定的ISSR—PCR体系,为葡萄种质资源研究和种质创新奠定基础。【方法】以新疆22个葡萄种质资源叶片为材料,采用改良CTAB法提取葡萄基因组DNA,并利用单因素法对影响ISSR反应体系中的各个影响因子进行优化。【结果】优化的最佳ISSR—PCR反应体系为：模板DNA30ng,dNTPs0．3mmol／L,引物0．5μmol／L,Taq DNA聚合酶1．0U,反应体系为25．0μL。【结论】优化了新疆葡萄种质资源ISSR-PCR反应体系中的各个影响因子,利用该体系能够扩增获得清晰、稳定的条带,可以用于葡萄种质资源遗传多样性分析。     

中国芍药分类学研究进展

该文从历史和现状两个层面上概述了中国芍药的分类学研究进展.芍药科系单属科,由芍药属从毛茛科独立而来.芍药属内划分为3个组,即牡丹组、北美芍药组和芍药组,其中芍药组系属内最大的组,约含22个种,组内又有全缘羽叶亚组和多裂叶亚组之分.在中国芍药种质资源的分类史上曾先后提名过13个种,但目前已基本得到公认的却主要有8个种(5个变种),皆隶属于芍药组.中国芍药品种资源众多,其分类历史悠久,按照花型演进规律目前已形成日趋一致的花型分类方案.     

毁灭炭疽菌RAPD和ISSR-PCR最佳反应体系的建立

对影响PCR反应的主要因子-Md2+、dNTP、Taq酶、引物浓度进行优化,建立起适合于毁灭炭疽菌基因组DNA的RAPD和ISSR反应体系.RAPD反应体系(25μL):Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,Taq酶用量为1U,引物浓度1μmol/L.ISSR反应体系(25μL)为:Mg2+浓度为2 mmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,Taq酶用量为0.5 U,引物浓度为1.25 μmol/L.     

扁玉螺ISSR-PCR反应体系的建立及其优化

以扁玉螺基因组DNA为材料,分析了Mg2 ,dNTP、Taq DNA聚合酶、引物以及模板DNA浓度对ISSR-PCR扩增效果的影响,建立了一套适合扁玉螺的ISSR-PCR反应体系.该反应体系包括:2.0mmol·L-1的Mg2 ,0.25 mmol·L-1的dNTP,0.8 U的Taq DNA聚合酶,0.2 μmol·L-1的ISSR引物和40 ng模板DNA.利用优化后的反应体系,从30条ISSR引物中筛选出13条扩增效果较好的引物,为进一步利用ISSR标记研究扁玉螺的遗传多样性奠定了基础.     

松江鲈鱼ISSR-PCR反应体系的建立及优化研究(英文)

[Objective] The aim of this study is to establish and optimize the ISSR-PCR system in roughskin sculpin(Trachidermus fasciatus Heckel).[Method] By using the primer of ISSR-63,the concentrations of Taq DNA polymerase,Mg2+,dNTPs and primer were optimized by orthogonal design for establishing the suitable ISSR-PCR system in roughskin sculpin;moreover,the suitable anneal temperature was yielded from gradient PCR on temperature.[Result]The optimized ISSR-PCR system(20 μl reaction volume)in roughskin sculpin was proved to be:2.5 mmol/L Mg2+,250 μmol/L dNTPs,0.25 μmol/L primer,1 U Taq DNA polymerase,30 ng DNA template and 1×PCR buffer;and suitable anneal temperature was determined to be 50.8 ℃.The established system was further confirmed by using 24 wild roughskin sculpin samples.[Conclusion]The results lay a foundation for the analysis of genetic diversity and germplasm resources of roughskin sculpin.