内蒙古脉翅目昆虫的初步研究

脉翅目Ｎｅｕｒｏｐｔｅｒａ属于昆虫纲（Ｉｎｓｅｃｔａ）,有翅亚纲（Ｐｔｅｒｏｇａｔａ）中完全变态的昆虫,通称岭。包括粉蛉、褐蛉、草蛉、蚁蛉、螳蛉、喋角蛉等科。脉翅目昆虫成虫和幼虫均为捕食性。可控制多种农林草原害虫,主要以蚜虫、介壳虫、红蜘蛛（螨类）、粉虱、木虱、叶蝉、蓟马、鳞翅目的卵和幼虫为食,是一类重要的天敌昆虫,目前已用于生物防治的有草岭科、粉蛉科,可用于生物防治的有褐蛉料。脉翅目昆虫全世界已     

二化螟线粒体cox1基因的克隆、序列测定和分子系统学分析

[目的]克隆并分析二化螟线粒体细胞色素c氧化酶亚基I基因（cox1）。[方法]利用PCR方法扩增了二化螟线粒体cox1基因,并测定了其全序列。通过检索GenBank数据库获得了其他21种鳞翅目昆虫的cox1序列,并进行了同源性比较和分子系统学分析。[结果]cox1基因编码框包含1531个核苷酸,编码510个氨基酸的蛋白;起始密码子为CGA,终止密码子仅由一个T组成。利用ML方法构建了基于cox1基因编码氨基酸序列的鳞翅目昆虫的分子系统树,发现分子系统树与从形态学角度的系统分类在大方面上是基本一致的,但也略有差异。[结论]为进一步研究cox1基因的表达和应用奠定了基础。     

杆状病毒泛素蛋白的序列及分子进化分析

[目的]分析杆状病毒泛素蛋白的序列特征和分子进化。[方法]运用Clustal W软件进行序列多重联配分析,采用临近法（NJ）和最大简约法（MP）构建系统进化树。[结果]昆虫杆状病毒泛素与真核生物泛素的一致性为73%～86%,差异体现在氨基酸15～32和53～57的序列上,其他序列高度保守。在真核生物泛素蛋白序列中,许多功能性的氨基酸残基在昆虫杆状病毒泛素蛋白序列中也存在。系统进化分析将昆虫杆状病毒和真核生物泛素蛋白大致分为3个亚家族,即GV族、Ⅰ族和Ⅱ族。杆状病毒泛素基因采取负选择的进化方式,在长期进化过程中,其氨基酸序列倾向于逐渐被固定下来,达功能和结构上的稳定。[结论]分析杆状病毒泛素的序列特征和分子进化,为进一步研究其生物学功能提供参考。     

二化螟线粒体cox1基因的克隆、序列测定和分子系统学分析

[目的]克隆并分析二化螟线粒体细胞色素c氧化酶亚基I基因（cox1）。[方法]利用PCR方法扩增了二化螟线粒体cox1基因,并测定了其全序列。通过检索GenBank数据库获得了其他21种鳞翅目昆虫的cox1序列,并进行了同源性比较和分子系统学分析。[结果]cox1基因编码框包含1531个核苷酸,编码510个氨基酸的蛋白;起始密码子为CGA,终止密码子仅由一个T组成。利用ML方法构建了基于cox1基因编码氨基酸序列的鳞翅目昆虫的分子系统树,发现分子系统树与从形态学角度的系统分类在大方面上是基本一致的,但也略有差异。[结论]为进一步研究cox1基因的表达和应用奠定了基础     

杆状病毒泛素蛋白的序列及分子进化分析

[目的]分析杆状病毒泛素蛋白的序列特征和分子进化。[方法]运用ClustalW软件进行序列多重联配分析,采用临近法（NJ）和最大简约法（MP）构建系统进化树。[结果]昆虫杆状病毒泛素与真核生物泛素的一致性为73%～86%,差异体现在氨基酸15～32和53～57的序列上,其他序列高度保守。在真核生物泛素蛋白序列中,许多功能性的氨基酸残基在昆虫杆状病毒泛素蛋白序列中也存在。系统进化分析将昆虫杆状病毒和真核生物泛素蛋白大致分为3个亚家族,即GV族、I族和II族。杆状病毒泛素基因采取负选择的进化方式,在长期的进化过程中,其氨基酸序列倾向于逐渐被固定下来,达功能和结构上的稳定。[结论]分析杆状病毒泛素的序列特征和分子进化,为进一步研究其生物学功能提供参考。     

中华蜜蜂GnRH相关受体的基因克隆及表达研究

[目的]克隆中华蜜蜂(Apis cerana cerana)促性腺激素释放激素(gonadotrophin releasing hormone,GnRH)相关受体基因,对其进行表达研究。[方法]利用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂的GnRH相关受体基因的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析和表达产物的原位杂交组织化学研究。[结果]序列分析显示,GnRH相关受体的cDNA序列全长1 177 bp,开放阅读框长1 050 bp,编码349个氨基酸残基。推导的氨基酸序列具有7个跨膜区;预测的分子量和等电点分别为40.6 kD和9.54。聚类分析显示该蛋白质与其他已知昆虫的GnRHRⅡ具有较近的亲缘关系。原位杂交显示GnRH相关受体基因在中华蜜蜂的脑、精巢、脂肪体以及肠道等组织均有表达。[结论]该研究结果表明GnRH相关受体为昆虫提供了生殖和新陈代谢之间的分子纽带,其在协调昆虫的生殖活动和环境状况的关系中执行了一定的功能。     

棉铃虫蛋白酶体β5基因Habeta5的克隆与序列分析

[目的]运用分子生物学技术克隆棉铃虫蛋白酶体B5亚基新基因,为进一步研究其功能奠定基础。[方法]以棉铃虫中肠总RNA为模扳,利用快速扩增cDNA末端（RACE）技术克隆棉铃虫蛋白酶体B5亚基新基因的cDNA序列并对所获序列进行分析。[结果]成功克隆了棉铃虫蛋白酶体瞄亚基全长947bp的cDNA序列,命名为Habeta5,包含1个843bp的完整开放读码框（ORF）序列,编码蛋白质为280个氨基酸残基,预测分子量为30．87kD,等电点为6．53。Habeta5蛋白在74～261氨基酸残基位置为蛋白酶体B5亚基的保守区域。Clustal W进行多序列比对发现,Habeta5蛋白质与果蝇等昆虫蛋白酶体B5具有62％以上的同源性,蛋白酶体B5的保守区域高度一致。邻近法NJ分子进化分析也显示,Habeta5蛋白质与其他生物蛋白酶体茚进化上同源。[结论]序列分析比对的结果表明所克隆的基因为棉铃虫蛋白酶体B5亚基基因（GenBank登陆号：FJ358434）。     

牙鲆鱼肠道鼠李糖乳杆菌P15的分子鉴定与系统发育分析

[目的]对1株分离自健康牙鲆鱼肠道固有菌群的乳杆菌P15进行分子鉴定。[方法]利用PCR技术测定该菌株的16S rRNA基因序列,然后在GenBank中进行相关细菌相应序列的同源性比对,利用MEGA（4.0）软件进行系统发育学分析。[结果]获得了该菌株的16S rRNA基因序列（登录号为AY852248）。菌株P15与鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）的亲缘关系最近。[结论]菌株P15被鉴定为鼠李糖乳杆菌。     

黄粉虫酪氨酸羟化酶基因的克隆与序列分析

[目的]克隆鞘翅目昆虫黄粉虫酪氨酸羟化酶（TmTH）基因。[方法]采用eDNA末端快速扩增（RACE）技术和PCR方法克隆了鞘翅目昆虫黄粉虫‰掰基因,并对其进行了生物信息学分析。[结果]‰ⅢcDNA全长2103bp,包含1605bp的开放式阅读框,可编码534个氨基酸残基,蛋白质分子量为60.66kD,等电点为5．70,构建了其系统进化树。[结论]m掰基因的克隆为鞘翅目昆虫酪氨酸’羟化酶的研究提供了参考。     

环介导等温扩增技术检测沙门氏菌反应体系的优化

[目的]建立快速检测沙门氏菌的环介导等温扩增（LAMP）技术。[方法]以沙门氏菌的特异性基因（invA）序列为靶序列设计引物,并对该序列进行等温扩增;对Mg2＋浓度、反应温度和反应时间扩增条件进行优化,并对沙门氏菌进行检测和鉴定。[结果]在Mg2＋浓度为2.0mmol/L时,62℃反应40min,扩增可达最佳效果,LAMP法检测的灵敏度为7.8cfu/ml。[结论]建立了快速检测沙门氏菌的LAMP技术,该方法灵敏度高、耗时短、方法简便,便于在基层推广,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。     

泰山螭霖鱼线粒体COⅠ基因序列的遗传多样性分析

[目的]通过克隆泰山螭霖鱼的COⅠ基因序列,研究其与鲤科几属鱼类的进化关系,确定泰山螭霖鱼的分类地位。[方法]以泰山螭霖鱼30个个体为材料,对其线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)的部分序列进行PCR扩增和序列对比,检测泰山螭霖鱼的遗传多样性;计算泰山螭霖鱼不同单倍型与Gen Bank中鲤科5个属鱼类的遗传距离,采用聚类分析方法,构建NJ和UPGMA系统进化树。[结果]30个个体泰山螭霖鱼线粒体COⅠ基因片段长度约1 600 bp,无碱基的插入和缺失,纯化并去除引物序列后获得约1 493 bp的核苷酸序列,存在6种单倍型,共检测到6个多态位点,包括4个转化、2个颠换,其单倍型多样性(Hd)为0.460,核苷酸多样性(Pi)为0.000 78,平均核苷酸差异数(K)1.163。遗传距离和NJ和UPGMA系统进化树表明,泰山螭霖鱼与多鳞白甲鱼的COⅠ序列一致,泰山螭霖鱼所在的突吻鱼属与光唇鱼属的亲缘关系最近,与金线鲃属、倒刺鲃属、华鲮属的亲缘关系较远。[结论]该研究为其种质资源的管理与保护及遗传育种提供分子生物学依据。     

红斑大壁虎与黑斑大壁虎细胞色素b基因序列差异与分化

[目的]探讨黑斑大壁虎和红斑大壁虎（Gekko gecko）之间的分化程度。[方法]对黑斑大壁虎和红斑大壁Cty b基因的序列进行测定,获得Cyt b基因全序列1 147 bp。以白脊壁虎（G.vittatus）和沙虎（T.keyserlingii）为外群,用邻接法（NJ）和最大简约法（MP）构建了2种大壁虎的系统发育关系。[结果]黑斑大壁虎与红斑大壁虎Cyt b基因的差异程度达到9.18%,NJ和MP分子系统树显示黑斑大壁虎与红斑大壁虎明显分为二支。[结论]两者达到了亚种分化的差异。     

基于Cytb基因序列的拟硬刺高原鳅遗传多样性研究

[目的]探究拟硬刺高原鳅种群的遗传多样性和分化程度。[方法]采用聚合酶链式反应（PCR）和直接测序方法获得拟硬刺高原鳅线粒体DNA（mtDNA）细胞色素b（Cytb）基因的全序列。[结果]拟硬刺高原鳅3个种群共58个个体均获得Cytb基因的全长序列（1 140 bp）,共定义了20个单倍型,拟硬刺高原鳅宝库河种群遗传多样性低于黄河种群。[结论]拟硬刺高原鳅黄河种群和宝库河种群间存在显著的分化,建议在实践中将2种群分开管理和保护,以达到保护种群遗传多样性的目的。     

Species diversity of thrips (Thysanoptera) in selected avocado orchards from Mexico based on morphology and molecular data

Avocado is one of the most important crops in the world, and Mexico is the largest producer of this fruit. Several insect pests affect its production, and thrips are amongst the most important. A key step in the design of control methods is accurate species identification. Despite this, formal reports on species diversity of thrips in Mexico are very scarce. Morphological identification can sometimes be time-consuming and inconclusive. Therefore, we explored the species diversity of thrips in Mexican avocado orchards(Michoacan state) based on partial sequences of the mitochondrial gene cytochrome oxidase subunit Ⅰ(COⅠ). Forty-four specimens were analysed, which represented approximately 8% of all individuals collected from five localities distributed in three Municipalities. All specimens were analysed using the COⅠ marker, and specimens within the genera Frankliniella were also analysed using a marker within the D2 domain of the 28 S(28 SD2) nuclear ribosomal DNA. Molecular identifications were confirmed using morphological taxonomy. Overall, six genera were found(Neohydatothrips, Scirtothrips, Frankliniella, Arorathrips, Caliothrips and Leptothrips). All genera contained only one species, except Frankliniella, for which there were six species. Data from the two molecular markers suggest the existence of cryptic species within Mexican F. occidentalis populations.     

5种杨树种间及品种间同工酶的比较分析

[目的]为正确选择杂交亲本和杂种后代的鉴定提供依据。[方法]采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对杨属的5种杨树过氧化物酶同工酶、细胞色素氧化酶同工酶的酶谱进行了比较分析。[结果]黑杨组和青杨组杨树的过氧化物酶同工酶和细胞色素氧化酶同工酶的酶谱带数较多,白杨组较少。形态相似的不同种之间过氧化物酶同工酶酶谱比较接近,相似系数较高。处在同一组的两种杨树之间的细胞色素氧化酶同工酶的相似系数较大,处在不同组之间的相似系数较小。青杨组与黑杨组的关系较近,与白杨组的关系相对较远。[结论]杨属中存在广泛的遗传多样性,利用同工酶分析可以找出品种间的细微差异。     

夏棉田昆虫群落结构的研究

[目的]为夏棉田害虫治理对策提供科学依据。[方法]采用5点取样法调查取样范围内地面和植株上所有昆虫、螨类等种类和数量,计算昆虫群落的丰富度、优势度指数、均匀度指数和多样性指数,研究该夏棉田昆虫群落的结构。[结果]夏棉田中昆虫群落组成较为丰富,由10目30科43种昆虫组成,丰富度最大值为22,害虫类和天敌类昆虫的相对丰富度分别为80.22%和19.78%。昆虫群落的多样性指数最大值为2.095 1,均匀度最大值为0.738 5,群落的优势集中性指数最大为0.954 4。夏棉田害虫优势种是棉蚜和烟粉虱;天敌优势种为棉蚜蚜茧蜂。[结论]该研究对棉花害虫的可持续治理有重要的指导意义。     

拟鲶高原鳅黄河和大通河种群的遗传多样性和分化水平研究

[目的]探究拟鲶高原鳅（Triplophysa siluroides）黄河种群与大通河种群的遗传多样性和分化水平。[方法]采用聚合酶链式反应（PCR）和直接测序方法获得拟鲶高原鳅线粒体DNA（mtDNA）细胞色素b（Cytb）基因的全序列。[结果]拟鲶高原鳅2个种群共47个个体均获得Cytb基因的全长序列（1140 bp）,共定义了12个单倍型。拟鲶高原鳅黄河种群遗传多样性低于大通河种群。[结论]人类活动的影响和引入外来种可能引起了拟鲶高原鳅黄河种群遗传多样性的下降;同时,拟鲶高原鳅黄河种群和大通河种群间存在显著的分化,建议在实践中应将2种群分开管理和保护。     

mtDNA中C01基因序列在蒲螨属（Pyemotes）鉴定中的应用

本研究对蒲螨属9个种群15个个体的线粒体DNA上细胞色素氧化酶亚基I（COI）进行克隆测序。对获得的15个C01中453bp基因序列,利用PHYLIP与MEGA核酸分析软件,以与蒲螨相近类群的前气门亚目叶螨科泰安地区的二斑叶螨（Tetranychus urticae）作为外群,分别采用UPGMA及NJ法构建分子系统树。根据分子系统树及种群间进化分歧数建议：属于球腹蒲螨群的6个种群,可以分为3个独立的种。通过蒲螨的系统发育辅助形态学分类,解决了单纯依据形态学方法很难鉴定近缘种的难题。