大肠杆菌感染对家蝇幼虫ACP、POD活性的影响

观察家蝇(Musca domestica)三龄幼虫针刺感染大肠杆菌(Escherichia coli)后4、8、12、16 h血清和血细胞中酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)活性的变化。结果表明,大肠杆菌感染后各时间组家蝇三龄幼虫血清和血细胞中ACP活性显著高于对照组(P﹤0.01)。其中血清和血细胞中ACP活性分别在感染8 h、4 h达高峰,然后逐渐下降;大肠杆菌感染后各时间组家蝇三龄幼虫血清和血细胞中POD活性显著高于对照组(P﹤0.01)。其中血清和血细胞中POD活性分别在感染12 h、8 h达高峰,然后逐渐下降。大肠杆菌感染后家蝇三龄幼虫血清和血细胞中ACP、POD活性均增强,提示这两种酶在防御微生物感染过程中发挥了重要作用。     

大肠杆菌感染后家蝇幼虫血细胞中ACP和POD活性的变化

[目的]了解酸性磷酸酶（ACP）和过氧化物酶（POD）在家蝇（Musca domestica）幼虫血细胞中的定位以及大肠杆菌（Escherichia coli）对血细胞中ACP、POD活性的影响。[方法]采用酶细胞化学技术测定感染前后家蝇幼虫血细胞中ACP、POD活性,用显微摄影及定量图像法进行观察。[结果]感染后浆血胞和粒血胞中ACP、POD的活性均较正常组极显著增加（P〈0.01）。感染前后原血胞、珠血胞、类绛血胞中均未见ACP、POD的阳性反应物。[结论]感染后浆血胞和粒血胞中ACP、POD的活性增强,提示浆血胞和粒血胞是家蝇幼虫参与免疫反应的主要细胞类型,而原血胞、珠血胞及类绛血胞不参与细胞免疫反应。     

家蝇幼虫离体血细胞感染大肠杆菌后的形态变化

[目的]观察大肠杆菌感染对离体家蝇3龄幼虫血细胞形态的影响,了解参与家蝇幼虫细胞免疫反应的细胞类型。[方法]对家蝇3龄幼虫血细胞进行体外培养,并于培养后2、4、6、8 h对血细胞形态进行观察;离体家蝇3龄幼虫血细胞中加入大肠杆菌菌液,观察感染后不同时间血细胞形态的变化。[结果]家蝇三龄幼虫血细胞培养2 h后可区分血细胞的5种类型,培养6 h后血细胞部分贴壁;感染大肠杆菌后浆血胞发生空泡、细胞变形等变化,粒血胞周围见大量细菌聚集,未见原血胞、珠血胞、类绛血胞形态的变化。[结论]浆血胞和粒血胞是家蝇幼虫细胞免疫反应的主要参与者,而原血胞、珠血胞及类绛血胞不参与细胞免疫反应。     

家蝇幼虫离体血细胞感染大肠杆菌后的形态变化（摘要）（英文）

[目的]观察大肠杆菌感染对离体家蝇三龄幼虫血细胞形态的影响,了解参与家蝇幼虫细胞免疫反应的细胞类型。[方法]对家蝇三龄幼虫血细胞进行体外培养,并于培养后2、4、6、8 h对血细胞形态进行观察;离体家蝇三龄幼虫血细胞中加入大肠杆菌菌液,观察感染后不同时间血细胞形态的变化。[结果]家蝇三龄幼虫血细胞培养2 h后可区分血细胞的5种类型,即原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞,其中浆血胞又分为大核浆血胞和小核浆血胞2种;培养6 h细胞部分贴壁,少量浆血胞已生长成梭形,部分细胞伸出长短不等的伪足;培养8 h后培养血细胞发生黑化反应,液体发黑,不易观察;感染后2 h粒血胞周围见大量细菌聚集;感染后4 h浆血胞（主要是小核浆血胞）发生变形、碎裂、胞质普遍出现大小不等的空泡;感染后6 h浆血胞、粒血胞聚集成团将细菌包裹形成包囊;感染后8 h培养液完全黑化,已无法观察。,其中未见原血胞、珠血胞、类绛血胞形态的变化。[结论]浆血胞和粒血胞是家蝇幼虫细胞免疫反应的主要参与者,而原血胞、珠血胞及类绛血胞不参与细胞免疫反应。     

感染大肠杆菌后家蝇幼虫浆血胞和粒血胞的变化

为家蝇血细胞的功能、细胞免疫机制等的进一步研究提供基础依据,应用倒置显微镜结合姬氏染色观察家蝇3龄幼虫感染大肠杆菌后4h、8h、16h、24h血细胞总数及粒血胞和浆血胞的数量及形态变化。结果表明:家蝇3龄幼虫浆血胞和粒血胞是家蝇幼虫免疫反应的主要免疫细胞,感染后4h血淋巴细胞总数、浆血胞和粒血胞数增高,感染后8h达高峰,之后开始下降;感染后各组浆血胞和粒血胞聚集成堆,出现细胞变形、空泡和核内颗粒浓集。对照组家蝇幼虫浆血胞有细胞分裂,感染后各组可见粒血胞、浆血胞分裂,家蝇幼虫血细胞的自身分裂可能是其重要来源。     

家蝇幼虫血细胞的透射电镜观察

[目的]观察家蝇3龄幼虫血细胞的类型和超微结构。[方法]取孵化后第3天家蝇幼虫血淋巴,采用透射电镜观察家蝇3龄幼虫血细胞的形态和超微结构。[结果]家蝇3龄幼虫血细胞分为原血胞、浆血胞、珠血胞、粒血胞和类绛血胞5种类型,细胞核均匀透亮,核膜清楚,常染色质多,粒血胞内含吞噬体。[结论]透射电镜观察可将家蝇幼虫血细胞分为5种类型。     

不同培养基和储存条件对家蝇幼虫分泌物中溶菌酶含量的影响

[目的]了解不同培养基和储存条件对家蝇幼虫分泌物中溶菌酶含量的影响。[方法]分别以猪粪和鸡粪为培养基饲养家蝇幼虫,分别为猪粪处理组和鸡粪处理组,用麦麸饲养幼虫为正常对照组,麦麸中添加大肠杆菌菌液饲养幼虫为诱导对照组,分别提取各组2龄和3龄家蝇幼虫的分泌物,使用试剂盒检测分泌物中溶菌酶含量;分别提取正常对照组和诱导对照组中3龄幼虫的分泌物,测定在室温、4℃和-20℃下不同时间溶菌酶含量的变化。[结果]猪粪处理组、鸡粪处理组、正常对照组和诱导对照组中分离的3龄幼虫分泌物中溶菌酶的平均含量分别为2.462、2.782、1.019、2.117μg/m L,均显著高于2龄幼虫(P0.05)。猪粪处理组、鸡粪处理组和诱导对照组2龄和3龄幼虫分泌物的溶菌酶含量均高于正常对照组(P0.05)。在室温下,正常对照组和诱导对照组中溶菌酶的活性均仅能维持14 d左右;在-20℃下,溶菌酶的活性均可维持70 d左右;在4℃下,正常对照组和诱导对照组中溶菌酶活性的维持时间介于室温和-20℃之间,且2组间溶菌酶含量随时间的变化规律有一定差异。[结论]3龄蝇蛆分泌物中溶菌酶含量高于2龄蝇蛆;鸡粪培养基和猪粪培养基能显著增强家蝇2龄和3龄幼虫分泌物中溶菌酶含量;在-20℃储存条件下,家蝇溶菌酶可在较长时间内保持较高的活性。     

家蝇幼虫体内过氧化物酶过氧化氢酶抗坏血酸过氧化物酶与抗药性的关系——I.H_2O_2对酶活性的影响

采用室内饲养试验方法，研究了H2O2对家蝇幼虫体内过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA—POD)活性的影响。结果表明，外源H2O2能不同程度地影响以上3种酶的活性，但变化规律却有明显差异：CAT活性变化的基本趋势是随着龄期的增加而递增，处理组最大值分别是对照组的1．2、1．26、1．47倍，另外在1、2龄幼虫中CAT活性出现了对照比处理高的现象，而3龄幼虫则没有出现。经H2O2处理后的1、3龄幼虫体内的POD出现了2个活性峰，1龄幼虫被处理后，在第1个活性峰出现的时间内对照明显比处理高，且持续时间约为5h，然后酶活性骤然上升，活性高峰值是对照组的6．8倍；2龄幼虫只有1个活性峰，是对照组的3．68倍；3龄幼虫体内的POD也有2个活性峰出现，分别是对照组的4．9、2倍。AsA—POD活性在整个实验过程中没有出现对照高于处理的现象，1、2龄幼虫经过处理后出现了2个活性峰，分别是对照组的1．3、1．3倍和2．08、1．73倍，3龄幼虫则只有1个活性峰，是对照组的1．8倍。     

巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中适宜添加量研究

[目的]为家蝇幼虫血淋巴抗菌活性物质的分离、纯化提供依据。[方法]以大肠杆菌为指示菌,利用琼脂糖孔穴扩散法研究巯基乙醇对家蝇幼虫血淋巴抑菌活性的影响,确定巯基乙醇作为抗氧化剂在家蝇幼虫血淋巴中的适宜添加量。[结果]巯基乙醇能抑制大肠杆菌的生长,抑菌效果随其浓度的增加更为明显。当巯基乙醇体积浓度≤10-6时,其对大肠杆菌无抑菌效果,说明巯基乙醇的最大非抑菌体积浓度为10-6。体积浓度为10-6的巯基乙醇可有效保护浓度小于或等于1∶5的家蝇幼虫血淋巴悬液不被氧化,且其对大肠杆菌的抑菌效果不受影响。[结论]巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中的适宜加入量应根据试验中具体情况确定。     

高温诱导对家蚕血淋巴的影响

[目的]了解高温诱导对家蚕血细胞数量和血淋巴谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性的影响。[方法]用姬姆萨染色法对家蚕血细胞进行分类,38．0℃高温诱导四龄家蚕不同时间,分别用计数板计量家蚕血细胞数量变化并检测家蚕幼虫血淋巴中GSH—PX的活性变化。[结果]对照条件下培养的家蚕幼虫血细胞数量随幼虫体重增加有明显的增长,38．0℃高温诱导下的家蚕幼虫血细胞数量增长几乎为零,但血淋巴中GSH-PX活性显著升高。[结论]高温诱导抑制家蚕血细胞的分化和生长,证明昆虫GSH—PX是抵制高温伤害的重要保护酶系。     

灭多威对离体培养MDEC-07114细胞的抑制作用

[目的]利用自建家蝇胚胎细胞系进行灭多威毒性测定,为灭多威毒性机理研究提供依据。[方法]采用MTT法,检测灭多威对家蝇胚胎细胞的增殖抑制作用。[结果]2 mg/ml灭多威对家蝇胚胎细胞有抑制作用,抑制率随药物浓度增加而升高。[结论]以家蝇胚胎细胞系为工具细胞进行灭多威的毒性作用研究,具有可行性。     

苦杏仁精油对家蝇的触杀活性研究

[目的]研究含HCN和去HCN的苦杏仁精油对家蝇的触杀活性,为苦杏仁精油作为卫生害虫杀虫剂提供依据。[方法]采用“点滴法”测定含HCN和去HCN的苦杏仁精油对家蝇的触杀活性。[结果]2种苦杏仁精油对家蝇有很强的触杀活性,触杀活性随着处理时间的延长而增强,且去HCN的苦杏仁精油的杀虫活性高于含HCN的苦杏仁精油。[结论]苦杏仁精油对家蝇具有很强的触杀活性．可作为卫生害虫杀虫剂加以开发利用。     

一株碱性淀粉酶产生菌的分离及酶学特性分析

[目的]筛选出能用于生物印染的碱性淀粉酶产生菌。[方法]利用Horikoshi培养基从农田土壤中分离碱性淀粉酶产生菌,并采用DNS法和碘量法测定粗酶液中淀粉酶的酶学性质。[结果]共分离到9株碱性淀粉酶产生菌,对其中水解圈最大的菌株703进行16S rDNA序列同源性比对,结果显示其与嗜碱性芽孢杆菌Bacillus pseudofirmus OF4的16S rDNA序列一致性达100%。对该菌发酵粗酶的酶学性质研究表明该碱性淀粉酶的最适温度为50℃,最适pH为9.5,50℃下处理30 min后酶活残存74.7%。[结论]该研究筛选出了能用于生物印染的碱性淀粉酶产生菌,所产淀粉酶热稳定性较好,且具有强的碱耐受性,表明该酶具有应用于生物印染的潜在利用价值。     

枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹免疫指标、生长性能及养殖水质的影响

[目的]探讨枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹饲养效果的影响,为开展三疣梭子蟹高效健康养殖和促进益生菌在蟹类养殖领域的推广应用提供参考依据.[方法]以三疣梭子蟹为研究对象,分别设试验组(EG,添加2×1010 CFU/g枯草芽孢杆菌)和对照组(CK,不添加任何益生菌),试验周期28 d,期间定期检测生长指标和水质因子,试验结束时测定三疣梭子蟹血淋巴中的碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和溶菌酶(LZM)等相关酶活力.[结果]枯草芽孢杆菌可显著提高三疣梭子蟹血淋巴中的AKP活力(P<0.05,下同),随着养殖时间推移,AKP活力逐渐升高;而ACP和POD活力均呈先升高后降低的变化趋势,于第21 d时达最高值,分别为6.47 U/100 mL和45.93 U/mL,显著高于CK组;枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹血淋巴T-SOD活力无显著影响(P>0.05),但对LZM含量有明显影响,也于第21 d时达最高值(3.81μg/mL),此后LZM含量维持在相对较稳定的水平.枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹的生长促进作用不明显,但能显著提高其存活率,至试验结束时三疣梭子蟹存活率较CK组提高了17.78%(绝对值).枯草芽孢杆菌对三疣梭子蟹养殖水体氨氮(NH3-N)和亚硝态氮(NO2--N)有显著的降低作用,但在21 d后作用效果略有下降.[结论]枯草芽孢杆菌能显著影响三疣梭子蟹免疫相关酶活力,提高其存活率,且能有效降低养殖水体中的NH3-N和NO2--N含量,进而达到净化养殖水质的效果.     

流加培养方式对大肠杆菌XD-12发酵的影响研究

[目的]研究大肠杆菌流加培养方式,提高转氨酶供体——大肠杆菌XD-12的发酵浓度。[方法]通过研究碳源流加、氮源流加、pH控制流加对发酵的影响,获得了优化的培养条件。[结果]产转氨酶大肠杆菌的最佳培养条件为：温度37℃,搅拌转速500 r/m in,通气量1.5 L/m in,培养基初始pH为7.0,控制发酵过程pH为7.5,初始葡萄糖浓度5 g/L,初始氮源为5 g/L蛋白胨＋1.5 g/L牛肉膏,从葡萄糖浓度下降为2 g/L开始每隔2 h间歇流加120 g/L的糖,从8 h起每隔2 h间歇流加15 g/L蛋白胨＋4.5 g/L牛肉膏。在此条件下培养24 h,大肠杆菌的菌体干重浓度达9.66 g/L,较分批培养提高了104.7%。[结论]这对降低酶法制备L-苯丙氨酸的生产成本、提高生产效率、满足日益增长的市场需求具有重要的现实意义。