番鸭细小病毒与鸭圆环病毒二重PCR方法的建立

根据基因库中鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的基因序列,分别设计了两对特异性引物,通过对二重PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时鉴别检测鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的二重PCR方法。用该方法对同一样品中鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的模板进行PCR扩增,结果均得到了与实验设计相符的351bp（鸭圆环病毒）和474bp（番鸭细小病毒）的扩增条带,而对鸭Ⅰ型肝炎病毒、鹅细小病毒、鸭副黏病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性。敏感性测定结果表明：该二重PCR技术最低能检出100fg的鸭圆环病毒和番鸭细小病毒DNA模板。研究建立的鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的二重PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床上鸭圆环病毒和番鸭细小病毒感染的检测。     

鸭圆环病毒感染的临床症状

圆环病毒是近年来倍受兽医界关注的新发现畜禽病毒之一,文章对源自福建、浙江、江西、广东等省主要养鸭区的病(死)鸭样品进行实验室病原学鉴定和鸭圆环病毒感染检测,同时对鸭圆环病毒感染的主要临床症状作一阐述.     

鸭副黏病毒和鸭圆环病毒二重荧光定量PCR检测方法的建立

根据鸭副黏病毒(DPMV)和鸭圆环病毒(DuCV)保守基因序列,设计了2对针对鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的特异性引物和2条不同荧光基团标记的TaqMan探针,建立了鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的二重荧光定量PCR检测方法。该方法敏感性好,对鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的检测敏感性分别达到160和140个拷贝数;该方法特异性强,对鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭瘟病毒和H9型禽流感病毒等病原体的检测全为阴性;应用该方法对118份临床病料进行检测,结果检出鸭副黏病毒和鸭圆环病毒阳性感染率分别为0.85%和8.47%,无混合感染。本试验建立的二重荧光定量PCR具有快速、特异、敏感和重复性好等优点,适用于鸭副黏病毒和鸭圆环病毒的快速诊断和监测。     

鸭圆环病毒感染的检测

为明确鸭圆环病毒(DuCV)在鸭群中的感染情况,本研究通过PCR方法对2006～2009年间福建、浙江、江西、广东、山东等五省602例病、死鸭样品进行鸭圆环病毒检测.结果显示,15.28%(92/602)样品感染了鸭圆环病毒;40～60日龄的中鸭感染率明显高于其它日龄段;DuCV阳性样品中鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、鸭肝炎病毒1型和呼肠孤病毒感染率略高于DuCV阴性样品.     

山东省樱桃谷鸭群鸭圆环病毒及其混合感染的调查

2006～2007年间,在山东省70个樱桃谷鸭群采集742只鸭样品,对鸭圆环病毒的感染与流行情况调查发现,33.29%感染了鸭圆环病毒;3、4周龄的鸭较2周龄更易感;与DuCV阴性鸭比较,DuCV阳性鸭与鸭I型肝炎、鸭疫里默氏杆菌及大肠杆菌的混合感染率较高.有关樱桃谷鸭感染鸭圆环病毒的流行病学调查在国际上为首次报道.     

鸭圆环病毒巢式PCR检测方法的建立及应用

鸭圆环病毒病给养鸭业造成严重的经济损失,鉴于此,本研究根据GenBank登录的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)保守区基因组序列(登录号:NC_005053.1),设计合成内、外2对引物,通过PCR反应条件的优化,建立了检测DuCV的巢式PCR检测方法。该方法对鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭细小病毒、新城疫病毒的扩增结果均为阴性;第1轮扩增的灵敏度为10 pg,第2轮扩增的灵敏度为0.1 pg,通过巢式PCR,敏感性提高了100倍。本研究建立的巢式PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速的用于鸭圆环病毒的病原检测。     

鸭圆环病毒病研究进展

文章介绍了鸭圆环病毒病的病原学特征、病毒基因组结构、流行病学、致病性、临床症状、病理变化、诊断和综合防控措施的研究进展情况,并提出深入研究的方向,为鸭圆环病毒病的科学防控提供参考。     

鸭圆环病毒与鹅细小病毒混合感染病例的实验室诊断

为确诊贵州省三穗县某规模化养鸭场40日龄花边鸭出现发病死亡的原因,剖检4只病死鸭并采集心脏、肝脏、脾脏病料,根据发病情况、临床症状、病理变化、细菌分离培养和相关病毒核酸检测进行诊断。结果:(1)病鸭主要以神经症状为主,鸭群发病4 d死亡率为17.24%;典型病理变化为腹膜呈灰白色、心脏有坏死灶、肝脏不同程度受损。(2)病料在不同营养琼脂培养基上培养24 h后均未见菌落生长。(3)病料中检测出鸭圆环病毒、鹅细小病毒特异性核酸片段,未检出禽流感病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒特异性核酸片段。结论:综合诊断养鸭场病例为鸭圆环病毒与鹅细小病毒混合感染。     

鸭圆环病毒检测方法研究进展

鸭圆环病毒病是由鸭圆环病毒感染引起的一种免疫抑制性疾病。本文综述了鸭圆环病毒血清学和病原学检测方法的研究进展,主要包括间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、核酸探针技术、普通PCR、限制性片段长度多态性聚合酶链反应、套式PCR、多重PCR、荧光定量PCR和环介导等温扩增技术等,并对各种方法的优缺点进行了汇总分析,以期为该病的诊断与防控工作提供参考。     

和田地区规模化鸭场鸭圆环病毒感染情况调查

为明确和田地区鸭圆环病毒(DuCV)在鸭群中的感染情况,通过双重PCR技术对2021年和田地区5个规模化养殖场共100例病、死鸭样品进行鸭圆环病毒检测。对检测出的阳性样品随机挑选4份进行基因测序,并进行序列比较及遗传进化分析。检测结果显示,20%(20/100)样品感染了鸭圆环病毒,且优势流行毒株为DuCV-1;和田流行优势毒株与源自山东的毒株关系最近;DuCV阳性样品中鸭出血病毒、呼长孤病毒感染率略高于DuCV阴性样品。     

重组杆状病毒表达鸭圆环病毒Cap蛋白及活性检测

为了获得具有活性的鸭圆环病毒Cap蛋白,笔者通过PCR方法获得鸭圆环病毒I型完整Cap基因片段,将其克隆到昆虫杆状病毒基因组中,获得重组杆状病毒qBac-P-Cap,其病毒效价TCID_(50)可以达到9.25。重组杆状病毒可在悬浮Sf9细胞中表达具有活性的鸭圆环病毒Cap蛋白。研究表明蛋白表达最佳收获时间为120 h,纯化后蛋白表达量可以达到200μg/mL。这为进一步研究Cap蛋白功能和大规模制备鸭圆环疫苗奠定了基础。     

水禽免疫抑制疾病的危害及防制

水禽的免疫抑制疾病主要有鸭圆环病毒病和鹅圆环病毒病. 1 危害 1.1 鸭圆环病毒病的危害 鸭感染鸭圆环病毒后通常表现为生长发育迟缓,营养失调,背部羽毛凌乱、下垂,背部的皮肤组织中可见囊泡,周围组织有炎性渗出,法氏囊淋巴组织坏死,肝脏、胆囊充血.鸭圆环病毒能损伤淋巴组织,削弱细胞免疫和体液免疫功能,导致鸭群免疫力急剧下降.     

水禽圆环病毒巢式PCR检测方法的建立与应用

为了建立一种快速、灵敏、特异的水禽圆环病毒检测方法,试验根据GenBank中已公布的鸭圆环病毒(DuCV)和鹅圆环病毒(GoCV)的Rep基因序列设计3条特异性引物,对扩增条件进行优化,并检验优化后方法的特异性和灵敏性,最后用建立的水禽圆环病毒巢式PCR检测方法对40份疑似水禽圆环病毒感染的病料进行检测。结果表明：水禽圆环病毒巢式PCR方法可成功扩增出719 bp和543 bp的目的片段;优化后的一轮、二轮PCR中退火温度分别为50,56℃,引物加入量均为0.6μL,二轮PCR的模板稀释倍数为1×10³倍。优化后的方法对水禽圆环病毒的检测具有较好的特异性,与鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、H5N6亚型禽流感病毒(AIV)、H9N2 AIV、新城疫病毒(NDV)、鸭瘟病毒(DEV)、鹅细小病毒(GPV)及鹅星状病毒(GoAstV)均无交叉反应;该方法的最低检出限达4.04×10²拷贝/μL,分别是一轮、二轮PCR最低检出限的1×10⁴,1×10³     

分子标记株鸭圆环病毒感染性核酸的构建

以临床分离的鸭圆环病毒（duck circovirus）（GenBank登录号：GU168779）阳性病料为材料,根据GenBank中所登录的鸭圆环病毒基困序列设计引物并对设计的引物5′末端进行磷酸化处理,通过引物设计替换碱基,以突变形成EcoRⅠ酶切位点。利用PCR方法扩增鸭圆环病毒的基因,经胶回收后,用T4 DNA连接酶进行环化,以获得鸭圆环病毒具有感染性的核酸。在含有分子标记的两端设计引物,进行PCR扩增,对PCR产物进行胶回收,连接T载体后测序,对胶回收产物进行EcoRⅠ酶切鉴定,均证明在第587位成功插入EcoRⅠ酶切位点。结果表明,本试验已成功构建带有分子标记的鸭圆环病毒的感染性核酸,为进一步开展该病毒的分子调控机制、致病性和开发基因工程疫苗研究奠定基础。     

一起番鸭感染鸭瘟、新型番鸭细小病毒、鸭圆环病毒的诊断

对昆明郊县的番鸭病例诊断,根据发病情况、临床症状、剖检病变,结合实验室细菌分离培养、病原学检测、基因序列测定等实验方法,确定养殖场该批次番鸭为鸭瘟(DP)、新型番鸭细小病毒(N-MDPV)、鸭圆环病毒(DuCV)感染.     

1例雏鸭肝炎病毒和鸭圆环病毒混合感染的诊治

葫芦岛市某养鸭场樱桃谷肉鸭发生疑似雏鸭肝炎急性死亡病例。为了确诊病因,选取具有典型发病症状和病变的病鸭进行病原分离和鉴定,结果通过细菌的分离和攻毒试验排除了细菌感染为主要病因的可能;应用RT-PCR和PCR检测典型病变样品,结合扩增基因的测序,确诊发病鸭发生鸭肝炎病毒和鸭圆环病毒的混合感染。紧急应用鸭肝炎高免血清后发病鸭群死亡率得到有效控制,但存活鸭群中约有10%的雏鸭表现生长迟缓、消瘦,与鸭圆环病毒的感染症状相似。鸭圆环病毒是近年来新发现的一种病原,可导致感染鸭的免疫抑制,诱发混合感染,目前相关研究较少,值得关注。     

水禽新现疾病的发生概况和防制思路

介绍了目前水禽新出现疾病水禽流感、鸭病毒性肝炎、禽副粘病毒、呼肠孤病毒病、圆环病毒、鸭传染性浆膜炎的发生概况和病原学特点,提出了防制策略。     

鸭Ⅰ型肝炎病毒和番鸭细小病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立

根据基因库中鸭Ⅰ型肝炎病毒和番鸭细小病毒的基因序列,设计2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针.对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能够同时检测鸭Ⅰ型肝炎病毒和番鸭细小病毒的二重荧光定量RT-PCR方法.该方法敏感性好,对鸭Ⅰ型肝炎病毒和番鸭细小病毒的检测敏感性均达到200个模板拷贝数;该方法特异性强,对鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭副黏病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性.本研究建立的鸭Ⅰ型肝炎病毒和番鸭细小病毒的二重荧光定量RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床上鸭Ⅰ型肝炎病毒和番鸭细小病毒感染的检测.     

鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒二重RT-PCR方法的建立

为了研究一种可同时检测鸭坦布苏病毒与鸭圆环病毒的二重PCR方法,试验采用DNASTAR及Primer Premier 5.0软件,针对Gen Bank中坦布苏病毒(DTMUV)E基因和鸭圆环病毒(Du CV)REP基因的保守序列,设计合成了2对引物,通过优化反应体系条件及特异性、敏感性评价,建立了鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒的二重RT-PCR方法。结果表明:该方法对鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒的检测敏感性达到100 fg;使用该方法对新城疫病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合征病毒的检测结果全为阴性。说明建立的二重RT-PCR检测方法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于鸭坦布苏病毒和鸭圆环病毒感染的快速鉴别诊断。     

鸭圆环病毒PCR检测方法的建立与应用

鸭圆环病毒病是由鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)引起的一种重要免疫抑制病,影响着我国养鸭业的发展。为建立针对DuCV的PCR快速检测方法,对GenBank中登录的DuCV全基因组序列进行遗传进化分析,通过对两种基因型的DuCV全基因组序列进行比对,在共同保守区筛选出1对引物,建立了可以同时检测DuCV两种基因型的PCR快速检测方法,并对该方法的敏感性和特异性进行评价。结果显示,该方法具有良好的敏感性,检测下限达1.0 fg;特异性良好,对其他常见鸭病毒核酸检测均为阴性;利用该方法对20份临床发病鸭样品进行检测,发现有6份呈DuCV阳性,序列分析表明均属于DuCV-1。该PCR检测方法的建立为鸭圆环病毒病的快速诊断和防控提供了重要手段。