低剂量60Co-γ辐照刺激拟南芥植株生长的效应

以拟南芥为试材,以0、50、150Gy剂量~(60)Co-γ辐照拟南芥种子,研究其对拟南芥植株生长发育的影响。结果表明:与对照相比,50Gy辐照处理显著增加了拟南芥植株高度、莲座叶长度、角果长度、种子数量以及叶片光合色素含量;150Gy辐照拟南芥的各项生长和生理指标显著降低,表明高剂量辐照处理抑制了拟南芥植株的生长。说明低剂量的~(60)Co-γ辐照显著促进拟南芥植株的营养生长和生殖生长。     

拟南芥中异源过表达黄瓜CsTRY基因对表皮毛的抑制作用

 将拟南芥表皮毛调控基因TRIPTYCHON（TRY）、CAPRICE（CPC）以及ENHANCER OF TRY AND CPC1（ETC1）的序列信息,在黄瓜基因组数据库中进行BLAST比对后发现,它们都对应于黄瓜中的同一个基因CsTRY。异源过量表达黄瓜CsTRY导致拟南芥叶片表皮毛大量减少,且使拟南芥中表皮毛起始基因GLABRA2（GL2）的表达量显著下降,表明黄瓜CsTRY基因与拟南芥TRY基因可能具有功能上的保守性,通过阻碍GL1-GL3/EGL3-TTG1三聚体复合物的形成来降低GL2的表达,从而抑制表皮毛的形成。     

农杆菌蘸花法侵染拟南芥的研究

为探索拟南芥转化法的广泛性,使其能转化其它植物,研究了转化试验中的一些参数.结果表明:农杆菌渗透转化拟南芥成功的3个关键因素是:适当的植株发育时期,即花蕾期;5%的蔗糖;0.05%的Silwet L-77.该种方法可适用于多种生态型的拟南芥植物转化,便于快速获得带有T-DNA标记的植株,并为植物的转基因技术提供一定的参考依据.     

石榴花发育相关基因PgAGL11的克隆及功能验证

以‘突尼斯软籽’石榴为试材,对雌蕊败育的原因及关键时期、PgAGL11序列特征及功能进行研究。石蜡切片观察结果表明,雌蕊败育的原因为胚珠内珠被原基形成后停止发育,胚珠败育的关键时期为花蕾纵径8.1~15.0 mm时;采用TA克隆得到PgAGL11全长CDS序列696 bp,系统进化分析发现其与拟南芥的AGL11序列相似性最高;实时荧光定量PCR结果显示,PgAGL11在雌蕊中表达量显著高于其他花器官,且在胚珠败育关键时期(花蕾纵径8.1~15.0 mm),可育花雌蕊中表达量极显著高于败育花雌蕊;构建PgAGL11过量表达载体,利用农杆菌介导法侵染野生型拟南芥,转基因拟南芥花表现为雄蕊变短,花瓣变小,花柱变长,柱头表面乳突状物质变长。本研究确定了石榴雌蕊败育的关键原因及时期,并初步证明了PgAGL11可能在石榴雌蕊败育过程中发挥重要作用。     

AtGDPD-Like 6和AtGDPD-Like 7基因启动子表达特性及AtGDPD-Like 6蛋白定位

以野生型(Col-0)拟南芥为试材,采用RT-PCR法,研究AtGDPDL6和AtGDPDL7基因组织表达特性。以ProAtGDPDL6::GUS和ProAtGDPDL7::GUS转基因拟南芥为试材,采用GUS组织化学染色法,研究AtGDPDL6和AtGDPDL7基因启动子表达模式,并以Pro35S::AtGDPDL6-GFP转基因拟南芥为试材,采用激光共聚焦显微镜进行荧光观察,研究AtGDPDL6蛋白的细胞内定位。结果表明:AtGDPDL6基因在拟南芥花组织中特异表达;AtGDPDL7基因在花和角果中特异表达。AtGDPDL6和AtGDPDL7基因特异表达在拟南芥成熟的花粉囊和柱头中。AtGDPDL6蛋白定位于细胞膜和细胞壁区域。     

拟南芥NCED4基因的克隆及初步功能鉴定

以拟南芥为试材,采用PCR及DNA重组技术,从野生型拟南芥中克隆出NCED4基因,并构建植物表达载体pBI-NCED4,最终获得具有卡那霉素抗性的转基因拟南芥植株,研究NCED4基因超表达对植物体的影响,并对其中4个再生植株进行PCR和荧光定量RT-PCR分析。结果表明:目的基因转入拟南芥基因组中,并在转基因拟南芥中成功过量表达;NCED4基因受外源激素的影响较为敏感,其作用可能与激素的调控有关。     

拟南芥异源表达紫斑牡丹PrLPAAT1对种子脂肪酸含量的影响

克隆得到的紫斑牡丹（Paeonia rockii）脂肪酸代谢相关基因PrLPAAT1,构建2S2::PrLPAAT1过表达载体并利用花序浸染法转化拟南芥,通过潮霉素抗性筛选以及PCR检测得到3个T3代纯合转基因拟南芥株系L1OX-11、L1OX-17和L1OX-19。半定量RT-PCR证明PrLPAAT1在3个转基因拟南芥株系中均显著表达。与野生型相比,过表达PrLPAAT1拟南芥的单株种子产量未产生明显变化。GC–MS测定结果表明,L1OX-11、L1OX-17和L1OX-19株系的总脂肪酸含量较野生型分别为无显著差异和提高了5.3%和5.2%;油酸（C18:1）含量分别提高了19.9%、24.6%和19.4%。实时荧光定量PCR分析表明,过表达PrLPAAT1拟南芥中油脂合成相关基因AtACP1、AtDGAT1和AtSUS3的表达水平均显著增加。由此推测PrLPAAT1在牡丹种子的脂肪酸合成过程中发挥重要的作用。     

转匍匐翦股颖AsHSP26.8a拟南芥株系的光合作用研究

通过测定转匍匐翦股颖小热激蛋白基因AsHSP26.8a拟南芥株系的根长、植株质量、蒸腾速率、气孔导度、净光合速率以及PSⅡ光能转化效率,探讨AsHSP26.8a对拟南芥光合作用的影响,并进一步通过qRT-PCR分析了拟南芥内源光合相关基因(rbcL、psaA、psbA、psaE、clpP、rpoB、rpo A、accD)的表达情况来揭示AsHSP26.8a参与光合作用的调控途径。结果表明:与野生型相比,转基因拟南芥根长显著缩短,鲜质量和干质量下降;光合速率、蒸腾速率、气孔导度和PSⅡ光能转化效率均有所下降,光合相关基因的表达也有所下调。由此认为AsHSP26.8a抑制了转基因拟南芥光合相关基因的表达,使转基因拟南芥的光合作用减弱,从而进一步抑制了转基因拟南芥根系生长和干物质的积累。     

黄瓜CsFT 基因的克隆及其功能分析

 利用同源克隆的方法得到黄瓜的FT 同源基因CsFT，通过表达分析、进化树分析以及遗传 转化拟南芥等方法初步验证了CsFT 在黄瓜花发育过程中的作用。不同于之前的研究结果，CsFT 主要在 雄花与雌花中表达，而在叶中基本不表达。异源过表达CsFT 导致拟南芥提前开花，并且茎顶部出现顶端 花，说明黄瓜的CsFT 基因与拟南芥AtFT 基因在开花调控上存在保守性。     

花椰菜中器官早期发育调控相关的miRNA(Bra-miR07)的克隆及功能研究

在前期通过高通量小RNA测序获得若干在花椰菜器官早期发育过程中呈现差异表达的未知功能miRNA基础上,重点对其中1个在花椰菜下胚轴和子叶中表现为显著差异表达的miRNA(命名为Bra-miR07)进行克隆鉴定及功能分析。研究表明,Bra-miR07前体序列全长为270 bp,可形成稳定的二级发夹结构。Bra-miR07在花椰菜子叶中呈现显著高表达。进一步构建了Bra-miR07的过表达载体并采用浸花法转化拟南芥,获得Bra-miR07过表达的转基因拟南芥株系。表型分析显示,Bra-miR07过表达可显著影响拟南芥植株生长。与野生型相比,过表达Bra-miR07株系表现为生长缓慢,植株矮小,育性降低等发育受阻特征。因此,上述结果预示着Bra-miR07可能也在花椰菜器官发育过程中发挥重要作用。