异育银鲫咽碘泡虫病组织病理与病理生理

咽碘泡虫(Myxobolus pharynae)病是近几年发生在江苏省盐城地区的大丰、射阳和滨海以及周边地区,引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)大批死亡的一种黏孢子虫病,咽碘泡虫只特异地寄生在异育银鲫的咽部组织内,为了阐明该病对鱼体的损伤作用,我们对不同患病时期的异育银鲫的组织病理和疾病中期的病理生理进行研究。组织病理结果表明:疾病初期病鱼咽部略有轻度充血,咽碘泡虫以营养体阶段寄生在咽部黏膜下层的组织中,并开始形成由成纤维细胞包裹的小孢囊,其他组织器官无病理损伤现象;疾病中期由于小孢囊数量增加和囊内营养体分裂增殖并逐步发育为成熟孢子后体积增大,构成的大孢囊使咽部显著膨大,包裹小孢囊的结缔组织囊壁充血,逐步萎缩而变薄,成纤维细胞核固缩坏死,咽部黏膜层中的上皮细胞淡染、核固缩坏死,味蕾失去应有的结构,鳃组织细胞在鳃小片间严重增生,肾部分区域出现细胞坏死,肾小球肿胀,肾小管上皮细胞出现滴状玻璃样变性,肝、脾、肠和前肾无病理变化现象;疾病后期小孢囊囊壁、黏膜下层和黏膜层组织细胞进一步坏死崩解,出现孔洞,成熟孢子、坏死组织和血液一并流出孔洞,病鱼肠腔中有许多来自坏死的咽部组织细胞和成熟孢子,其他组织器官病理变化与疾病中期相似。疾病中期病鱼的病理生理分析结果表明:病鱼红细胞数量和大小、血红蛋白浓度、血栓细胞数量、血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶都分别极显著低于健康鱼(P0.01),出现贫血;病鱼红细胞脆性、白细胞数、嗜中性粒细胞数、单核细胞数、总胆红素、肌酐、尿素和乳酸脱氢酶分别都极显著高于健康鱼(P0.01);淋巴细胞数和嗜酸性粒细胞数与健康鱼相比,无显著差异(P0.05)。由于咽碘泡虫的寄生部位鱼咽部严重膨大堵塞口咽腔并引发鳃组织增生、肾的损伤和贫血等变化,进一步发展为咽部组织坏死破裂出现孔洞流血,导致病鱼无法摄食和呼吸困难等功能障碍而死亡。     

鲫圆形碘泡虫病组织病理学研究

采用常规石蜡切片、苏木精-伊红染色的方法,研究了鲫（ Carassius auratus auratus ）自然感染圆形碘泡虫（Myxobolus rotundus）后的组织病理变化。结果表明,感染圆形碘泡虫后,在鲫的头部、鳃和体表能形成大小不一的圆形或椭圆形乳白色孢囊,其孢囊为典型的3层结构：外层的结缔组织、双层质膜的外质以及各个发育阶段的孢子或营养体组成的内质。病理切片可见鱼体各组织器官均有不同程度的病变,主要表现为鳃丝粘连、肿胀增生;肝脏发生以肝血窦为中心的透明、空泡变性;肾小管内皮脱落,肾小球萎缩;肠道粘膜层脱落,肌层细胞肿胀病变;脾脏的含铁血黄素增多等异常现象。     

水库鲢鱼小鞘指环虫病鳃组织病理及其防治

在１９９１－１９９３年，笔者在清原县金家水库和后楼水库用敌敌畏进行了鲢小鞘指环虫病的防治试验，并对大水面防治鱼病的施药方法作了初步探索。试验结果表明，０．０８－０．２０ｐｐｍ的敌敌畏均能有效杀灭此虫。组织病理研究发现，病鱼鳃瓣缺损，粘液增多，鳃血管扩张充血，出血，呼吸上皮肿胀。上皮细胞增生，使鳃小片融合，鳃丝呈棍棒状；相邻几条鳃丝发生融合，形成一片上皮细胞板。病状严重时，鳃小片坏死、解体。     

荧光定量PCR检测洪湖碘泡虫寄生异育银鲫组织器官的偏好

为了阐明洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)在隐性感染异育银鲫(Carassius auratus gibelio, Bloch)不同组织器官中的分布情况, 本研究采集曾发生过喉孢子虫病养殖池塘的 2 龄健康异育银鲫的鳃(丝)、伪鳃、中肾、头肾、 肌肉、脾脏、肝脏、卵巢、血液等 9 个组织器官, 采用荧光定量 PCR 检测分析了不同组织器官的感染率和相对感染强度。结果显示, 所采集的 30 尾异育银鲫都没有明显临床症状, 但鱼体的洪湖碘泡虫感染率为 100%, 均为隐性感染个体; 各组织器官间的感染率存在较大差异, 除肌肉未检出外, 感染率从高到低依次为: 伪鳃(100.0%)、卵巢 (83.3%)、鳃(73.3%)、脾脏(70.0%)、中肾(36.7%)、头肾(23.3%)、肝脏(10.0%)、血液(6.7%)、肌肉(0)。不同组织器官的相对感染强度由高到低依次为: 伪鳃(14.4349±70.0529)、卵巢(0.9556±1.5627)、脾脏(0.3644±0.7854)、鳃 (0.3339±0.2682)、头肾(0.2722±0.3761)、中肾(0.0379±0.1055)、肝脏(0.0019±0.0022)、血液(0.0012±0.0011)。研究表明, 洪湖碘泡虫可系统感染异育银鲫多个组织器官, 其中, 伪鳃感染率和感染强度最高, 可以作为该病早期检测和疫病监测的首选组织器官。     

中国对虾细菌性黑鳃病的组织病理观察

报道中国对虾细菌性黑鳃病的症状、鳃组织的显微、超显微结构的病理变化。病虾鳃区呈，黑色条斑状、活动力差、厌食、死亡率较高。不镜下观察，鳃组织严重坏死、断裂，鳃丝充血，为多量血淋巴细胞浸润，黑色素在多沉积在鳃丝末端。电锐观察到鳃组织的甲壳层和表皮层中的许多没切面的杆状细菌，呈多形态，大小约为（０．２－０．４）×（１．２－１．８微米，单个，偶而连成双，无芽孢，菌体周围细胞结构完全瓦解，组织被腐蚀或许多圆     

三棱碘泡虫 (粘体动物门：碘泡科) 重描述及其系统发育关系分析

为有效鉴定三棱碘泡虫的有效性,补充其生物学特征,实验利用现代粘孢子虫整合分类学方法,包括形态特征、寄生特性(宿主特征和寄生部位)及分子特征,对其进行重新描述,证实其分类有效性,探讨其系统发育关系。结果显示,三棱碘泡虫专性寄生于草鱼鳃丝间,未在其他器官(肝脏、肾脏、肠道等)检获孢子。包囊呈乳白色,长椭圆形,长(2.4±0.3)(2.1～2.7) mm,宽(0.8±0.1)(0.6～0.9) mm。成熟孢子壳面观呈卵圆形,孢子后端未见"V"形褶皱,孢子外包裹有一层透明的圆形黏液膜,缝面观呈纺锤形,孢子缝面可见三条平行而突出的脊线;孢质均匀,孢子后端具有一个大嗜碘泡;成熟孢子长(10.3±0.4)(9.4～11.0)μm,宽(9.5±0.5)(8.7～10.9)μm,厚(7.4±0.5)(6.4～8.0)μm;两极囊等大,梨形,极丝7～8圈;组织病理显示,病灶鳃组织未出现严重炎症反应。BLAST比对发现,三棱碘泡虫与隐杆碘泡虫小核糖体RNA序列相似性最高(89.58%),但远低于种内序列相似性。分子系统发育分析结果显示,三棱碘泡虫先与寄生于鲤科鱼类的隐杆碘泡虫形成姊妹关系,再与寄生于胭脂鱼科鱼类鳃的诺布尔碘泡虫、微小碘泡虫及毕斯塔斯碘泡虫形成独立的鳃寄生碘泡虫分枝,表明宿主亲缘关系与组织趋向性在鱼类组织寄生碘泡科粘孢子虫系统演化历程中扮演重要作用。本研究补充了三棱碘泡虫包囊形态结构、组织趋向性及分子数据,证实了其分类有效性。     

洪湖碘泡虫在发病和隐性感染异育银鲫组织器官中的分布

为探究洪湖碘泡虫在被感染异育银鲫不同组织器官中的分布及不同感染阶段的差异,实验采用显微镜镜检、PCR检测及组织病理切片相结合手段,对发病及隐性感染异育银鲫的肌肉、伪鳃、鳃、头肾等11个组织器官进行了广泛检测分析。显微镜镜检发现,在发病鱼的咽、伪鳃和鳃能观察到孢囊或成熟孢子;在隐性感染异育银鲫的咽上壁与副蝶骨间结缔组织、伪鳃及其血管周边观察到大量棕黄色结节,并含有洪湖碘泡虫的成熟孢子。不同组织器官DNA样品PCR检测发现,在发病鱼除肌肉外的其他10个组织器官中均检测到洪湖碘泡虫存在,其中伪鳃检出率最高(100%);隐性感染异育银鲫在咽上壁组织、伪鳃、头肾、体肾、脾脏及卵巢中检出洪湖碘泡虫,伪鳃检出率也为最高(26.7%)。组织病理切片显示,发病鱼咽上壁内分布着大量蜂巢状孢囊及成熟孢子,伪鳃被严重侵占和破坏;残存伪鳃鳃丝周边能观察到增殖和发育阶段的孢子生成细胞。综上所述,本研究首次报道了洪湖碘泡虫在发病和隐性感染异育银鲫不同组织器官中的分布差异,发现伪鳃可能是洪湖碘泡虫寄生和发育成熟的重要器官。结果为洪湖碘泡虫病的准确检验检疫和进一步开展致病机制研究奠定基础。     

建鲤椭圆碘泡虫病一例

关于粘孢子虫病对鱼类的危害，已有很多文献记载。但新近培育出的建鲤感染椭圆碘泡虫的病例，目前尚未见报道。笔者于1993年9月在兰州市青城联营渔场进行鱼病调查中，首次发现一例该病，现报道如下。     

异育银鲫鲫碘泡虫病初报

2007年12月10日,笔者在大丰一鱼塘发现一例异育银鲫成鱼鲫碘泡虫病,现将观察到的症状报告如下:患病的异育银鲫头后背部肿胀,呈瘤状突起,手摸     

中国鲤育种的主要方法、遗传解析及展望

为探究鲤不同体色个体肌肉品质的差异,本研究以福瑞鲤2号青灰色个体 (BG)和全红个体 (WR)为对象,通过检测其肌肉色泽、氨基酸、脂肪酸和质构指标,评价这2种体色福瑞鲤2号肌肉品质的差异。结果显示,BG的b^*值显著高于WR;出肉率以及肌肉的水分、粗脂肪、粗蛋白和灰分无显著差异;不同体色福瑞鲤2号的肌肉中均能检测出17种氨基酸,其中人体必需氨基酸7种,非必需氨基酸10种。甘氨酸 (Gly)、脯氨酸 (Pro)、组氨酸 (His)和半胱氨酸 (Cys)在2组间差异不显著,其他氨基酸在2组间存在显著或极显著差异,两种体色福瑞鲤2号之间ΣEAA/ΣTAA没有显著差异;BG肉豆蔻酸 (C14:0)显著高于WR,BG的饱和脂肪酸含量较WR稍高,WR的单不饱和脂肪酸含量较BG稍高,二者多不饱和脂肪酸含量相近;WR的弹性和咀嚼性显著高于BG。研究表明,体色对福瑞鲤2号的肌肉品质有影响。本研究为鱼类肉质性状改良提供基础数据和参照依据。

     

小龙虾黑鳃上白流苏真菌的中国新记录属和新记录种

在对小龙虾黑鳃病进行分离培养过程中,得到一株白色菌落的真菌菌株,通过形态学观察和DNA测序,确定该菌株为绿色白流苏菌;该真菌属于中国的新纪录属和新记录种,小龙虾是它的新宿主.     

凝结芽孢杆菌对镉暴露下鲤肝脏镉含量、抗氧化能力及炎症反应的影响

为了探究凝结芽孢杆菌SCC-19对镉暴露下鲤肝脏镉含量、抗氧化能力以及炎症反应的影响,实验选取平均体重为(34.00±1.16) g的鲤450尾,随机分为5组(每组3个重复,每个重复30尾),即对照组、0.5 mg/L Cd²⁺组、0.5 mg/L Cd²⁺+10⁷ CFU/g凝结芽孢杆菌组,0.5 mg/L Cd²⁺+10⁸ CFU/g凝结芽孢杆菌组以及0.5 mg/L Cd²⁺+10⁹ CFU/g凝结芽孢杆菌组(分别记为DK、D、DA、DB和DC),养殖8周。结果显示,与镉暴露组相比,凝结芽孢杆菌SCC-19能够有效降低鲤肝脏中镉含量,显著提高金属硫蛋白(MT)的水平,降低血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。此外,凝结芽孢杆菌组鲤肝脏总抗氧化能力(TAOC)、抗超氧阴离子自由基能力(ASA)和抑制羟自由基能力(AHA)水平显著高于镉暴露组,而活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H₂O...     

吉陶单极虫地理分布新记录及不同地理株系间的比较

为获知吉陶单极虫不同地理株系间的遗传变异及系统发育关系,实验对吉陶单极虫中国重庆、中国湖北、中国四川、日本盐田、韩国全北、韩国首尔等地理株系进行形态学比较及基于18S rDNA序列的变异位点、相似度、遗传距离、基因型的比较和系统发育分析.结果 发现,吉陶单极虫各株系孢子形态特征基本一致;18S rDNA序列相似度为99...     

嗜水气单胞菌刺激下鲤血清质子转运载体15a2(Slc15a2)的表达分析

为解析鲤质子转运载体15a2 (Slc15a2)在嗜水气单胞菌侵染过程中对机体免疫应答机制的影响,实验通过制备鼠源Slc15a2-1和Slc15a2-2多克隆抗体,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测嗜水气单胞菌感染后鲤血清中Slc15a2-1和Slc15a2-2蛋白表达变化。结果显示,(1)感染后2个拷贝的最高蛋白表达水平与空白对照组相比,分别增加了4.81和2.48倍;与Slc15a2-1相比Slc15a2-2的表达量从0～48 h一直处于较高表达水平。(2)从整体来看,Slc15a2的2个拷贝具有相似的表达趋势,均为先升高后降低、再升高再降低;但Slc15a2-1在3 h达到第1个表达高峰,而Slc15a2-2则在6 h达到第1个表达高峰。(3) 6～24 h的4个时期中,Slc15a2-1和Slc15a2-2蛋白表达呈现互补的表达趋势,即在同一时期一个拷贝的表达量显著下降,另一个拷贝的表达量显著升高,但总体维持较高表达水平。结果表明,本实验制备的鼠源Slc15a2-1和Slc15a2-2多克隆抗体具有较高的亲和力和特异性,当鲤受到嗜水气单胞菌侵染后,2个拷贝整体具有相似的...     

甘露寡糖对罗非鱼肠道菌群的影响

为探究巴氏灭活的阿克曼菌(Akk)调控鲤糖代谢的分子机制,实验通过不同糖水平 (20%、30%、40%、50%葡萄糖)探究体重 (10.5±1.0) g 的鲤4周和8周时胰高血糖素样肽-1 (glucagon-like peptide-1,GLP-1)分泌及阿克曼菌定植的时空变化;在不同糖水平实验基础上,设置含有40%葡萄糖的3个不同Akk浓度 (10⁸、10⁹和10¹⁰ CFU/g) P-Akk组,探究添加P-Akk 4周后对鲤 (16.38±0.39 g)糖代谢及GLP-1的调控;通过P-Akk孵育鲤原代肝脏、肠细胞实验,共同探究不同糖水平下鲤肠道Akk、GLP-1对糖代谢的调控机制。结果显示, (1)随着饲料中葡萄糖含量的升高,鲤血清中GLP-1b含量显著降低,4周时高糖组鲤肠道GLP-1a、GLP-1b以及肠道内容物中Akk丰度均显著降低,但8周时无显著性差异。 (2) P-Akk处理后,鲤血清中葡萄糖、GLP-1含量显著减少;中肠绒毛高度、肌层厚度显著增加,GLP-1含量减少,短链脂肪酸含量增加,muc2 mRNA表达水平升高;此外,P-Akk上调肝脏中ampk、pi3k、akt及糖酵解基因gk、pfk mRNA表达量,下调糖异生基因pepck mRNA表达量。 (3)原代肝脏、肠细胞孵育结果显示,P-Akk处理肠细胞后GLP-1含量显著减少,而gpr40的mRNA表达量升高;此外肝脏细胞中糖酵解基因gk、pfk mRNA表达量显著升高。综上,外源添加P-Akk可以缓解高糖饲料引起的血糖升高,维持葡萄糖稳态。该研究结果可为Akk作为益生菌在水产饲料中的应用提供理论基础。

     

福瑞鲤2号不同生长速率个体肌肉组织转录组分析

鱼类通过选育获得优良生长性状的遗传分子机制 目前尚不清楚.实验分析比较了 2种不同生长速率福瑞鲤2号肌肉组织的转录组文库.组装后共获得3 92 23 8条测序序列(contigs).其中可比对上斑马鱼、弓斑东方鲀、青鳉、三刺鱼、尼罗罗非鱼和松浦镜鲤的蛋白序列的比例为56.01％～77.71％.2种不同生长速率福瑞鲤2号...     

鲤胰蛋白酶原基因的电子克隆及生物信息学分析

为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的生理功能和作用机制,利用生物信息学的方法,成功获得了鲤3种胰凝乳蛋白酶原cDNA序列(ccTRP1、ccTRP2和ccTRP3)并对其进行了序列分析。结果表明,三者均含有一个长度为729bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码由242个氨基酸组成的胰蛋白酶原,其中包括15个氨基酸组成的信号肽和5个氨基酸(LDDDK)组成的激活肽。总平均亲水性GRAVY(grand average of hydropathicity)分析表明,三者均是亲水性蛋白。氨基酸比对结果显示,三者具备胰蛋白酶原的保守结构特征,如含有催化三联体氨基酸(His-57、Asp-102和Ser-195),12个半胱氨酸,位于底物结合口袋底部Asp-189和口袋开口处的Gly-216、Gly-226等。同时,鲤3种胰蛋白酶之间具有90%以上的同源性。进化树结果显示,鲤3种胰蛋白酶均属于Group I(阴离子型胰蛋白酶),且三者的进化距离不一致。     

鲤脂蛋白脂肪酶基因特性、表达分布、重组蛋白获得及酶活性比较

为研究鲤脂蛋白脂肪酶(Cc LPLs)的基因特征、时空表达分布及酶活性,实验利用基因组同源搜索获取鲤CcLPLs同源基因并分析其序列特征;通过荧光定量PCR(qPCR)方法对CcLPLs在不同组织的表达进行分析;采用原核表达系统获取CcLPLs重组蛋白,并使用对硝基苯酚法测定各重组蛋白的酶活性。结果显示,鲤基因组中挖掘到5个CcLPLs基因(CcLPLA1a、CcLPLA1b、CcLPLA2a、CcLPLA2b*和CcLPLBa),经验证,CcLPLA2b*是假基因,共线性分析显示,鱼类特有基因组加倍过程中出现基因丢失的现象,而鲤特有的基因组加倍致使鲤存在5个CcLPLs。CcLPLA1a和CcLPLA1b核苷酸序列和氨基酸序列相同,同源性分析显示,CcLPLBa与CcLPLA1s的同源性为64%,与CcLPLA2a同源性为50.8%。qPCR结果显示,CcLPLs的表达量在肝脏、心脏、脂肪、肌肉、脑、肠道和脾脏中依次降低,在各个组织中,各基因表达量从高到底依次为CcLPLA1s、CcLPLA2a和CcLPLBa。鲤正常投喂、饥饿及再投喂状态下CcLPLA1s和CcLPLA2a在肝脏、...