三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法。[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒。[结果]试验表明,该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34μg/kg,IC50(50%抑制浓度)为4.8μg/L,回收率为60.5%~79.7%,试剂盒的标准曲线范围为0~80μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10%,三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1%,4℃下能够保存12个月,稳定性较好。[结论]研究可为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考。     

三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

[目的]探讨系统地检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的方法.[方法]通过三甲氧苄氨嘧啶与马来酸酐反应,得到三甲氧苄氨嘧啶半抗原,再通过免疫动物得到抗三甲氧苄氨嘧啶的单克隆抗体,并将其应用于能够检测水质中三甲氧苄氨嘧啶残留量的ELISA试剂盒.[结果]该试剂盒对水质中三甲氧苄氨嘧啶的检测限为2.34 μg/kg,IC50(50％抑制浓度)为4.8 μg/L,回收率为60.5％～79.7％,试剂盒的标准曲线范围为0～80 μg/L,批内、批间的相对标准偏差均小于10％.三甲氧苄氨嘧啶单克隆抗体与二甲氧苄氨嘧啶的交叉反应率小于1％.4℃下能够保存12个月,稳定性较好.[结论]研究结果为监管三甲氧苄氨嘧啶的滥用提供参考依据.     

磺胺嘧啶残留阻断ELISA试剂盒的研制及鉴定

基于1株分泌抗磺胺嘧啶(sulfadiazine,SD)高亲和力的SD单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),应用ELISA试验原理研制SD残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SD-Kit),并对其特性进行测定。SD-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9914,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.02～12.92μg/L,灵敏度为0.08μg/L,半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L,检测限为0.08μg/L;鲜奶样和猪尿样的平均添加回收率分别为90.8%、95.8%,平均批内和批间变异系数均低于10%;基质对SD-Kit的检测结果影响不大;SD-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药几乎没有反应性;试剂盒在4℃可保存6个月。     

高效液相色谱同时检测鱼肉组织中4种磺胺与甲氧苄啶的残留量

建立了同时测定鱼肉组织中4种磺胺(磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑)和甲氧苄啶残留量的高效液相色谱法.鱼肉组织用乙腈提取后经乙腈饱和的正己烷去脂,过HLB柱净化,甲醇洗脱,减压浓缩蒸干,流动相(乙腈+1%乙酸,体积比为10∶90)定容,用带DAD检测器的高效液相色谱仪在272 nm波长下检测,流动相采用梯度洗脱.结果显示:4种磺胺和甲氧苄啶分别在0025～10 μg·mL-1和005～20 μg·mL-1范围内呈良好线性关系,相关系数(r)为0999;4种磺胺和甲氧苄啶分别在002、010和020 mg·kg-1和004、020和040mg·kg-1 3个浓度水平下的添加回收率为752%～979%,变异系数为28%～100%(n＝6);根据3倍信噪比计算,磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑和甲氧苄啶的最低检测限分别为0006、0007、0008、0008和0019mg·kg-1.     

不同温度下复方磺胺嘧啶在罗非鱼体内的药代动力学

【目的】探讨不同温度条件下复方磺胺嘧啶在罗非鱼Oreochromis niloticus血液中的药代动力学(简称药动学)特点及其变化.【方法】以罗非鱼为研究对象,在不同水温(18、23、28和33℃)饲养条件下以复方磺胺嘧啶[m(磺胺嘧啶)∶m(甲氧苄啶)=5∶1]按120 mg/kg的剂量单次饲喂给药,分别于给药后0.5、1、2、4、6、8、10、24、48、72 h采集血液样品,使用HPLC方法检测罗非鱼血浆中的药物质量浓度,研究复方磺胺嘧啶在罗非鱼血液中的吸收和消除变化规律.【结果和结论】18、23、28和33℃时,磺胺嘧啶在血浆中的峰质量浓度分别为12.41、19.60、22.48和30.78μg/mL,甲氧苄啶在血浆中的峰质量浓度分别为1.22、2.06、2.44和2.70μg/mL,2个药物的峰质量浓度均随着温度的升高而增大.磺胺嘧啶在血浆中的消除半衰期(t1/2 ke)分别为18.22、17.89、16.90和12.99 h,甲氧苄啶在血浆中的t1/2 ke分别为16.39、7.08、5.99和4.04 h,药物的消除随温度的升高而加快;各温度下药物在罗非鱼血液中的药动学均为1级动力学过程.给药后10 h内血浆中磺胺嘧啶和甲氧苄啶的比例分别为9.57∶1~11.01∶1、6.30∶1~9.36∶1、5.40∶1~10.39∶1和4.20∶1~20.64∶1,均维持在1∶1~40∶1的理想抑菌配比范围内.研究结果表明温度对药物在罗非鱼体内的吸收及消除影响显著,可提高药物的最大血药质量浓度与消除速率,但对复方磺胺嘧啶在血浆中的比值影响不显著.     

四种抗菌药物在水牛体内代谢动力学的研究

磺胺二甲嘧啶用水牛4头,甲氧苄氨嘧啶用3头,氯霉素用3头,噻孢霉素用4头。一次颈静脉注射。剂量分别为100,10,15,15mg/kg。磺胺药的血药浓度测定用Annino法显色,用分光光度计测定,波长为550mμ;甲氧苄氨嘧啶血清浓度测定用微生物法,试验菌种用短小芽孢杆菌;氯霉素血药浓度测定用化学法;噻孢霉素血清浓度测定用微生物法,试验菌种用枯草杆菌。半衰期分别为5.84,3.41,10.2,1.47小时。表观分布容积分别为0.31,1.62,1.12,0.98L/kg。血药有效浓度维持时间分别为15.28,8.87,13.67,5.65小时。     

猪粪便和尿液中二甲氧苄啶的液相色谱串联质谱检测方法研究

试验旨在建立二甲氧苄啶在猪粪便和尿液中的液相色谱串联质谱检测方法。尿液经乙酸乙酯液液萃取,有机层经氮气吹干、35%乙腈水复溶后上机检测;粪便样品经酸乙酯提取,MCX 小柱净化后,洗脱液用氮气吹干,35%乙腈水复溶后上机检测。结果显示：猪粪便和尿液中二甲氧苄啶浓度分别在5~1 000 μg/kg 和10~1 000 μg/L范围内呈现良好的线性关系渊r>0.99冤,尿液尧粪便中二甲氧苄啶的定量限分别为10 μg/L 和5 μg/kg,尿液添加浓度为10、100、1 000 μg/L时的回收率分别为79.6%、84.3%、90.2%,粪便添加浓度为10、100、1 000 μg/kg 时的回收率分别为66.1%、65.1%、54.7%,批间、批内变异系数均小于14%,该方法定量限低,灵敏、准确,符合相关研究的要求。     

甲氧苄氨嘧啶对中药制剂的增效作用

甲氧苄氨嘧啶对中药制剂的增效作用肖淑兰，景培国，金长明（东北农业大学微维饲料添加剂厂）（黑龙江省饶河县畜牧局）甲氧苄氨嘧啶（Ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍｕｐ，ＴＭＰ）是广谱抗菌剂，常与磺胺类药物联合使用，使抗菌作用增强，与四环素、庆大霉素等抗生素合用，也...     

牛奶中甲氧苄啶胶体金快速检测装置的研制

[目的]研究牛奶中甲氧苄啶的胶体金快速检测装置,快速筛查牛奶中甲氧苄啶添加物含量并评价牛奶品质。[方法]制备抗原,免疫得到抗体并摸索胶体金免疫层析装置的样品检测性能。[结果]试验所得装置对牛奶中甲氧苄啶的肉眼可见检测线为2 ng/L,假阳性率为0%,假阴性率为0%;与常见3种混合添加物无交叉反应,特异性高;不同批次间结果重复性高度一致;稳定性好,易于保存,在37℃条件可存放35 d,50℃存放6 d对其质量无影响;兼容性好,适合6种不同种类奶基质;检测时间短,仅需6 min。[结论]该研究的装置检测时间短,使用简单,重复性好,产品稳定性高,适用于牛奶中甲氧苄啶的现场快速筛查和检测。     

呋喃西林代谢物酶联免疫检测方法的建立

[目的]建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法。[方法]通过制备特异性强的单克隆抗体,采用间接竞争ELISA法建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法,并研制出对动物性食品中呋喃西林代谢物残留检测的试剂盒。[结果]该试剂盒标准曲线的IC50值为0.267 7μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本加标回收率范围为79.5%～95.6%,变异系数为7.6%～9.7%。在交叉反应试验中,对呋喃西林的交叉反应率为25%,与其他药物的交叉反应率均小于1%,表明该方法具有很强的特异性。[结论]该方法灵敏度、准确度、精密度均较高,能满足兽药残留的检测要求,且检测时间短(45 min),样本前处理简单、检测成本低,适合于大量样本中呋喃西林代谢物残留检测的快速筛选。     

喹乙醇代谢物残留ELISA试剂盒检测方法的建立

通过间接竞争ELISA反应检测鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡肝以及猪肝中MQCA的残留量,标准曲线IC50值为3.8μg/L,线性范围为1.0~81.0μg/L,对鸡肉、猪肉、鱼肉、虾肉、鸡肝、猪肝样本的检测限在1.65~1.89μg/kg,样品添加回收率均在79.0%~93.7%,批内变异系数小于15%。该方法的建立,为快速检验试剂盒的研究奠定了基础。     

二甲氧苄啶在猪体内的残留消除

【目的】建立在猪组织中二甲氧苄啶浓度的检测方法,并对二甲氧苄啶在猪体内的残留消除进行研究,制订该药在猪体内的休药期.【方法】常规饲养条件下,将30头健康猪随机分为6组,按体质量以5 mg·kg-1剂量混饲给药,每天2次,连用7 d,于最后一次给药后6、24、96、168、240和336 h各宰杀1组猪,分别采集每头猪的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织,采用HPLC法对二甲氧苄啶在各组织的残留量进行测定.【结果和结论】二甲氧苄啶在猪组织中消除较快,给药后第240小时所有检测组织中的二甲氧苄啶已全部低于方法的定量限(40μg·kg-1),二甲氧苄啶在肌肉中消除最快,在肾脏中消除最慢.根据日本肯定列表规定的二甲氧苄啶在禽组织的最大残留限量(50μg·kg-1)和WT1.4休药期软件计算结果,建议该药在猪体内的休药期为8 d.     

四氢嘧啶提高中性蛋白酶热稳定性的研究

[目的]提高中性蛋白酶的热稳定性。[方法]在中性蛋白酶酶液中添加四氢嘧啶,考察四氢嘧啶对中性蛋白酶热稳定性的影响。[结果]四氢嘧啶对经热处理的中性蛋白酶有明显的保护作用。添加浓度3 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过50℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高12.7%;添加浓度5 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过60℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高51.8%。[结论]四氢嘧啶是一种有效的中性蛋白酶热保护剂。     

动物性食品中磺胺二甲嘧啶残留酶联免疫吸附测定法复核实验研究

为确保公司出栏前鸡肉中磺胺二甲嘧啶残留不超标,同时减少实验室的劳动强度,提高工作效率,节约检验费用,特进行动物性食品中磺胺残二甲嘧啶残留酶联免疫吸附测定法复核试验,以确认公司是否可以用北京望尔生物技术有限公司研制的磺胺二甲嘧啶试剂盒做为出栏前的筛选试验.试验分别用酶联免疫吸附试验及液相色谱法对试剂盒的灵敏度、准确度和精密度以及与仪器方法 的对比实验进行了测试.结果 表明:试剂盒IC50平均值为2.78 μg/L,波动范围在2.09~3.45 μg/L之间.鸡肉最低检测限为1.07 μg/kg.经测定磺胺二甲基嘧啶添加的回收率范围为73.2%~112.8%,批内变异系数在5.2%~13.4%之间.与仪器方法 相比较,望尔试剂盒的准确度与仪器检测结果 相同,阴阳性符合率为100%,且前处理方法 简单.经验证,该方法 可用于磺胺二甲嘧啶残留的筛选检测.     

ELISA法测定鸡肉和虾肉中阿维菌素类药物的残留

[目的]验证自主研发阿维菌素类药物试剂盒的检测效果。[方法]采用间接竞争ELISA法对鸡肉和虾肉中阿维菌素类药物的残留量进行检测,并与高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)进行比对。[结果]以5、10和20μg/kg 3个水平对空白鸡肉、虾肉样品进行添加回收试验,平均添加回收率为92.7%~98.6%,批内、批间变异系数均小于10%,鸡肉、虾肉样品的最低检测限分别为0.76、0.89μg/kg。[结论]这种方法与仪器检测结果相同,与仪器分析技术相比具有检测成本低、高效便捷等优点,适于肉制品中阿维菌素类药物的现场快速检测。     

三氟苯嘧啶在稻田中的降解动态和残留分析

采用LC-MS/MS(液相色谱-质谱/质谱)法研究了10％三氟苯嘧啶悬浮剂中三氟苯嘧啶在江苏省扬州市、安徽省宣城市2地水稻田中的残留降解动态和最终残留量.研究结果表明,三氟苯嘧啶在稻田水稻植株、土壤和田水中降解动态符合一级动力学方程,在水稻植株、土壤和田水中的降解半衰期分别为9.40～11.26、5.53～5.89、7.99～8.25 d.10％三氟苯嘧啶悬浮剂分别以225、337.5 mL/hm2这2个剂量施用后,在土壤中最终残留浓度分别为0.010～0.014、0.028～0.037 mg/kg,在稻米中最终残留浓度分别为0.003～0.006、0.008～0.009 mg/kg.三氟苯嘧啶在大米中的残留浓度低于农药残留联席会议规定的大米中三氟苯嘧啶的残留限量标准,在此剂量下使用三氟苯嘧啶对水稻及环境是安全的.     

固相萃取高效液相色谱法测定鸡蛋中六种磺胺残留量

建立了高效液相色谱法测定鸡蛋中6种磺胺药物(磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉)残留的提取、净化和高效液相色谱分析条件,鸡蛋经乙腈提取、固相萃取净化处理后上机检测,6种磺胺药物浓度在0.01～1.0μg/mL范围内标准曲线的相关系数(R2)为0.9999～1,在0.05～0.15 mg/kg浓度范围内,回收率为74.6%～94.3%.检测限为0.00185～0.00264 mg/kg,定量限低于0.0112 mg/kg.方法已应用于实际样品的测定.     

高效液相色谱测定猪肉中5种磺胺类药物的残留

采用高效液相色谱法,在猪肉中添加磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、苯酰磺胺、磺胺吡啶等5种磺胺类药物,通过乙腈提取、固相萃取柱净化处理,流动相为0.1%甲酸与乙腈进行梯度洗脱。结果表明在0.01～1.0μg/m L范围内线性良好,R>0.99,检出限均为5μg/m L,在10～50 ug/kg添加水平下5种磺胺类药物回收率在72.82%～96.18%,RSD<15%,实验结果满足"GB 29694-2013"中回收率要求,确认福泉市质检站已掌握该标准方法,具备开展猪肉中5种磺胺类药物检测的能力,为福泉市动物性食品的安全提供技术支持。     

一种测定水产品中残留甲氧苄啶的方法探讨

目的：探讨高效液相色谱法测定水产品中残留的甲氧苄啶的实验方法。方法：将拟测定水产样品用三氯甲烷和酸性甲醇溶液提取,并将提取液调至碱性,用二氯甲烷革取,经MCX柱净化,浓缩至近干,再用流动相溶解过滤后,用高效液相色谱紫外检测定量。结果：甲氧苄啶在0．05—5．0ug／mL质量浓度范围内,色谱峰面积与甲氧苄啶质量浓度之间线性关系良好（相关系数为0．999967）,在空白样品的20、40、200μg／kg3个加标量条件下,样品平均回收率均大于80％,相对标准偏差小于7％,方法的检测限为20ug／kg。结论：高效液相色谱法测定水产品中残留的甲氧苄啶简便快速、干扰小、准确性高,可以在水产品中甲氧苄啶的残留分析时加以推广和应用。     

液相色谱法对动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定

采用高效液相色谱法测定磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉共5种磺胺类药物在动物源性食品中的残留量。动物源性样品经甲酸乙腈提取,正己烷除脂、固相萃取柱净化;用高效液相色谱法同时测定磺胺类药物残留量,采用Agilent Pursuit 5 C18(150mm×4.6mm, 5.0μm),柱温为35℃,流动相A为0.1%甲酸水,B为乙腈,流速1.0mL·min^-1,紫外检测器,检测波长为270nm。结果表明：在最优试验条件下,该方法测定5种磺胺类药物残留的线性范围在0.02～1.0mg·L^-1,线性相关系数R>0.9999,方法检出限为0.003mg·kg^-1、0.005mg·kg^-1,回收率达到80.1%～108%,相对标准偏差介于2.48%～10.0%。样品前处理方法简单快捷,能够高效、灵敏地同时检测出动物源性食品中的磺胺二甲基嘧啶等5种磺胺类药物的残留量。