肌细胞增强因子2B基因在人和动物中的研究进展

肌细胞增强因子2B(MEF2B)基因属于肌细胞增强因子2(MEF2)基因家族成员,广泛表达于人和动物的肌肉和神经组织中,在肌肉生成、神经系统发育和分化、肝脏纤维化等方面具有重要的作用,作者从MEF2B基因的结构、组织分布、生物学功能及研究进展等方面对该基因进行了综述.     

关岭牛MEF2A和MEF2B基因克隆及其组织表达特征分析

【目的】探究肌细胞增强因子-2(MEF2A和MEF2B)的生物学信息特征及其在关岭牛不同发育阶段各器官组织中的表达情况,为揭示MEF2A和MEF2B基因在关岭牛生长发育过程中的作用机制及挖掘地方种质资源提供理论参考。【方法】通过RT-PCR克隆MEF2A(NM_001083638.2)和MEF2B(NM_001145793.1)基因编码区(CDS)序列,利用ProtScal、NetPhs 3.1、SOPMA、ProtParam、PSORT II Preadict、SWISS-MODEL等在线软件进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR检测MEF2A和MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段(犊牛、青年牛和成年牛)各器官组织中的表达水平。【结果】关岭牛MEF2A和MEF2B基因CDS序列分别编码492和368个氨基酸残基;MEF2A和MEF2B蛋白相对分子量分别为52和39 k D,对应的理论等电点(p I)为9.07和9.35,均属于碱性不稳定蛋白。关岭牛MEF2A和MEF2B蛋白以无规则卷曲和α-螺旋为主,主要定位于细胞核(分别占60.9%和52.2%)。关岭牛MEF2A基因与与挪威鼠和绵羊的MEF2A基因遗传距离较近,关岭牛MEF2B基因则与牦牛和绵羊的MEF2B基因遗传距离较近。实时荧光定量PCR检测结果显示,MEF2A和MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、里脊和脂肪等7个组织中均有表达,且受生长发育阶段的影响。其中,MEF2A基因在犊牛各器官组织中的相对表达量极显著高于在青年牛和成年牛(P<0.01,下同),随着年龄的增长,MEF2A基因在关岭牛心脏中的相对表达量极显著高于其他组织;MEF2B基因在青年牛和成年牛的相对表达量极显著高于犊牛,且在关岭牛心脏、肝脏和脾脏中的表达量与年龄呈正相关。【结论】MEF2A基因在关岭牛不同发育阶段心脏中高表达,而MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段肺脏和脾脏中高表达,但在里脊中的表达相对较低。可见,MEF2A和MEF2B基因在关岭牛的生长发育过程中发挥重要作用。     

南阳黄牛肌肉发育过程中的MyoD和MEF2基因的表达变化研究

利用荧光实时定量PCR技术分析了南阳黄牛3月龄到24月龄间背最长肌组织中MyoD和MEF2基因家族的表达变化情况.结果表明,MyoD基因的表达呈先升高后降低的趋势,在18月龄时表达量最高.MEF2A基因在3月龄时表达量最低,在12月龄和18月龄时表达量显著升高,随后表达量下降;MEF2B基因的表达呈持续上升趋势;MEF2C基因在3月龄时表达量最低,在肌肉发育过程中表达量变化比较小;MEF2D基因表现出明显的先升高后降低趋势,18月龄和24月龄时的表达量比3月龄时显著高.     

利用肉色相关候选基因对肉色性状进行预测

1)选用肥育期苏太猪100头,屠宰后取背最长肌,采用相对定量RT-PCR法测定肉色候选基因肌红蛋白(MB)、肌细胞增强因子(MEF2)、钙调神经磷酸酶(Calcineurin)和活化T细胞核因子(NFATc1)mRNA水平;分别测定MB浓度和肌肉表观色度参数,并对肉色进行评分,再分析上述参数间的相关性.结果显示:MB mRNA与肉色评分(r=0426**(**:P＜001))、a*值(r=0379**)、MB浓度(r=0364**)均呈正相关;NFATc1 mRNA与肉色评分(r=0407**)、a*值(r=0406**)、MB浓度(r=0345*(*:P＜005))、MB mRNA(r=0571**)也均存在正相关;且肉色候选基因表达之间均呈正相关.2)选用生长速度慢的肉脂兼用型二花脸猪与生长速度快的瘦肉型大白猪,分别于3、20、45、90、120和180日龄采集背最长肌样品,用相对定量RT-PCR法分析背最长肌中肉色相关候选基因表达的发育性变化,并进行品种和性别间比较.结果显示:MB、MEF2、Calcineurin mRNA发育性变化在品种间二花脸猪高于大白猪;NFATc1 mRNA则相反,大白猪高于二花脸猪.两品种MB、NFATc1、Calcineurin mRNA均在20日龄急剧升高,MEF2在两品种间差异最大,除3日龄外,二花脸公猪均显著高于大白公猪.性别间二花脸公、母猪MB mRNA和MEF2 mRNA仅在发育后期180日龄有显著差异,Calcineurin mRNA和NFATc1 mRNA在整个发育阶段均无显著差异.结论:推定最佳早期选育时间点为20日龄.     

特产所首次揭示长非编码RNA 调控肌肉发育机制

<正>近日,中国农业科学院特产研究所李光玉研究员带领的创新团队发现了一个新的在肌肉发育过程中发挥重要功能的长非编码RNA,研究发现一个新的基因长非编码RNA-Irm通过直接结合肌细胞增强因子2D来调节肌源性基因的转录,进     

MSTN基因的研究现状及在峨边花牛的应用前景

肌肉生长抑制素（MSTN）又称GDF-8,属于TGF-β超家族．是骨骼肌生长发育的负调控因子,缺失或突变会导致肌细胞的增生和肌纤维的肥大,是近些年研究发现的又一影响畜禽瘦肉率、改善肉质性状的重要营养基因。本文综述了肌肉生长抑制素基因的结构特点及染色体定位、生物学功能。并探讨了肌肉生长抑制素基因的研究在峨边花牛等中的应用前景。     

肌肉中特异表达真核载体的构建及表达特异性验证

为构建肌肉中特异表达真核载体,本试验以PGL4.10质粒为骨架,利用基因合成、酶切连接方法获得重组载体,同时利用红色荧光蛋白基因DsRed2作为标记基因来检测重组载体在非肌源细胞和肌细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了含有肌球蛋白轻链基因MLC启动子及其增强子的肌肉中特异表达载体,通过mRNA和蛋白水平检测,该表达载体在非肌源性细胞和肌细胞中均不表达DsRed2,只在分化的肌细胞中表达DsRed2。该表达载体的构建为制备肌肉中特异表达的转基因动物奠定了基础。     

苏淮猪肉滴水损失相关候选基因突变位点的鉴别

[目的]本试验旨在鉴别影响苏淮猪肉滴水损失的关键基因及位点,为苏淮猪肉品质选育提供重要分子标记.[方法]屠宰301头苏淮猪(胴体重平均为58.67 kg),测定肌肉滴水损失,分析含有胁迫相关蛋白(SAP)结构域的肌肉增强因子2激活基因(MAMSTR)rs337473375(C>T)位点、抵抗素基因(RETN)rs327...     

胰岛素样生长因子I基因在鹅不同发育时期肌肉组织中的表达

采用RT-PCR方法及免疫组织化学方法,检测胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因在28,56日龄鹅肌肉组织中的表达和定位情况.结果表明:IGF-I mRNA表达于上述2个日龄鹅胸肌和腿肌组织中,主要表达于肌肉组织的肌细胞,表明IGF-I可能对鹅肌肉的生长发育有促进作用;且在28日龄胸肌肌细胞和腿肌肌细胞中IGF-I的...     

细胞接种密度对小鼠iPS细胞诱导效率的影响

为研究小鼠胚胎成纤维细胞的接种密度对iPS(induced pluripotent stem, iPS)细胞诱导效率的影响,采用逆转录病毒载体法将Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc 4个基因或者Oct4,Sox2,Klf4 3个基因转入到携带有Oct4-EGFP转基因的小鼠胚胎成纤维细胞(Oct4-EGFP mouse embryonic fibroblasts, Oct4-EGFP MEF)中.感染病毒后的第4天将Oct4-EGFP MEF以500~128 000个/孔(每孔面积9.6 cm2)进行梯度铺盘,并分别于病毒感染后的第12天和第16天对4因子组和3因子组进行碱性磷酸酶染色和Oct4-EGFP阳性细胞比例检测.结果表明,Oct4-EGFP MEF感染病毒后的接种密度对于iPS细胞诱导效率存在较大的影响.4因子和3因子诱导产生iPS细胞的最佳接种密度分别为8 000个/孔和32 000个/孔.此外,通过逆转录病毒法,在最佳的接种密度下,可顺利地建立起iPS细胞系.     

茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的影响

为探究茶多酚(Tea polyphenols,TP)对体外培养鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibrolast,MEF)凋亡的影响。在MEF细胞培养液中添加质量浓度为0、10、40、70、100和150μg/mL的TP,分别培养24、48、72和96h,使用MTT法(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,噻唑蓝,MTT法)检测细胞活力;细胞培养72h,以RT-PCR检测B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(B cell lymphoma leukemia-2,Bcl-2)、和Bcl相关的蛋白X(Bcl-as-sociated X protein,Bax)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)的相对表达量。MTT结果表明:TP质量浓度为40μg/mL时细胞密度略高于其他组,但是没有显著差异(P0.05);质量浓度为100μg/mL时,对MEF的生长产生抑制作用(P0.05),细胞形态没有发生明显变化;当质量浓度为150μg/mL时对细胞生长抑制作用明显(P0.05),从形态观察细胞出现调亡;通过反转录结果表明,对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因的分子转录水平没有影响(P0.05),表明质量浓度高于100μg/mL TP对MEF生长产生抑制作用,但对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3转录分子机制无影响。     

激活素A对大鼠肌细胞增殖分化的作用

激活素A(Activin A)是转化生长因子β(transforming/m L growth factor-β,TGF-β)超家族中的一员,具有重要的生物学功能。为研究Activin A在肌肉发育中的作用,以大鼠肌细胞L6为研究模型,通过时空表达谱、CCK-8以及流式细胞周期分析等方法来进行研究。结果表明Activin A随着肌细胞由增殖转向分化状态,其表达量呈下降趋势。添加不同浓度的Activin A(5~25 ng/m L)均能显著促进L6细胞的增殖速度,且这种促进细胞增殖的效应随着Activin A浓度的增大而逐渐增强。Activin A能显著增加S期在细胞周期中的比例,同时缩短G1和G2期在细胞周期中所占的比例。此外,通过添加Activin A显著抑制了肌肉分化标记基因Myog的表达。以上结果为进一步研究Activin A在肌肉发育中的作用机制奠定了基础。     

家畜肌细胞生成素(MyoG)基因的研究进展

肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因在肌细胞分化过程中起着中心调节作用,直接影响着动物的产肉能力。该文综述了猪、牛、羊等家畜的肌细胞生成素(MyoG)基因的克隆、测序、遗传多态性以及与生产性能的关联等方面的最新研究进展。     

肉鸡成肌细胞的分离培养与鉴定陈凯凯张成*赵菲王驰王孝成耿照玉姜润深

为建立肉鸡成肌细胞的体外分离、培养及鉴定体系,选取11d鸡胚为材料,利用Ⅰ型胶原酶消化鸡胚胸肌,差速贴壁法分离纯化成肌细胞,优化成肌细胞培养条件;通过细胞形态学观察和成肌分化标志基因表达情况进行细胞鉴定,并利用含2%马血清的培养基诱导其成肌分化。结果表明:分离获得的细胞贴壁后呈纺锤形,39.5℃培养条件下细胞增殖速度显著高于37.0℃(P0.05);经实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测分析,增殖期与分化期均有成肌细胞的特异性标志基因成肌因子5(Myogenic factor 5,Myf5)与成肌分化因子1(Myogenic differentiation 1,MyoD)的表达,且与增殖期相比,成肌细胞分化期肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)与肌肉调节因子4(Muscle regulatory factor,MRF4)基因表达量显著升高(P0.05);此外,细胞增殖期结蛋白(Desmin)和分化期肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,MyHC)呈阳性表达。综上,成功分离获得了肉鸡成肌细胞,并在39.5℃培养条件下具有更好的增殖能力,为研究肌肉发育及其营养调控机制奠定了基础。     

肌肉生长抑制素研究及其应用前景

肌肉生长抑制素（Myostation）属于TGF-超家族成员,是骨骼肌生长发育的负调节因子,通过调控成肌细胞的增殖影响肌肉的生长与发育,其变异会导致肌细胞增生与肌纤维肥大。Myostation基因的结构与功能的深入研究对畜牧业具有重要意义和应用前景。本文主要对肌肉生长抑制素基因的结构、保守性及表达特性的研究现状进行了综述,并讨论其在畜牧业中的应用前景。     

肌肉生长抑制素基因—Myostatin的研究进展

肌肉生长抑制素又称 GDF-8,属 TGF-β超家族,是骨骼肌的负调控因子,通过调控成肌细胞的增殖影响肌肉的生长与发育,其变异会导致肌细胞增生与肌纤维肥大。Myostatin 基因功能靶向缺失的小鼠会发生显著的肌肉增生,该基因的变异也是牛双肌性状形成的重要原因。肌肉生长抑制素的研究将为肌肉萎缩等相关性疾病的治疗及动物育种提供新的途径。     

不同锰源对肉鸡胴体性能和肌肉品质的影响

 【目的】用336只1日龄AA肉公鸡进行试验，研究饲粮添加不同锰源对肉鸡胴体性能、肌肉品质、腹脂和肌肉中相关酶活性及肌肉中MnSOD mRNA水平的影响。【方法】采用3×3两因子安排的完全随机设计，将试鸡按体重随机分为7个处理组，分别饲喂不添加锰的玉米-豆粕型基础饲粮和在基础饲粮中以无机硫酸锰、氨基酸锰A（Mn AA A）和氨基酸锰B（Mn AA B）形式分别添加100和200mg•kg-1锰的试验饲粮，试验期为42 d。【结果】添加锰对肌肉pH、滴水损失、剪切力、肌间脂肪、L* 值、a* 值等均无显著影响 (P﹥0.10)；各添加锰组鸡腹脂率、腹脂脂蛋白脂酶（LPL）和苹果酸脱氢酶（MDH）活性及腿肌丙二醛（MDA）含量显著低于未添加锰的对照组 (P﹤0.10)，添加Mn AA A组和添加Mn AA B组腹脂LPL活性均显著低于添加MnSO4组（P﹤0.05）；各添加锰组腹脂激素敏感脂酶（HSL）活性、胸肌和腿肌细胞线粒体中MnSOD活性和MnSOD mRNA水平均显著高于未添加锰的对照组（P﹤0.02）， 添加Mn AA A组腿肌细胞线粒体中MnSOD mRNA水平显著高于添加无机硫酸锰组（P﹤0.02）。【结论】中等络合强度有机锰（Mn AA A）比无机硫酸锰更能有效降低肉鸡腹脂LPL活性及增强腿肌细胞线粒体中MnSOD的基因表达,并进而改善了肉鸡胴体性能和肌肉品质。     

MEF2a基因在肌肉组织中的表达研究

分别取90日龄、180日龄和270日龄大白猪心肌、背肌和腿肌,提取总RNA,设计并合成猪MEF2a引物,以β肌动蛋白作为内参,利用Real-time PCR方法检测不同日龄大白猪肌肉组织中MEF2a基因mRNA的表达.结果表明,不同日龄大白猪的心肌和背肌中,MEF2a基因mRNA的表达水平无显著差异,在腿肌中有显著差异(P<0.05).从90日龄到270日龄,MEF2a基因在心肌、背肌和腿肌的表达水平均差异显著(P<0.05),腿肌最高,其次是背肌,心肌最低.据此推测,MEF2a基因在猪成体后的肌肉组织中,主要是促进I型肌纤维的生成,而不再是介导细胞分化.     

牛LATS1基因启动子转录调控分析

【目的】探究牛大肿瘤抑制基因1（Large tumor suppressor gene1,LATS1）的组织表达规律,并初步鉴定其启动子区关键转录因子,以期阐明其转录调控机制。【方法】利用荧光定量PCR检测LATS1基因在牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮下脂肪、背最长肌、大肠、小肠、大脑、皱胃及睾丸组织中的相对表达量。克隆牛LATS1基因启动子的全长序列,通过逐段缺失PCR技术扩增7个缺失不同片段的启动子序列,并构建其双荧光素酶报告载体,分别转染小鼠C2C12和3T3-L1细胞系,通过检测不同缺失片段荧光素酶报告载体的活性,确定LATS1启动子核心区域。使用在线软件预测牛LATS1基因启动子核心区域的关键转录因子。【结果】LATS1基因在大脑、背最长肌、大肠、皱胃、肾脏中高表达。克隆了1 950 bp的LATS1基因启动子序列及其7个逐段缺失片段序列,并成功构建了pLATS1-1783/+167、pLATS1-1449/+167、pLATS1-1149/+167、pLATS1-837/+167、pLATS1-555/+167、pLATS1-298/+167和pLATS1-123/+167双荧光素报告载体。检测到牛LATS1基因启动子核心区域位于-298/-123区域。在线软件预测到牛LATS1基因启动子核心区存在肌细胞增强因子2（MEF2A）、转录激活因子5（STAT5）、同源异型盒基因5（HOXA5）、肌细胞决定基因1（Myod1）和靶向叉头框转录因子1（FoxO1）结合位点。【结论】克隆了牛LATS1基因启动子,明确了其核心区位于-298/-123区域;MEF2A、STAT5、HOXA5、Myod1和FoxO1可能对牛LATS1基因转录活性具有重要的调控作用。     

猪TCAP基因转录因子的筛选与鉴定

克隆了猪TCAP基因1 662 bp的启动子序列,序列分析发现其启动子区域存在Myo D、Myo G、MEF2转录因子结合位点,并构建了3个转录因子超表达载体,分别与TCAP基因启动子载体共转染PK细胞。结果表明,3个转录因子使TCAP基因启动子活性升高,均正调控TCAP基因的表达。