SPA/SPG融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达

葡萄球菌A蛋白（SPA）和链球菌G蛋白（SPG）的IgG结合区编码基因融合后，克隆到大肠杆菌表达载体PGEX，SPA／SPG融合蛋白（SPAG）得到高效表达。可溶性SPAG～GST产物可被谷胱甘肽亲和柱一次性纯化。用琼扩和ELISA试验测定了表达产物与不同种属动物血清反应的性能。SPAG—GST与所有SPA、SPG各自反应的动物IgG结合，对小鼠IgG的反应优于SPA或SPG。在所测试的23种动物血清中，融合蛋白与大部分哺乳动物Ig反应。     

葡萄球菌蛋白A(SPA)的性质与应用

葡萄球菌蛋白 A(StaphylococcalProtein A,简称 SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁所特有的一种成分。它具有能与人及多种哺乳动物血清中 IgG 的 Fc 段发生非特异性结合,且不影响抗体与抗原相互反应的特性。由于 SPA 的此种特性,近年来,国内外在细菌、病毒等病原的快速诊断与分型和肿瘤的研究以及免疫学基础理论研究方面,均有广泛应用。一是以 SPA 作载     

特异抗体标记金黄色葡萄球菌No.1800株在猪丹毒猪肺疫猪副伤寒及猪败血性链球菌病区别诊断上的初步应用

金黄色葡萄球菌 A 蛋白(简称 SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁的主要成分。早在1940年 Verwey 首先描述了金黄色葡萄球菌的某些菌株的一种抗原成分,能与人的正常血清在双相琼脂扩散试验中出现沉淀线。1958年 Jensen 也报导了类似结果,并发现葡萄球菌的这种抗原成分是细胞壁的组成部分。1964年,Grov 等称葡萄球菌的这种细胞壁成分为 A 蛋白。1966年,Forsgren 等发现 SPA 能与人正常血清的 IgG 的 Fc 段发     

金黄色葡萄球菌蛋白A的提取、纯化及鉴定

为了获得纯度高、活性好的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),取改良营养肉汤培养基上生长18h的金黄色葡萄球菌培养物,采用溶菌酶裂解细胞壁释放蛋白质,用磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶解后转入透析袋透析,透析物用小鼠IgG-sephrose4FF亲和层析柱纯化,采用二喹啉甲酸(BCA)法测蛋白质浓度。结果表明:SPA浓度为0.933mg/mL;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果在42ku处有明显的电泳条带,蛋白免疫印迹(Western-blot)进一步证实小鼠IgG与SPA在42ku处发生较强的反应;以SPA为抗原,提纯的小鼠IgG为样品进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,结果小鼠IgG稀释到1∶25600时仍能与SPA结合,说明提取的SPA活性较高。     

协同凝结试验快速检测轮状病毒抗原

某些金色葡萄球菌具有A蛋白(SPA),能与多种动物的IgG的Fc端结合而不影响Fab端与相应抗原结合的特异性。结合有SPA的IgG与相应抗原结合形成肉眼可见的凝结块,这种试验称为协同疑结试验。我们用该法检测动物及人的轮状病毒抗原,并与     

HRP—SPA在兽医临床诊断上的应用

葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与人和多种哺乳动物血清中IgG分子Fc段高度亲和的特异性。可用同位素、荧光素、铁蛋白、过氧化物酶标记SPA,而不影响天然蛋白质的生物学特性。国外自1977年开始将辣根过氧化物酶(HRP)标记的SPA(简称HRP—SPA)用于间接免疫酶染色以来,引起了许多医学工作者的极大兴趣。他们把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化     

SPA在免疫学上的研究

SPA(葡萄球菌A蛋白)是多数金黄色葡萄球菌细胞壁的主要成分，它能与正常人和多种哺乳动物IgG(免疫球蛋白G)呈非特异性(先天遗传比较初级的识别功能)结合出现沉淀“假免疫反应”。与之结合的IgG仍保持抗体。SPA生物学活性十分广泛，包括与IgG的FC(可结晶片段)结合，固定补体激活B(囊依赖淋巴)细胞，抑制K(荚膜抗原)细胞的ADCC(抗体依赖性细胞介异细胞毒)。     

大白鼠血清IgG的提纯及其抗血清的制备

经硫酸铵及DEAE纤维素柱层析提纯的大白鼠血清IgG免疫家兔制备兔抗鼠IgG高免血清，双向琼指扩散效价为1：64，免疫电泳出现一条特异性沉淀线。其纯度和含量均符合实验要求。     

应用SPA—ELISA法检测猪血清弓形体抗体的报告

1979年 Madore 开始把葡萄球菌 A 蛋白用于酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA),现已广泛应用于血清学诊断,由于 SPA 具有与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fc 段非特异相结合的特性,在 ELISA 中代替第二抗体,但它与多种哺乳动物各种属的亲和力不同,其中与猪的 IgG 亲和力最强,我们应用 SPA-ELISA 检测猪血清弓形体抗体,并与间接血凝法(IHA)进行比较结果满意,现报道如下。     

SPA诊断鸡传染性支气管炎

SPA是金葡萄菌细胞壁抗原的主要成分。目前已知在90%以上的金葡萄菌中均含有这种成份。但不同菌株产生SPA的量相差十分悬殊,且只有金葡萄菌含之,表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌不含SPA。SPA能同人类和多种哺乳类动物的IgG产生沉淀反应。SPA具有天然地和人类及其它一些哺乳动物IgG分子Fe段结合的能力,而不影响该抗体与抗原的反应性。应用这一特性,我们对标准毒株:IBV_(M_(41))、IBV_(M_(21))周、IBV_(H_(52)_、IBV_(H_(120))分别作试验,其结果均为阳性。对照组均为阴性。本试验和IBV在鸡胚内对B(NDV—B)干扰试验,电镜观察,对流免疫电泳实验结果取得一致。一、材料与方法一、标准毒株来源:(一)IBV_(H_(120))、IBV_(H_(52))由上海农科院畜牧兽医研究所引入。     

SPA与鸭IgG的结合性研究

金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白(staphylo-coccal protein A,SPA)能与多种动物的γ-球蛋白发生非特异性结合反应,而且IgG的Fc片段与SPA结合后并不影响Fab片段的免疫活性,因此在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,常用SPA与辣根过氧化酶(HRP)交联而成SPA-HRP结合物,用于抗原、抗体的定量测定及组织切片中抗原或抗体的定位、免疫复合物的检测等[1].     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验在多杀性巴氏杆菌分型上的研究

近年来,国内外对金黄色葡萄球菌A蛋白(简称SPA)及其在免疫学和血清学方面的应用已进行了广泛研究。SPA与IgG的Fc段结合后,有抗体活性的Fab段暴露于SPA的表面,当有特异抗原存在时,则可发生协同凝集反应。根据这一原理,在国外,已广泛应用SPA菌制剂进行细菌的分群(型)和鉴定。如Kronvall(1973)的肺炎球菌快     

葡萄球菌A蛋白及其在免疫学中的应用

葡萄球菌A蛋白(StaphylococcalProtein A,简称SPA)是多数金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分,至今未发现其和致病性有明显的关系,具有与人及多种哺乳动物IgG的Fc段非特异性地结合的特性,这就弓f起了医学及生物科学界的极大重视。现在以SPA为指示系统建立了许多特异、敏感、快速的检测抗原或抗体的方法,应用范围也日益扩大。一、SPA的性质:SPA首先由Ver-wey     

猪圆环病毒抗原表位肽免疫层析试纸条的研制

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)的感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome,PMWS)的发生密切相关。为快速便捷地检测猪圆环病毒2型抗体,本次试验主要采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,运用金黄色葡萄球菌蛋白A蛋白(Staphylococal Protein A,SPA)作为标记蛋白制备金标垫,分别以猪圆环病毒抗原表位肽和SPA免疫兔血清纯化IgG作为检测带(T带)与质控带(C带),经多次重复试验,分别确定了胶体金的最佳标记浓度、最适pH、重悬液和样品垫处理液的最佳配方以及检测带(优势抗原表位肽)和质控带(多抗IgG)的最适包被浓度,最终装配成抗体检测试纸条,用以检测已知的PCV2阳性血清和阴性血清,验证其检测的敏感性、特异性与稳定性。结果表明,经纳米粒度仪检测可得知胶体金颗粒大小在10 nm～14 nm之间。用SPA标记胶体金的最适pH为6.0,最佳标记量为7μg/mL。检测带和质控带的蛋白包被浓度均为1mg/mL。经验证,该试纸条不同批次间以及同一批次内重复性较好,具有较好的灵敏度、特异性和稳定性,能够准确检测猪血清样品中的抗体水平,可以进一步评价猪圆环病毒病疫苗的免疫效果。     

SPA—固相免疫电镜快速诊断轮状病毒感染

SPA—固相免疫电镜技术(SPA—SPIEM)是将 SPA 吸附于支持膜上,和动物 IgG 的Fc 端结合,活化 Fab 端,充分暴露抗原结合位点,促进抗原体反应,大大提高了电镜敏感性的一种免疫电镜技术。国外已有人用于植物病毒,腺病毒及轮状病毒。国内动物病毒方面,王正党等用于诊断犬出血性肠炎病毒及猫泛白细胞减少症病毒的感染,我们用此技术检测轮状病毒的感染,收到良好效果,结果报告如下:     

特异抗体标记金黄色葡萄球菌No.1800株在炭疽病诊断上的应用

自从Forsgren等发现金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白(简称SPA)能和人及某些哺乳动物的IgG的Fc段发生非特异性结合以来,在国內外对SPA及其在免疫学和血清学方面的应用已进行了广泛的研究,但多限于医学方面,在兽医学领域尚少报道。家畜炭疽病的诊断一直应用细菌学检验、动物接种及沉淀反应等方法。这些方法     

鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备

本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100.     

荧光标记细毛羊睾丸免疫血清IgG抗体分子进入兔受精卵的初步观察

<正> 哺乳动物母体血清IgG抗体分子能否进入体内受精卵,是当前免疫学、组织胚胎学中尚有争论的问题。我们因细毛羊睾丸免疫血清对哺乳动物后代性别控制的实验微观需要,开展了荧光标记细毛羊睾丸免疫血清IgG抗体分子进入兔受精卵的实验。现报告如下。     

就“琼脂单项扩散法在猪血清免疫球蛋白定量中的应用”一文与金钊等进行商榷

《中国兽医杂志》1981年七卷第11期刊登金钊等同志“琼脂单项扩散法在猪血清免疫球蛋白定量中的应用”一文。作者引用了人医的方法和理论,对待血清或乳清中的免疫球蛋白IgG、IgM进行了     

胚胎移植供受体绵羊产后及羔羊体内IgG的动态变化

比较受体小尾寒羊移植德国肉毛兼用美利奴(德美)胚胎、德美自然纯繁、小尾寒羊自然纯繁产后0～96 h母羊血清和乳清及羔羊血清中IgG的动态变化。结果表明:受体小尾寒羊产后0～96 h血清和乳清中IgG含量高于自然纯繁德美和自然纯繁小尾寒羊血清和乳清中的IgG含量,12、24、36 h受体小尾寒羊乳清中IgG含量分别为76.11、52.33、47.15 mg/mL,显著高于相应时间德美自然纯繁(51.15、34.19、28.15 mg/mL)和小尾寒羊自然纯繁(47.3l、30.19、26.37 mg/mL)乳清中IgG含量(P<0.05),12、24、36 h移植德美羔羊血清中IgG含量与相应时间自然纯繁德美羔羊和自然纯繁小尾寒羊羔羊血清中IgG的含量无显著性差异(P>0.05),60～96 h移植德美羔羊血清中IgG含量降低的速度较自然纯繁德美羔羊和自然纯繁小尾寒羊羔羊更快。