改良细胞破碎法快速检测转化子DNA

目前常用的转化子DNA快速检测法——快速细胞破碎法,因其检测样品效率高而被广泛应用.但实践中发现,这种方法也有一些不足:(1)用牙签刮取菌落时,不易刮起,刮起的菌数量少,容易把培养基带进去,而且又不易将菌落洗到缓冲液当中,往往要反复几次才行;(2)离心后,沉淀很容易浮起,不便于加样.对此,我们稍加改进,效果     

从精液中分离运动精子的新方法

将人精液用含20%人脐带血清和抗菌素(青霉素1000单位/毫升,链霉素500微克/毫升)的 Ham's 溶液(Ham's F-10 谷氨酸盐)1:4稀释。粘滞性大的精液,稀释后用16号针头吸打3—4次,使其均匀一致、不粘滞。然后用吸管移入15毫米直径、内装1毫升油性衬比介质(碘化罂粟油,Lipiodol,比重1.28)的试管内(应沿管壁慢慢流下,重叠在油液的上面)。以300克离心10分钟,轻轻从上面吸出大部分上清液弃之,留下0.5毫升下面有精液沉淀块的上清液。若需第二步洗涤,可将留下     

单只饲养的公鸡精液质量评定

本研究是根据精子光散射性质的客观指标进行公鸡和精子活力测定。并用含10×10~6精子的精液输精,验证精子活力、形态及三磷酸腺苷(ATP)含量的测定结果.材料与方法精液处理从24只单只饲养的洛岛红公鸡每周采精两次。精液样品用谷酰氨基缓冲液稀释。32倍稀释的用于输精,4倍稀释的用于     

袋状和细管的猪冷冻精液对比

材料和方法用具有正常受胎能力的成年公猪,徒手采精,取浓精液过滤到经过预热的保温瓶中在32℃条件下用BTS液作1∶3稀释,放入15℃室温下3小时,然后以800g,10分钟离心,弃上清液,用II液(80ml 11%乳糖和20ml卵黄)作1∶1稀释,缓慢搅拌,使成为1×10~9精子/ml浓度,再在5℃的条件下,     

公牛精子与卵透明带结合力测定方法的试验

以精子与透明带结合能力为基础的预测人精子受精潜力的测定方法已经建立。本试验的目的是建立适用于公牛精液检查的类似方法。结果表明不同受精能力的公牛之间在同批卵子透明带上所结合的精子相对数目存在差异。这种差别表明,精子与透明带结合能力与公牛的繁殖力之间可能存在着相关性。现将本试验的方法与结果介绍如下。试验当天,从4头具有繁殖力的公牛采得精液,立即取0.5毫升的精液样品用4.5毫升的磷酸缓冲液(PBS)稀释,以300g 离心15分钟后,弃去4毫升上清液,加入等量的PBS 液洗涤精子,并重复一次。取洗涤后的     

利用猪皮浸出液保存解冻后牛颗粒冷冻精液的研究

将猪皮浸出液（俗称猪皮胨）按一定的比值与一般的精液稀释液混合均匀，然后将牛的颗粒冷冻精液按一定稀释倍数稀释于此液中。利用猪皮胨的固态特性迫使精子停止运动，进而降低解冻后精子的代谢活动、达到延长精子存活时间而不丧失受精能力的目的。其中五号保护剂保存精液60h活力基本不变，六昼夜时活力下降到0．1。     

芬兰的绵羊人工授精

芬兰从1964年开始进行绵羊的人工授精试验。1966年起试用冷冻精液。1966年用冷冻精液对14头母羊输精,其中9头受胎,平均产羔约2.8头。其中一些母羊用保存了一年的精液输精,其结果同保存一个月的精液相同。稀释液为11％乳糖液加20％卵黄,稀释比例为1∶1,     

新疆驴冷冻精液的研究

试验旨在探究新疆驴冷冻精液的最佳稀释保护液与处理方法。以假阴道采集新疆驴精液,并用5种不同稀释保护液稀释冷冻后,选取其中较为理想的稀释液作为对照组,再通过分别添加4%、5%、6%、8%甘油处理试验,最后再选用添加甘油后冷冻效果最优的稀释液为对照来进行离心浓缩试验。结果表明：①5号稀释液冷冻—解冻精液后,其活力、顶体完整率要显著高于其他4种稀释液（P<0.05）;②以5号稀释液为对照组,添加6%甘油(7号稀释液)冷冻后,精子的活力、顶体完整率要显著高于添加4%、5%、8%甘油组（P<0.05）;③以7号稀释液为对照组,通过离心浓缩,精液在冷冻后其活力和精子顶体完整率都显著提高（P<0.05）。结果提示,将驴精液用6%葡萄糖、2%乳糖、6%甘油为主的稀释液稀释,并经500 r/min离心浓缩10 min处理后,其冷冻效果最好。     

关于猪精液中蛋白凝集因子的研究

用卵黄和糖的溶液做猪精液冷冻保存的稀释液,往往在稀释后发生精液凝集,特别是在稀释后15～30分钟更为明显,凝集块沉淀,上清液几乎变为无色透明,精子被包进凝块中,影响精子的运动和存活.此外,在液状保存精液中广泛使用的乳糖液,也和卵黄糖液同样发生凝集,以致使保存的精液不能供授精使用.因此,猪精液稀释液的凝集现象,对精液的冷冻和保存十分有害.     

公猪冷冻精液的制作方法

应用公猪浓稠部分精液按1:2～3倍稀释。稀释液由Ⅰ液,Ⅱ液按1:1.3(v/v)配合而成。Ⅰ液:每100毫升蒸馏水中加乳糖6克,二水柠檬酸三钠0.5克,氨基乙酸1克,三羟基甲基氨基甲烷0.12克。Ⅱ液:每100毫升蒸馏水中加葡萄糖6克,鸭蛋卵黄30毫升。供制冻精液室温中静置1小时后,以Ⅰ,Ⅱ混合液同温稀释。稀释后精液放入控温范围5～8℃的冰箱内,一次降温3小时。精液温度达5～10℃,取出放入盛有冰块的冷藏瓶中保存。制冻中精液温度保持在6～8℃,每次吸取精液20毫升左右,直接注入吊离液氮面的瓷盘内,浇冻成薄片状后,敲成黄豆粒大小,放入液氮中保存,冷冻精液以“干解法”解冻,解冻温度55℃,解冻后精液与解冻液以1:0.5混合,可供输精。解冻液由100毫升蒸馏水中加葡萄糖5克、乙二胺四醋酸0.37克、25％安钠加注射液2毫升所组成。每次输精量15～20毫升,内含有效精子6～8亿。一个情期输精1～2次。通过对306头母猪情期输精,26日不返情率75.06％,最高的输精点达88.64％,平均窝产仔10.39头,最高窝产仔22头。     

死精子对猪精液17℃液态保存的影响

为揭示17℃液态保存过程中猪精子质量和功能持续下降的机制，本试验采集9头在役的不同品种公猪（长白、大白和杜洛克）的精液48份，使用BTS溶液等体积稀释后分为3份，其中的两份分别使用反复冻融（方法 A）和低渗处理（方法 B）方法杀死精子并离心获得稀释液A和B，将另一份精液样品离心分离精浆（Seminal Plasma,SP）和精子。分别使用不同体积比例稀释液A:精子（1:1、4:1和19:1），稀释液B:精子（1:1、4:1和19:1）,SP:精子（1:1和4:1）和BTS:精子（4:1）重悬离心后的猪精子，以SP和BTS重悬的精液及原精液样品作为对照，所有精液样品于17℃下保存3 d。结果表明：随着保存时间的延长，所有稀释液和稀释倍数处理均损伤了精子活率和活力（P<0.01）及质膜完整性（P<0.05）。稀释液A比B引起的精子脂质过氧化水平更低（P<0.05）。5倍稀释精子，稀释液B的精子活力较BTS组降低（P<0.05），稀释液B引起的精子细胞内活性氧族（ROS）水平比稀释液A更高（P<0.05），而精液总抗氧化物（TAC）水平更低（P<0.05）...     

丁羟基甲苯抗猪精子氧化损伤作用

分别在稀释、离心猪精液中添加0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L丁羟基甲苯(Butylated hydroxytoluene,BHT),15℃保存,检验保存35、d后精子TMS、PMI和NAR(%)、测定MDA浓度;确定并选择最佳BHT浓度用于猪精液冷冻保存,检验解冻后TMS、PMI、NAR和Mt-MP(%)、测定MDA浓度。结果显示:BHT显著提高稀释精液、离心精液各项指标百分率(P0.05),且MDA浓度显著降低(P0.05),BHT最佳浓度分别为0.8、1.6 mmol/L;0.8 mmol/L BHT显著提高冷冻-解冻精液各项指标百分率(P0.05),且MDA浓度显著降低(P0.05)。结果表明,BHT能通过抑制精子质膜氧化损伤,提高猪精液保存效果。     

大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆种子经过浸提、离心、硫酸铵逐级沉淀和D-半乳糖-Epoxy-Sepharose-4B亲和层析,获得单一的大豆凝集素(Soybean agglutinin SBA)样品。纯化的大豆凝集素经pH8.9的聚丙烯酰胺凝胶电泳(胶浓度7.5%),可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中,采用2%兔细胞悬液,测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞的凝集作用的影响。结果表明,使兔红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg/mL左右。浓度为0.1mg/ml凝集素溶液分别与D-半乳糖、D-氨基半乳糖、异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)、а—乳糖、几丁质溶液结合后,使兔红细胞50%凝集的糖配体溶液浓度分别为1mg/ml、2.5mg/ml、10mg/ml3、0 mg/ml,而几丁质几乎对SBA没有影响。     

美国家禽改良计划条文内容(连载七)

<正>(上接第12期第41页)(3)在待检血清稀释液中加入25μL50%红细胞悬液;(4)轻柔涡旋混匀;(5)4℃孵育1h;(6)进行红细胞离心;(7)采用上清液进行HI试验。更改试验中的稀释程序需要考虑最初的1:5稀释液的配备。对于1:5稀释程序来说,不要在A列中加入PBS,而是加入50μL处理过的上清液,对A列到H列进行25μL倍比稀释后,B列到H列的稀释度分别为1:10到1:640。147.8诊断用蛋黄样品的准备程序     

离心对绒山羊精液冷冻效果的影响

选用8只精液品质良好的岢岚绒山羊成年公羊,采精后将精液混合,等分为2份,一份不离心(对照组),4倍稀释后颗粒冷冻;另一份在2 000 r/min下离心10 min,弃去上清,补充等体积稀释液,再4倍稀释后颗粒冷冻.探讨离心对冷冻前后的精液品质及其相关酶活性的影响.结果表明,离心可显著提高冻前冻后精子活率、弯尾率和顶体完整率,显著降低精子的畸形率和获能率(P＜0.05);离心组冻前冻后精泣的GOT活性、LDH活性、GPT活性显著低于对照组(P＜0.05),精浆果糖含量显著高于对照组(P＜0.05).表明,离心处理可明显提高绒山羊精液冻前冻后的品质.     

鸡新鲜精液长途运输试验

用《-6》配套杂交鸡的8系作为父系,建立具有高受精率和肉用性能好的AC 新母本。用按摩法采集8系公鸡(11～12月龄)的精液,测定射精量、精子浓度(在微型离心机上)和精子活力。精液用液稀释。此稀释液的配方为:肌醇1克、棉子糖2.4克、谷氨酸钠1.4克、柠檬酸二钾0.14克、磷酸氢二钠0.98克、磷酸二氢钠0.21克、蒸馏水(pH6.9)100毫升。稀释后的精液分装到     

从感染鼠脑浓缩和提纯乙型脑炎病毒的实验研究

综合应用鱼精蛋白—聚乙二醇—蔗糖密度梯度离心法对鼠脑中的乙型脑炎病毒进行浓缩和提纯,摸索了影响提纯效果的各种因素的最佳值,建立了提纯效果较好的程序。本程序的最佳缓冲液为pH7.8的PBS,国产硫酸鱼精蛋白和聚乙二醇的最佳浓度分别为1mg/ml和8％(W/V),最佳离心力为15,000×g,病毒在蔗糖密度梯度离心中形成区带的最佳条件为100,000×g,90分钟(15—60%蔗糖溶液)。本试验的程序为:鱼精蛋白处理感染鼠脑匀浆液→离心→弃除沉淀→上清液中加入等量聚乙二醇溶液→离心→取沉淀→用STE离散液作相当于原量1/40或1/100的悬浮稀释→叠加于蔗糖梯度柱上→离心→收集病毒区带→鉴定。 结果表明,感染鼠脑匀浆液在用鱼精蛋白和聚乙二醇处理之后,鼠脑中的宿主细胞杂蛋白和脑磷脂等明显减少,病毒HA回收率达100%,感染性(LD_(50))的回收率为70％,蛋白消除率平均为96％左右。在将病毒样品进一步作蔗糖密度梯度离心纯化时,HA的提纯系数为535,最高值达846。LD_(50)的提纯系数为443,最高值达803。最终蛋白消除率为98.7％。取浓缩和提纯的病毒样品作电镜负染观察,发现大量具有囊膜结构的球型颗粒,直径为44.5±3.2nm。病毒的浮密度约为1.144g/cm~3(在100,000×g,离心90分钟)。 该浓缩和提纯程序,有可能用于由动物组织中浓缩     

猪精液常温保存的试验

设计了4个猪精液稀释液配方,以台湾生产的猪精液常温保存稀释粉为对照,筛选出保存效果较好的配方,再进行不同因素对精液保存的影响试验。结果显示,以含有Tris和半胱胺酸的配方4,并在稀释液中添加庆大霉素(100 IU/mL)和林肯霉素(200 μg/mL)作抗生素,在24-30℃,pH为6．4,稀释倍数为1:1时保存效果最佳。     

处女猪离体子宫内培养的猪和山羊精子的形态学变化

取猪和奶山羊精液经 m-KRB 液10倍稀释,离心洗涤二次,在浓缩精液中加入2毫升m-KRB 液。取一部分稀释精液在 CO_2培养装置内培养五小时后,经离心作电镜观察。另一部分精液,注入到处女猪离体子宫内,浸没在37℃生理盐水中亦经五小时后,用 m-KRB液10毫升冲洗出精子作电镜观察。在 m-KRB 液中培养的猪精子和刚射出的精子相比较,形态上无差异。而在离体猪子宫内培养的猪和乳山羊精子,在顶体头帽部出     

猪精液4℃低温保存技术的研究

以精子总存活时间、有效存活时间及存活指数为检测指标,用6种稀释液稀释后4℃低温保存,从中筛选效果最好的基础稀释液配方,并进一步探讨保存前不同精液处理方法在猪精液4℃低温保存的效果;最后用筛选得出的基础稀释液和精液处理方法稀释猪精液,4℃低温保存2~3 d,用于低剂量常规部位人工授精试验,通过受胎率来探讨其繁殖潜力。结果表明:6号稀释液显著优于其他5种稀释液(P0.05);精液带精浆直接稀释的效果优于精液离心处理(P0.05);精液以1:2或1:3比例稀释更利于猪精液4℃低温保存(P0.05);低温保存猪精液低剂量常规部位人工授精是可行的。总之,通过试验得到了猪精液低温保存基础稀释液配方及保存前处理方法,该方法适合于低剂量常规部位的人工授精。