白腐菌漆酶特性及其应用前景

木质素是第二天然聚合物，木质素的降解是碳素循环中的关键一步。自然界中木质素的降解主要是通过丝状真菌，尤其是白腐菌的分解作用来完成的。漆酶是一种含铜多酚氧化酶，按其主要来源分为漆树漆酶和真菌漆酶两大类，研究表明，漆酶可作用的底物范围广泛。本文综述了白腐菌漆酶的结构特性、催化氧化性质，以及漆酶在环境保护、造纸工业、食品工业、生物检测及其它领域中的应用前景。     

白腐菌TP21液体培养产漆酶条件的研究

研究了碳源、氮源、各种理化因素以及培养条件对白腐菌TP21漆酶分泌的影响.结果表明:木糖和多糖作碳源、酵母膏作氮源有利于漆酶的分泌,pH在4.0～6.0的范围内对漆酶的分泌影响不大,培养温度、接种量、通气量对漆酶的分泌有较大影响,培养基中添加诱导物对漆酶的产生有促进作用,特别是玉米秸秆价格低廉,是较好的选择.     

白腐菌Trametes pubescens MB89产漆酶发酵条件的优化及其部分酶学性质的研究

以白腐菌T.pubescens MB89为漆酶培养菌.研究培养方式、温度和Cu2+等因素对发酵产生漆酶的影响.在漆酶性质研究中,研究了温度、pH值、底物种类、金属离子等因素对漆酶催化活性的影响.结果表明,T.pubescens MB89产漆酶的最佳培养温度为25℃,最适Cu2+浓度1.0μmol/L,120 r/min振荡培养优于静止培养.T.pubescens MB89漆酶氧化底物的最适作用温度为25℃,最适pH随底物的不同而不同.Cu2+、Co2+、K+、Ag+对漆酶活性有促进作用,Fe2+、Fe2+、ca2+等离子对漆酶活性有抑制作用.Na+、Mg2+、Zn2+、Mn2+等离子对漆酶酶活性影响不大.由此说明,振荡培养T pubescens MB89生产漆酶的过程中Cu2+的存在可以加速漆酶的产生.T pubescens MB89漆酶酶活性受温度、pH值、金属离子、底物等因素的影响.     

2株白腐真菌产漆酶条件的优化

采用液体摇瓶培养方法,探讨了碳源、氮源、pH值、培养温度等各种因素对白腐真菌分泌漆酶能力的影响,采用单因素和正交试验对主要的影响因素进行了优化。研究得出菌株的最佳产漆酶培养基为:200 g/L马铃薯+20 g/L葡萄糖+5 g/L酵母膏+1.5 g/L MgSO4+0.1 g/L维生素B1+0.05 g/L ZnSO4+0.05 g/L MnSO4+3.0 g/LKH2PO4。优化后的培养基最适发酵条件为:起始pH值6,转速130 r/min,装液量70 mL,在32℃条件下摇床培养发酵10 d左右时,粗酶液的酶活力达到12.7 U/g。     

高产漆酶白腐真菌的筛选

以6种白腐真菌作为供试菌株,5种食用菌作为对照菌株,采用愈创木酚及α-萘酚基质平板显色法,依据漆酶催化氧化还原反应产生显色圈的直径大小及变色程度对产漆酶菌株进行初筛;并采用ABTS酶活力测定法对菌株进行复筛。结果表明,11种真菌均具有分泌漆酶的能力,得到5株高产漆酶的白腐真菌菌株,由强至弱排列依次为朱红栓菌[Trametes cinnabarina(Jacq.∶Fr.)Fr]、木蹄层孔菌[Pyropolyporus fomentarius(L.Ex F.)Teng]、单色云芝[Coriolus unicolor(L.∶Fr.)Pat]、轮纹韧革菌[Stereum ostrea(Bl.et Nees)Fr.]和宽鳞棱孔菌[Favolus squamosus(Huds.ex Fr.)Ames],酶活力分别为23.47、20.26、19.52、18.39、17.93 U/m L。     

白腐菌(Trametes pubescens MB89)漆酶的培养与纯化

【目的】通过培养白腐菌Trametes pubescens提取胞外漆酶。【方法】以白腐菌T.pubescensMB89为漆酶培养菌,在25℃120 r/min条件下用基础GP液体培养基(300 mL培养基中含40 g/L丙三醇、15 g/L蛋白胨和1 g/LMgSO4.7 H2O)进行胞外漆酶的震荡培养,培养10 d后,添加CuSO4.5 H2O使培养基中Cu2+的最终浓度达1 mmol/L。定时测定漆酶活力,于漆酶活力开始下降时终止培养。将菌体破碎、离心后,用DEAE-Ssepharose对获得的漆酶进行分离和纯化。【结果】在以葡萄糖为碳源的培养基中添加一定浓度的Cu2+,可促进菌体的生长和漆酶活力的增加。培养前10 d,漆酶活力增加缓慢,培养10 d后添加CuSO4.5 H2O,漆酶活力快速增加,并于培养的第19天达到最大,为51.70 U/mL。用超滤方法分离纯化漆酶,可使漆酶纯度达53%。【结论】T.pubescensMB89可作为生产漆酶的菌种,在漆酶培养过程中,Cu2+对漆酶活力的增加有促进作用。     

白腐菌产漆酶处理木屑对生产刨花板用胶量的影响

将木屑与试验制备的粗酶液混合,烘干后加入脲醛树脂胶,热压制成刨花板,与未经漆酶处理过的木屑热压成的刨花板进行比较。结果表明:用粗酶液处理过的木屑热压成的刨花板,与未经漆酶处理过的木屑热压成的刨花板相比,达到同等物理力学性能时所需脲醛树脂的用量,减少了42.9%;热压成板的物理力学性能并优于不经处理的木屑热压制成的刨花板。     

白腐菌产漆酶活化木粉制备纤维板的力学性能

利用白腐菌产漆酶的特性,优化连续培养高活漆酶,使得大量培养漆酶成为可能。结果表明:在连续培养和直接培养两种情况下,第11天时漆酶的酶活最高;利用连续培养白腐菌得到的大量的粗漆酶来处理木粉,活化其木质素成分,使其能够替代一部分的脲醛树脂胶制备纤维板。静曲强度上升了18.95%,弹性模量上升了35.49%,内结合强度上升了44.11%。漆酶催化氧化了木质素,增加了木质纤维中化学键的数量,使木质纤维之间的胶结点增多。与此同时,经过漆酶处理的木粉增强了脲醛树脂胶黏剂在纤维表面的渗透和扩散能力,提高了纤维板的力学性能。     

碳源对白腐菌降解竹基质的影响

为探索竹生物制浆的适宜条件,该文研究了5种碳源对白腐菌降解竹基质中木质纤维素的影响。结果表明,外加碳源刺激菌丝生长,白腐菌对竹基质中不同组分的降解程度因外加碳源的种类而异;纤维素降解率对白腐菌降解木质素和半纤维素的选择性起着关键的影响;10%葡萄糖、5%木聚糖和10%麸皮都能显著提高木质素和半纤维素的选择性系数,其中5%木聚糖的效果最好;木质素和半纤维素的降解选择性系数从12 .91分别上升到41.45和78.83;添加复杂碳源麸皮和玉米秆粉对白腐菌降解竹子中木质素和半纤维素的促进作用可能是木质素降解酶、小分子物质及共代谢多种途径共同作用的结果。总之,在利用白腐菌进行竹生物制浆时适当添加富含半纤维素的物质有利于提高效率,降低成本。      

白腐真菌发酵罐液态发酵产漆酶条件的优化

通过在发酵罐中液体发酵产漆酶,在发酵罐中筛选黄孢原毛平革菌液体发酵产漆酶的最佳条件.试验选取已优化的白腐真菌液态发酵培养基进行培养,在发酵罐中进行单因素和多因素正交试验,对其在发酵罐中发酵产酶条件进行优化.选取的白腐真菌黄孢子原毛平革菌的最佳发酵生产条件为:温度28℃、转速300r/min、通气量5L/min(通气比1.0vvm)、pH值5、接种量为15%.在此条件下最高产酶水平可达14.86U/mL.     

白腐真菌对造纸黑液中木质素的降解效果

【目的】应用白腐真菌处理造纸黑液,探讨白腐真菌对造纸黑液中木质素的降解效果及其影响因子,确定最佳降解条件。【方法】从自然界腐朽木材上分离培养白腐真菌,利用专用培养基对其进行分离和纯化,分析木质素溶液质量浓度(污染负荷)、pH值、搅拌速度、碳源和氮源质量浓度、[Fe2+]质量浓度对白腐真菌降解木质素效果的影响。【结果】确定白腐真菌降解造纸黑液中木质素的最佳条件为:木质素质量浓度为153.0 mg/L,pH值为5,搅拌速度为250 r/min,葡萄糖质量浓度为1 g/L,酒石酸铵质量浓度为0.20 g/L,[Fe2+]质量浓度为0.08 mg/L。【结论】得到了白腐真菌降解造纸黑液中木质素的最佳条件,在此条件下白腐真菌对木质素的降解率最高可达64.38%。     

白腐真菌的辐射诱导及酶学性质的研究

选用菌株为白腐真菌5.132 Fomes Lignosus(Berk)Coke,为进一步提高白腐真菌漆酶活性和对木质纤维素的降解能力,采用60Co-γ射线对白腐真菌孢子悬浮液辐射处理,分析原菌株和辐射菌株,以及不同碳源和氮源浓度对漆酶和菌丝生长的影响.结果表明,在不同碳源条件下,糊精产酶量最高,漆酶活力达到6.28 U·mL-1,诱变株比对照株漆酶活力提高5.44%.不同氮源条件下,牛肉蛋白胨产酶量最高,漆酶活力达到4.65 U·mL-1,诱变株比对照株漆酶活力提高7.02%;在不同碳源条件下,可溶性淀粉菌丝干重最高,达到0.68 g· L-1,诱变株比对照株提高了21.86%.不同氮源条件下,牛肉蛋白胨菌丝干重最高,达到2.98 g·L-1,诱变株菌丝干重比对照组提高21.06%;同一碳源不同浓度的比较试验中,低浓度碳源提高酶产量,高浓度碳源提高菌丝生长量,同一氮源不同浓度的比较试验中.其结果与碳源试验结果一致;在不同碳源和不同氮源条件下,60Co-γ射线辐射白腐真菌后,漆酶活力极显著提高(P<0.01),而菌丝干重差异不显著(P>0.05).     

白腐真菌固体发酵玉米秸秆产漆酶条件的优化

采用单因子比较法对白腐真茼的固体发酵玉米秸秆培养基和产漆酶条件进行了优化,得出最佳的产漆酶发酵培养基组分为:玉米秸秆粉79%,麸皮20%.MgSO4 0.4%,KH2PO4 0.6%,最佳的产漆酶发酵条件为料水比1:3,pH值7.0,接种量5%,温度26℃,在此条件下,漆酶最高活性迭0.954U.     

白腐菌发酵玉米秸秆最佳条件研究

【目的】以玉米秸秆为材料,研究白腐菌对其发酵的最佳条件。【方法】采用L₉（3⁴）正交试验设计,以发酵后玉米秸秆中的粗蛋白和粗纤维含量为指标,以白腐菌发酵玉米秸秆时的秸秆含水率、温度、接种量、起始pH为主要影响因素,筛选白腐菌发酵玉米秸秆的最佳条件。【结果】白腐菌发酵玉米秸秆的最优条件为：秸秆含水率为70%,温度为30 ℃,接种量为0.25 g/kg,起始pH为4,在此条件下发酵7 d,秸秆粗纤维含量由348.7 g/kg下降为299.4 g/kg,粗蛋白含量由58.3 g/kg升高为116.6 g/kg。【结论】筛选出了白腐菌发酵玉米秸秆的最佳条件,为玉米秸秆资源化利用提供了参考。     

不同碳源和氮源对4种深色有隔内生真菌生长的影响

【目的】明确不同碳源及氮源对4种深色有隔内生真菌(Dark septate endophytes,DSE)生长的影响,确定4种DSE生长的最适碳源和氮源,为深色有隔内生真菌的研究和应用奠定基础。【方法】以沙门外瓶柄霉(Exophiala salmonis)、甘瓶霉(Phialophora mustea)、菊异茎点霉(Paraphoma chrysanthemicola)和枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)4种深色有隔内生真菌为材料,在固体和液体条件下培养,研究不同碳源(葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、果糖、乳糖、可溶性淀粉和山梨醇)和氮源(磷酸氢二铵、草酸铵、硫酸铵、氯化铵、尿素、硝酸铵、硝酸钠、酸水解酪蛋白、胰蛋白胨和蛋白胨)对其菌丝平均生长速度和菌丝干质量的影响。【结果】固体培养条件下,沙门外瓶柄霉、甘瓶霉和菊异茎点霉的最佳碳源均是葡萄糖,枝状枝孢菌的最佳碳源是乳糖;沙门外瓶柄霉、甘瓶霉和枝状枝孢菌的最佳氮源均是硝酸钠,菊异茎点霉的最佳氮源是胰蛋白胨。液体培养条件下,甘瓶霉、菊异茎点霉和枝状枝孢菌的最佳碳源均是可溶性淀粉,沙门外瓶柄霉的最佳碳源是葡萄糖;沙门外瓶柄霉、甘瓶霉、菊异茎点霉和枝状枝孢菌的最佳氮源分别是磷酸氢二铵、草酸铵、蛋白胨和硝酸铵。【结论】初步确定了4种深色有隔内生真菌生长的最佳碳源和氮源。     

一株楸树内生真菌的鉴定及其发酵产物抗肿瘤特性研究

利用传统分类学方法、ITS序列测定和系统发育分析方法对一株分离自楸树抗肿瘤活性内生真菌FSNQ0023进行分类鉴定,并对其产物抗肿瘤活性及其细胞毒性进行了初步研究。结果表明,各种指标鉴定其为木霉属真菌(Trichoderma sp.)中的一种,该菌株经发酵培养120h,抗肿瘤活性最强;其对肝癌细胞HepG2的IC50约为正常肝细胞HL-7702的1/2;60℃处理2h后活性稳定。这些特性为活性产物的分离纯化提供了重要数据,也为抗肿瘤新药开发提供了依据。     

扁芝漆酶诱导与产生的初步研究

该文采用定期测定基础培养基Ⅰ、Ⅱ培养体系中 ,诱导或不诱导条件下菌丝生物量、漆酶活性、pH、残糖量变化的方法 ,研究了液体培养过程中 ,白腐菌扁芝漆酶的诱导和产生规律 .结果发现 ,加入DL β 苯丙氨酸或愈创木酚的培养基中 ,培养 1d漆酶活性就达到高峰 ,分别为同步培养的基础培养基Ⅰ漆酶活性的 5 76倍和 4 2 8倍 ;培养5d后 ,基础培养基Ⅰ、加入香兰素的培养基的漆酶活性才达到高峰 ;基础培养基Ⅱ在培养 6d时出现漆酶活性高峰 ,与基础培养基Ⅰ产漆酶历程相似 .证明基础培养基Ⅰ培养体系中的DL β 苯丙氨酸或愈创木酚对扁芝漆酶产生有明显的诱导作用 ,香兰素则有一定的抑制作用 ;基础培养基Ⅱ培养体系中硫酸铜对漆酶活性诱导作用高于藜芦醇     

不同碳、氮源及无机盐对桦褐孔菌菌丝培养特性的影响

通过单因子试验和正交试验，研究了不同碳氮源及无机盐对桦褐孔菌菌丝培养特性的影响．结果表明，桦褐孔菌菌丝生长的最佳培养基配比为：葡萄糖25g，黄豆粉20g，硫酸钙1．25g，琼脂20g，VBl10mg，水1000mL，并确定葡萄糖是影响菌丝体干重的主要因素.