雌二醇对犬卵母细胞体外成熟的影响

为探讨雌二醇(E2)对犬卵母细胞体外成熟的影响,在基础培养液中分别添加浓度为0,1.0,2.0,3.0μg/mL的雌二醇。结果表明,体外培养48h后E2浓度为2.0μg/mL组犬卵母细胞达到MI-MII期比率为20.9%,高于浓度为0组(12.9%)、1.0μg/mL组(14.6%)和3.0μg/mL组(15.0%),差异不显著(P>0.05)。体外培养72h后E2浓度为2.0μg/mL组犬卵母细胞达到MI-MII期比率为23.3%,高于浓度为0组(14.0%)、1.0μg/mL组(16.7%)和3.0μg/mL组(15.7%)差异不显著(P>0.05)。可见,在基础培养液中添加浓度为2.0μg/mL的雌二醇(E2)可促进犬卵母细胞核成熟到MI-MII期,但效果并不明显。     

亚麻酸对水牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响

收集屠宰场水牛卵巢卵母细胞,在卵子体外成熟和受精后胚胎体外发育过程中分别添加0(对照组),10,50,100和200μmol·L-1的亚麻酸,探究亚麻酸对水牛卵母细胞核成熟率、受精卵的分裂率和植入前胚胎体外发育的影响。结果显示:在水牛卵母细胞体外成熟液中添加亚麻酸,添加浓度50μmol·L-1组的核成熟率(74.18%)显著高于对照组和其他实验组(P0.05),囊胚率(33.24%)显著高于对照组和10μmol·L-1亚麻酸组(P0.05)。在胚胎培养液中添加50μmol·L-1亚麻酸组的囊胚率(34.52%)显著高于对照组和100μmol·L-1亚麻酸组(P0.05);同时在成熟液和胚胎培养液中添加亚麻酸,添加浓度200μmol·L-1组的分裂率显著高于对照组(P0.05),而各组间的囊胚率和D7囊胚比率均差异不显著。结果表明,单独在水牛卵母细胞体外成熟液和胚胎培养液中添加50μmol·L-1亚麻酸能有效促进水牛卵母细胞体外成熟和囊胚发育。     

不同浓度的牛卵泡液对牛卵母细胞体外核成熟率的影响

通过添加不同浓度的牛卵泡液(bFF),探讨了bFF对牛卵母细胞体外核成熟率的影响;并筛选出bTCM-199(10%)培养体系与TCM-199培养体系进行核成熟效果的对比试验。结果表明:20%、30%bFF组处在GV期和MⅠ期卵母细胞比率极显著高于10%组(P<0.01),而卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率10%组显著高于20%和30%组(P<0.01);TCM-199培养体系与bTCM-199(10%)培养体系2组减数分裂各阶段卵母细胞比率基本一致,前者卵母细胞核成熟(处于MⅡ期)率与后者差异不显著(P>0.05)。与bTCM-199(10%)培养体系相比,TCM-199培养体系成分简单,是理想的牛卵母细胞体外成熟培养体系。     

Ghrelin对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

该研究旨在探讨外源Ghrelin对绵羊卵母细胞体外成熟的调控作用。在成熟培养液中分别添加浓度为0、100、200和300ng/m L的Ghrelin,进行绵羊卵母细胞体外培养,成熟培养24h,观察统计处于MII期的细胞数目。选择最佳添加浓度,在体外成熟培养0、6、8、14、16、24h,通过Hoechst33342染色持续检测卵细胞中细胞核成熟随时间变化,并对不同培养时期细胞进行实时荧光定量PCR检测,以证明细胞质量相关基因的相对表达量。成熟培养24h时,添加0、100、200、300 ng/m LGhrelin组卵母细胞成熟率分别为:63.7%(220/345)、69.4%(230/332)、85.6%(270/316)、75.9%(231/305)。200ng/m L Ghrelin组显著高于对照组(P0.01),其余组并未显著高于对照组(P0.05);染色证明:200ng/m L Ghrelin组于成熟培养0h、6h、14h、16h到达GV、GVBD、MI、MII期(P0.05);实时荧光定量PCR证明:对卵母细胞成熟GV、GVBD、MI、MII期,Ghrelin受体基因GH-SR-1a和卵母细胞质量相关基因OCT-4、GLUT1和IFNT的相对表达时间提前,但并不显著影响这些基因的表达水平。外源Ghrelin参与了绵羊卵母细胞的体外成熟调控,可在没有改变其成熟过程的前提下加速卵母细胞的体外成熟过程,但对绵羊卵母细胞的质量和进一步发育相关的基因的表达没有明显影响。     

抗冻剂、CB和离心极化对猪GV期卵母细胞冷冻效率的影响

【目的】评价2种冷冻保护剂(EDS和EPS)、细胞松弛素B(CB)和离心极化处理对猪GV期卵母细胞冷冻效果的影响。【方法】分别应用EDS和EPS 2种冷冻保护剂、CB(设5.0,7.5和10.0μg/mL 3个水平)和离心极化处理,对猪卵母细胞进行玻璃化冷冻保存,解冻后用台盼蓝染色法和Hochest33342染色法分析猪卵母细胞存活率及随后的成熟率。【结果】EPS组和EDS组冻融后的猪卵母细胞存活率和成熟率均无显著差异。以EPS作冷冻保护剂时,冻融后裸卵组的存活率显著高于COCs组(P<0.05)。7.5μg/mL CB处理组的裸卵存活率显著高于对照组(P<0.05);7.5μg/mL CB+离心极化处理组裸卵存活率与成熟率均显著高于CB单处理组和对照组(P<0.05)。【结论】同等条件下,猪GV期裸卵的冷冻效果好于COCs;CB或CB+离心极化均能改善GV期猪卵母细胞冷冻效果。     

投喂频率对星斑川鲽幼鱼生长和体组成影响的初步研究

研究了不同投喂频率1次/d、2次/d(周日不投)、2次/d和3次/d对星斑川鲽幼鱼生长、摄食率、饲料利用情况和全鱼及其组织组成的影响。结果表明:随着投喂频率的增加,星斑川鲽幼鱼的增重率、特定生长率和摄食率显著升高,2次/d(周日不投)组增重率和特定生长率显著高于1次/d组(P<0.05),但与2次/d和3次/d组无显著性差异(P>0.05);2次/d(周日不投)组饲料转化率和蛋白质效率稍高于2次/d和3次/d组,但各组之间差异不显著(P>0.05);全鱼水分和粗蛋白含量不受投喂频率的显著影响(P>0.05),全鱼粗脂肪含量2次/d(周日不投)组显著低于2次/d组(P<0.05),全鱼灰分含量1次/d组显著高于2次/d(周日不投)组和3次/d组(P<0.05),其余各组差异不显著(P>0.05);肌肉水分含量随投喂频率增加而显著降低(P<0.05),肌肉粗蛋白和粗脂肪含量与水分含量呈负相关,肌肉灰分含量1次/d组显著高于2次/d组(P<0.05),其余各组无显著性差异(P>0.05);肝脏水分和粗脂肪含量各组之间无显著性差异(P>0.05),肝脏粗蛋白含量1次/d组显著低于其余各组(P<0.05),其余各组之间...     

维生素E添加水平对笼养生长蛋鸭血清生化指标的影响

选择满4周龄、健康的、平均体重一致的金定蛋鸭216只,随机分为6个处理组,每个处理组设6个重复,通过在日粮中添加不同水平的VE(0、10、15、20、40、100 IU·kg-1)观察其对5～12周龄蛋用型育成鸭血清生化指标的影响。结果表明,VE水平的升高对血清无机离子含量及乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶的活性均无显著影响(P>0.05);血清VE浓度随其添加水平的增加而增加,血清VE含量在一定范围内可反映饲粮VE供应状况;白蛋白、总蛋白及球蛋白随日粮VE水平增加而增加,以VE添加量为15和20 IU·kg-1时最高,但差异不显著(P>0.05);日粮添加15和20 IU·kg-1 VE组血清GH显著高于对照组(P<0.05),而血清皮质醇浓度与VE水平呈负相关,添加15和20 IU·kg-1 VE组与其他各组相比有较明显下降;添加20 IU.kg-1 VE组对血清T3、T4升高较明显,但各组间差异不显著(P>0.05),而添加高水平的VE可导致其激素代谢紊乱,使机体内环境处于不平衡状态。     

L-肉碱强化卤虫对鲤鱼开口苗脂肪酸组成和C/N比率的影响

【目的】研究L-肉碱强化卤虫对鲤鱼开口苗脂肪酸组成和C/N比率的影响,为鲤鱼开口苗的饲养提供参考。【方法】分别用质量浓度为0(对照),1,100,1 000 mg/L的L-肉碱强化卤虫无节幼体(Artemiasp.)12和24h,然后投喂给鲤鱼(Cyprinus carpio)开口苗,21 d后测定鱼苗的脂肪酸组成和C/N比率。【结果】投喂L-肉碱强化12 h的卤虫时,1 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的∑C14-24脂肪酸含量、饱和脂肪酸含量和单不饱和脂肪酸含量较对照组显著降低(P<0.05);1 000 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的单不饱和脂肪酸含量较对照组显著升高(P<0.05);L-肉碱对鲤鱼开口苗的多不饱和脂肪酸含量、∑n-3+∑n-6和∑DHA+EPA含量均无显著影响(P>0.05);1 000mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的C/N比率显著低于对照组和1 mg/L L-肉碱处理组(P<0.05)。投喂L-肉碱强化24 h的卤虫时,1和100 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的∑C14-24脂肪酸和饱和脂肪酸含量较对照组显著降低(P<0.05),但2组之间差异不显著(P>0.05);1 000 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的∑C14-24脂肪酸和饱和脂肪酸含量较对照组显著升高(P<0.05);1 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的单不饱和脂肪酸含量较其他3组显著降低(P<0.05),多不饱和脂肪酸、∑n-3+∑n-6和∑DHA+EPA含量与对照组差异不显著(P>0.05);100 mg/L和1 000 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的多不饱和脂肪酸、∑n-3+∑n-6和∑DHA+EP A含量较对照组显著升高(P<0.05),且2组之间差异显著(P<0.05);1,100 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的C/N比率较对照组和1 000 mg/L L-肉碱处理组显著降低(P<0.05)。【结论】本试验条件下,以质量浓度100 mg/L L-肉碱强化卤虫24 h后再投喂鲤鱼开口苗,可显著改善鲤鱼开口苗的脂肪酸组成和C/N比率。     

低温和维生素E对育成期笼养蛋鸭生产性能及血液生化指标的影响

试验选用健康的13周龄金定母鸭144只,采用2×3两因素有重复试验设计,研究低温及维生素E(VE)对育成期(13～18周龄)笼养蛋鸭生产性能及生化指标的影响。研究结果表明,①低温使日采食量和饲料转化率显著升高,日增重显著降低(P<0.05)。VE水平对日采食量影响不显著(P>0.05),但是显著提高了日增重(P<0.05),使饲料转化率显著降低(P<0.05)。②低温对总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)影响不显著(P>0.05),但添加VE使TP浓度显著提高(P<0.05);低温有使尿酸(URIC)、尿素氮(BUN)升高的趋势,但差异不显著(P>0.05),VE水平的提高使BUN浓度显著降低(P<0.05)。③低温使肌酸激酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、谷丙转氨酶活性显著升高(P<0.05);VE水平提高显著降低谷丙转氨酶活性(P<0.05),对其它酶活性的影响不显著,但有降低趋势(P>0.05)。④低温对T3、T4影响不显著(P>0.05),但有使T3升高的趋势;VE水平提高使T3显著降低(P<0.05)。低温使孕酮(P)浓度显著降低(P<0.05),VE水平的提高使孕酮浓度显著上升(P<0.05)。     

亚硝酸盐对越冬红螯螯虾生理指标及肠道菌群的影响

以越冬红螯螯虾为对象,探讨其在不同亚硝酸盐浓度下的生理指标及肠道菌群变化情况。采用常规生物急性毒性试验法,得到亚硝酸盐胁迫下红螯螯虾的96 h半致死浓度为22.0 mg/L,安全浓度为2.2 mg/L。设置4个实验组,分别为A组(0 mg/L)、B组(0.5 mg/L)、C组(2.3 mg/L)和D组(5.0 mg/L),胁迫6周后取样检测。结果表明:各组成活率、肥满度、肝体指数无显著性差异(P>0.05),但D组成活率、体质量增加率、体长增加率最低。随亚硝酸盐浓度的增加,肝小管排列趋于混乱且大小出现差异,肝小管间结缔组织随之减少,产生空泡化,在D组中变化尤为明显。SOD活性随亚硝酸盐浓度升高而降低,在肝胰腺中,A组显著高于其他3组(P<0.05),D组显著低于其他3组(P<0.05);在肌肉中,A组显著高于C、D组(P<0.05),D组显著低于A、B组(P<0.05)。MDA活性随亚硝酸盐浓度升高而升高,在肝胰腺中,4组均无显著差异(P>0.05);在肌肉中,A组显著低于C、D组(P<0.05)。免疫相关指标均随亚硝酸盐浓度升高而降低,在肝胰腺中,4组ACP、AKP活性均存在显著性差异(P<0.05),A组最高,D组最低;在肌肉中,A组ACP活性显著高于其他3组(P<0.05);4组AKP活性均存在显著性差异(P<0.05),A组最高,D组最低;各组UL活性无显著性差异(P>0.05)。能量代谢指标TG活性随亚硝酸盐浓度升高而降低,A组显著高于D组(P<0.05)。亚硝酸盐胁迫在一定程度上提高了肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的比例,且菌群多样性D组最低,A组最高,亚硝酸盐导致了肠道菌群多样性的下降。     

不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育的影响

[目的]系统比较了在成熟培养液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活胚的发育率和囊胚质量,同时比较了成熟培养液和胚胎培养液添加Leptin对孤雌激活胚发育的影响。[方法]成熟培养液中添加不同浓度Leptin对猪卵母细胞体外成熟和早期孤雌发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目,并且研究了成熟培养液和胚胎培养液单独或联合添加Leptin对猪早期孤雌胚胎发育能力的影响及囊胚的内细胞团细胞数目。[结果]成熟培养液中添加不同浓度Leptin(0,10,50,100和200 ng/ml),体外成熟44 h,卵母细胞核成熟率统计分析差异不显著(P>0.05);将核成熟卵母细胞进行化学激活,第2天胚胎卵裂率统计分析差异不显著(P>0.05),但100ng/ml组与其他组第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数差异显著(P<0.05);成熟液添加Leptin 100 ng/ml、胚胎培养液添加Leptin 10 ng/ml与其他组第7天的囊胚率及囊胚的内细胞团细胞数差异显著(P<0.05)。[结论]Leptin对卵母细胞成熟和孤雌胚胎发育能力上有相辅相成的作用。     

孕马血清促性腺激素对狗卵母细胞体外核成熟的影响

[目的]研究孕马血清促性腺激素(PMSG;eCG)对狗卵母细胞体外成熟效果的影响。[方法]采用切割法收集卵巢表面卵丘卵母细胞复合体(COCs),并且随机分为4组,在添加不同浓度的PMSG的基础培养液(含有10%胎牛血清的DMEM)中,5%CO2,38.5℃培养箱内培养48 h。在含有0.1%透明质酸酶的D-PBS中用细小玻璃管剥离卵丘细胞从而获得裸卵,为了鉴别核成熟期,用4%甲醛溶液固定裸卵15 min,然后用10μg/ml Hoechst33342染色、压片,荧光显微镜下观察核形态。[结果]体外培养48 h后,添加PMSG处理组卵丘扩散明显,但发育到MⅠ-MⅡ的比率都没有显著差异(P(0.05)。100 IU/ml PMSG处理组GVBD期率显著低于对照组。[结论]添加PMSG改善了卵丘扩散的效果,但是没有提高核成熟率,需进一步改进狗卵母细胞体外成熟率的培养体系。     

磷酸二酯酶抑制剂对水牛卵母细胞体外成熟的影响

[目的]探讨磷酸二酯酶抑制剂米力农(milrinone)对水牛卵母细胞成熟的影响。[方法]水牛卵母细胞分成3组,分别在含0、50、100μmol/L的milrinone的成熟液中培养16 h后,每组的一半卵母细胞用来染色,检验核成熟情况;另一半卵母细胞再在不含milrinone的成熟液中培养12 h,挑选形态正常的卵母细胞受精后培养。[结果]添加50和100μmol/L milrinone的成熟液成熟的卵母细胞的生发泡破裂(GVBD)比率分别为25.9%和12.1%,显著低于对照组(76.9%);但另一半卵母细胞再培养、受精后试验组(50、100μmol/L mil-rinone)的分裂率(59.3%和61.2%)和囊胚率(35.9%和31.1%)与对照组(56.7%和28.8%)相比均无显著性差异(P0.05)。[结论]milrinone对水牛卵母细胞的成熟具有明显的抑制作用,成熟抑制解除后水牛卵母细胞仍可保持较高的发育潜能。     

卵巢皮质与输卵管上皮细胞对猪卵母细胞体外成熟与体外受精的影响

在猪输卵管上皮细胞（pOECs）与猪卵巢皮质细胞（pOCCs）共培养体系中进行猪卵子体外成熟（IVM）,研究比较了pOECs与pOCCs对猪卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精与胚胎发育的影响。结果显示：pOCCs或pOECs参与猪卵子体外成熟可显著提高卵丘扩散与MⅡ期卵子的比例（P<0.05）,然而GV期卵子的比例却没有显著减少（P>0.05）;pOCCs组内成熟卵子的GSH含量显著高于其余各组（P<0.05）,而GSH在pOECs组与对照组之间差异不显著（P>0.05）;尽管pOCCs和pOECs共成熟可显著降低多精入卵的比例（P<0.05）,但是受精率与雄原核形成率（MPN）在各组间却无显著差异（P>0.05）;pOCCs和pOECs共培养均可以显著提高卵裂率与囊胚发育率（P>0.05）,然而囊胚细胞数在处理组与对照组间没有显著性差异（P>0.05）。研究认为,pOCCs与pOECs共培养体系能显著提高猪卵母细胞IVM质量,降低多精入卵的发生,并提高囊胚发育率。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).     

山羊卵母细胞冷冻保存技术研究

检测不同冷冻保护剂(PROH、DMSO、甘油)及不同冷冻方法(程序冷冻法、OPS玻璃化冷冻法)对山羊卵母细胞发育情况.结果表明,PROH(GV:85.3%;IVM:85.4%)和DMSO(GV:82.2%;IVM:85.2%)对各期卵母细胞的正常形态保护能力无显著性差异(P>0.05),但均显著高于甘油(GV:70.4%;IVM:75.5%)(P<0.05).以PROH作为冷冻保护剂,其GV期卵母细胞成熟率(27.2%)均显著高于DMSO(18.9%)和甘油(10.1%)(P<0.05);IVM卵母细胞受精率(25.6%)也显著高于DMSO(18.7%)和甘油(14.1%)(P<0.05).常规程序冷冻和OPS玻璃化冷冻法,GV期卵母细胞的成熟率分别为21.3%和29.9%,受精率分别为6.3%和9.1%;培养9 h卵母细胞的成熟率分别为20.5%和32.0%,受精率分别为5.1%和10.7%;IVM卵母细胞的受精率分别为21.4%和30.3%,2-细胞率分别为4.8%和10.5%;不论是常规程序冷冻还是OPS玻璃化冷冻,GV期和培养9 h卵母细胞的成熟率和受精率差异不显著(P>0.05),但受精率均低于IVM卵母细胞(P<0.05).结果显示,PROH作为山羊卵母细胞的冷冻保护剂,其保护作用明显优于DMSO及甘油;OPS玻璃化冷冻效果要明显优于常规程序法.     

川芎嗪和小檗碱对猪卵母细胞体外成熟效果的影响

以mTCM-199添加抗生素为对照组,以分别添加0．5μg／mL川穹嗪（1igustrazine,Lig）和0．1μg／mL小檗碱（berberine,BR）为试验组,初步探讨川芎嗪、小檗碱对猪卵母细胞体外成熟效果的影响,以期提高猪卵母细胞体外成熟率。试验结果表明：以卵丘扩散和第一极体排出率分别作为猪卵母细胞体外成熟的判断标准,Lig组和BR组均显著高于对照组（P〈0．05）,Lig组和BR组间无显著差异（P〉O．05）。结论：川芎嗪和小檗碱对猪卵母细胞体外成熟具有一定的促进作用。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响

[目的]为绵羊克隆试验中卵母细胞的体外成熟及去核时间提供参考。[方法]利用盲吸法结合荧光显微镜检查,对绵羊不同成熟时间卵母细胞去核的效率及其后续重构胚的发育进行对比。[结果]体外成熟培养19~21 h的绵羊卵母细胞在成熟率上显著高于体外成熟培养16~18 h(P(0.05),在去核成功率上显著高于体外成熟培养22~24 h(P(0.05);3个试验组在卵裂率、囊胚率上差异不显著(P(0.05),但是体外成熟培养19~21 h的试验组囊胚平均细胞数要显著高于其他2组(P(0.05)。[结论]体外成熟培养19~21 h的卵母细胞较适于作为受体细胞进行绵羊核移植,可以显著提高囊胚的质量。     

EGF和β-巯基乙醇对羔羊卵母细胞体外受精和体外发育的影响

[目的]为优化幼畜卵母细胞体外培养体系提供理论基础。[方法]研究在成熟液中添加EGF和β-巯基乙醇对绵羔羊卵母细胞受精和卵裂、囊胚情况的影响,并与成年绵羊卵母细胞进行比较。[结果]在成熟液中添加不同浓度的EGF对羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率无显著影响(P0.05)。添加不同浓度的β-巯基乙醇可以提高羔羊卵母细胞囊胚率,其中添加100μmol/Lβ-巯基乙醇有显著影响(P0.05),但对卵裂率影响不显著(P0.05)。羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率均显著低于成年羊(P0.05)。添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞正常受精率(P0.05),且与成年羊卵母细胞受精率差异不显著(P0.05)。未添加β-巯基乙醇多精入卵率显著高于成年羊(P0.05),而添加100μmol/L的β-巯基乙醇多精入卵率与成年羊差异不显著(P0.05)。成熟液中不添加β-巯基乙醇时未受精率(20.0%)高于成年羊组(12.3%)和β-巯基乙醇(13.5%),但差异不显著(P0.05)。[结论]添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞发育能力,提高正常受精的比例并减少多精子受精的发生,但羔羊卵母细胞发育能力仍显著低于成年羊。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响(英文)

[Objective] The study aimed to provide references for the time of oocyte maturation in vitro and enucleation in the course of sheep nuclear transfer(NT).[Method] Compared the effects of different maturation time of oocytes on enucleation efficiency and reconstructed embryo development by means of blind enucleation and fluorescence microscopy.[Result] Treatment of IVM(in vitro maturation)19-21 h was significantly higher than IVM 16-18 h treatment in oocyte maturation rate(P<0.05)and was significantly higher than IVM 22-24 h treatment in enucleation rate(P<0.05).Three treatments had no significant difference in cleavage rate and blastocyst rate(P>0.05),but IVM 19-21 h treatment was significantly higher than the other 2 treatments in average cell number of blastocysts(P<0.05).[Conclusion] The appropriate in vitro maturation time of oocytes was 19-21 h for sheep nuclear transfer,which could significantly improve the quality of blastocysts according to the cell number per blastocyst(P<0.05).