免疫组化检测鸭疫里默氏杆菌(RA)方法的建立

本文建立了间接免疫组化法(HRP-间接法)检测组织中的鸭疫里默氏杆菌,并从固定液、抗原修饰方法、洗涤液和洗涤方法、复染液、粘片剂几个方面进行了优化,其结果为以PLP为固定液,以APES为粘片剂,以0.3%的甲醇-H2O2在湿盒中室温下孵育20min消除组织中的过氧化物酶及假过氧化物酶活性,兔抗RAIgG与羊抗兔-HRP的稀释比例均为1∶25,以4℃过夜作兔抗RAIgG的孵育条件,以10%白蛋白0.05%Tween-20pH7.4的PBS湿盒内室温孵育60min处理组织中非特异性染色因素;以TBST为洗涤液,空气振荡器70转/min摇洗2次,每次10min洗涤切片;以0.5%甲苯胺蓝作为复染液。此方法具有特异性强,无假阳性,经济,无需特殊仪器,简单易行的优点。     

中国对虾（Penaeus chinensis）精子做载体将生长激素基因导入受精卵的研究

本实验采用卡介苗注射器将羊生长激素基因溶液注射到亲虾纳精囊中，以精子为载体，携带基因导入对虾受精卵，而达到转基因对虾的目的。经ＰＣＲ检测表明：１．经ＳＴＥ（ｐＨ８．０）第一次洗涤精子的洗涤液呈阳性信号；第２－４次的洗涤液呈阴性；２．多次洗涤后的精子抽提的ＤＮＡ呈阳性；３．检测 １０个样品１００尾仔虾中有一个样品呈阳性结果，转基因比率在 １％以上。同时斑点杂交结果也印证了上述结果。     

中国对虾精子做载体将生长激素基因导入受精卵的研究

本实验采用卡介苗注射器将羊生长激素基因溶液注射到亲虾纳精囊中，以精子为载体，携带基因导入对虾受精卵，而达到转基因对虾的目的。经ＰＣＲ检测表明：１．经ＳＴＥ（ｐＨ８．０）第一次洗涤精子的洗涤液呈阳性信号；第２－４次的洗涤液呈阴性；２．多次洗涤后的精子抽提的ＤＮＡ呈阳性；３．检测１０个样品１００尾仔虾中有一个样品呈阳性结果，转基因比率在１％以上。同时斑点杂交结果也印证了上述结果。     

扇贝血细胞胞内酶活性的细胞学观察

分别对海湾扇贝、虾夷扇贝、栉孔扇贝的3种血细胞胞内酶：碱性磷酸酶(ALP)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)进行了免疫细胞化学研究,并对血细胞酶反应阳性率作了统计。结果表明,3种扇贝血细胞ALP阳性率相差不大,海湾扇贝为46．6％,虾夷扇贝为42．4％,栉孔扇贝为36．8％;3种扇贝血细胞POD阳性率相差较大,栉孔扇贝阳性率高达50．2％,海湾扇贝为44．2％,虾夷扇贝仅为17．2％。3种扇贝血细胞PO孵育反应后,由于海湾扇贝、虾夷扇贝PO反应活性很低,瑞氏染液复染后,无法区分阴性、阳性细胞。实验中仅对栉孔扇贝PO阳性率进行了统计,栉孔扇贝血细胞PO阳性率为39．3％。     

贻贝粉酶解液中系统提取分离氨基酸

本文报道了以脱脂贻贝粉为原料，采用酶解法从其酶解液中分离，提取及纯化复合氨基酸和六种单一氨基酸的工艺。确定了贻贝粉以胃蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶和胰蛋白酶联合的酶解工艺，采用超滤方法去除酶解液中未水解的蛋白质等大分子物质及进行脱色处理。将超滤液通过７０１＃［ＣＯ＝］型碱性阴离子交换树脂及［Ｈ＋］型１×２５强酸性阳离子交换树脂脱盐，得到的脱盐液经真空浓缩、结晶、洗涤和烘干得复合氨基酸粉末，得率为２０％左右（相对子贻贝粉，ｗ／ｗ，下同）。将超滤液通过活性炭柱吸附苯丙氨酸和酪氨酸，再用洗脱液洗下，经浓缩、结晶、洗涤和烘干得单一氨基酸成品，Ｌ－苯丙氨酸得率为２．４５％，Ｌ－酪氨酸得率为１．２１％。活性炭柱的通过液经７３２强酸性阳离子交换树脂柱及７１７强碱性阴离子交换树脂柱组吸附、分离、洗脱得纯 Ｌ－精氨酸组分、纯 Ｌ－谷氨酸组分、Ｌ－亮氨酸及Ｌ－缬氨酸组分。再经赶氨、浓缩、结晶、洗涤和烘干得成品，得率分别为３．０１％、１．０２％、１． ４６％及 １． ３４％。单一纯化的氨基酸产品，经氨基酸自动分析仪定性、定量测定及红外光谱分析和通过自动指示旋光仪测定其比旋度进行鉴定，证实确为本物质。复合氨基酸产品中游离氨基酸含量为９０．     

鲢酶解物对羟自由基的清除作用

通过测定酶解物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果，从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和复合蛋白酶5种酶中，筛选出木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作为酶解鲢制备具有较高清除羟自由基活性酶解物的理想水解酶；用正交试验L9(3^4)对两种酶的水解条件进行了优化，并对最佳酶解条件下得到的酶解物进行Sephadex G-25凝胶柱分离，洗脱液分别在波长280nm处比色，测定酶解物中主要抗氧化活性肽的分子量分布。结果表明，木瓜蛋白酶在温度50℃、酶解时间15min、pH=6．5、酶质量分数1．50％、底物：水=1：2的水解条件下，酶解物对羟自由基清除效果较好，清除率为88．2％；胰蛋白酶在温度55℃、酶解时间60min、pH=8．0、酶质量分数0．25％、底物：水=1：2的水解条件下，酶解物对羟自由基清除效果较好，清除率为84．2％。木瓜蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时有最大羟自由基清除率峰，清除率为95．1％，在最大峰处酶解物中活性肽的分子量为2．2kDa；胰蛋白酶酶解物在最大洗脱峰时也有最大羟自由基清除率峰，其清除率为89．6％，该峰处活性肽的分子量为14．2kDa。     

草鱼脂肪细胞提取与保存的研究

无菌条件下取草鱼腹腔脂肪组织,经胶原蛋白酶消化后获取脂肪细胞,通过台盼兰染液染色测定细胞活力以及统计学的方法,对脂肪细胞提取所涉及的消化时间、钢筛规格、离心速度、离心时间等4个重要因素以及脂肪细胞提取后的保存条件进行研究。结果表明,提取草鱼脂肪细胞的最佳条件为:消化时间30min、200目钢筛过滤脂肪细胞液、离心速度为1 000 r/min、离心时间为10 min。草鱼脂肪细胞在室温(25℃)下保存2 d内细胞活率在94.7%以上,而4℃下保存10min后活率已下降至71.1%。     

应用间接荧光抗体技术检测林蛙嗜水气单胞菌

以感染嗜水气单胞菌的林蛙各组织脏器为抗原,以热灭活的嗜水气单胞菌为免疫原,免疫家兔制备兔抗嗜水气单胞菌血清为第一抗体,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔IgG作为二抗,建立了间接荧光抗体试验方法.分别采用2.5%戊二醛5 min、甲醇10 min、冷丙酮1 h 3种固定方法固定抗原,然后滴加不同稀释倍数的兔抗嗜水气单胞菌血清、羊抗兔IgG-FITC,于荧光显微镜下观察.结果表明,2.5%戊二醛固定腹水5 min,兔抗血清抗体效价为 1:80,荧光二抗的最佳稀释倍数为1:4000.     

海洋低温蛋白酶生产菌YS-9412-130原生质体的制备与再生

以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象，从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究。结果表明，在相同条件下，第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86．9％、70．3％、66．8％、63．4％、60．2％，再生率分别为10．5％、18．6％、17．9％、18．2％、17．8％；取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体，原生质体的形成率分别为72．1％、70．4％、60．5％，再生率为13．4％、18．9％、10．4％；溶菌酶浓度为2．5mg／mL、5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL，酶解60min，原生质体的形成率分别为40．6％、70．8％、81．8％、95．6％，原生质体的再生率为19．0％、19．2％、19．0％、10．6％；使用10mg／mL溶菌酶酶解YS-9412-130菌30min、60min、90min、120min，原生质体的形成率分别为30．8％、81．3％、81．7％、82．9％，原生质体的再生率分别为19．2％、19．3％、16．9％、11．2％；在细菌培养液中添加终质量浓度为5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL和40mg／mL的甘氨酸，培养该菌16h后制备原生质体，原生质体的形成率分别为81．0％、81．1％、90．3％、90．8％、90．6％，再生率为19．1％、19．0％、19．3％、12．0％、9．0％；EDTA对原生质体的形成稍有促进作用，但作用超过30min会影响原生质体的再生；分别以0．6mol／L Kcl、0．3mol／L KCl＋0．3mol／L蔗糖、0．6mol／L蔗糖作为稳定剂，原生质体的再生率分别为10．9％、19．6％、25．9％。结论认为，YS-9412-130原生质体制备的最佳条件为选用第2代YS-9412-130菌，在培养基中添加终质度浓度为10mg／mL的甘氨酸培养16h后，再将菌体置于含有0．05mol／LEDTA的高渗溶液中30℃预处理30min，用10mg／mL溶菌酶，30℃酶解60min，再用0．6mol／L蔗糖作为原生质体再生培养稳定剂，比较适合于YS-9412-130原生质体的制备与再生。这一试验结果将为通过原生质体技术对YS-9412-130菌进行遗传改良提供重要参数。     

碱性脂肪酶酶解鲐碎肉脂肪的研究

采用扩展青霉（Penicillium expansum)PF868产生的碱性脂肪酶为酶源，酶解脱酯鲐碎肉，其最适条件为：32－34℃，pH9．3，酶活浓度40u/ml，碎肉的质量与酶液体积比为1g:5ml，脱脂时间50min。鲐碎肉的干基残脂率低于4．0％。     

鳜鱼粘孢子虫病感染一例

哈尔滨市水产研究所品种室最近几年养殖的鳜鱼亲鱼，发生了粘孢子虫病，感染率达到68％，部分亲鱼死亡，造成严重的经济损失。对该病进行了研究，现将研究结果报告如下：1材料与方法1．1发病情况调查发病池塘为哈尔滨市水产研究所养殖鳜亲鱼的一口0．2hm2鱼池，对死亡的亲鱼进行目检和镜检，对感染率和死亡率进行统计。1．2目检与测量观察鳃部症状，胞囊形状、颜色，测量大小。1．3病原体处理病原体取自亲鱼的鳃部。l）病原体的处理与保存方法按《鱼病调查手册》之方法进行。2）组织病理切片制备：用Bouin氏液固定，石蜡包埋切片，切片厚度…     

牛蛙肥大细胞中类胰蛋白酶的证实

类胰蛋白酶已被作为人类和某些哺乳动物组织中肥大细胞的标志.为检测蛙科动物肥大细胞胞浆中是否含有类胰蛋白酶,采用了小鼠抗人类肥大细胞类胰蛋白酶单克隆抗体AAl通过间接免疫过氧化物酶技术,对牛蛙的舌,肠和脾以及人食道鳞癌组织(用作阳性对照)石蜡切片中的肥大细胞进行染色.首次在Bouin氏液固定的牛蛙组织中证实了牛蛙肥大细胞胞浆中类胰蛋白酶的存在,且单克隆抗体AA1与牛蛙肥大细胞中的类胰蛋白酶可获得良好的交叉反应.类胰蛋白酶阳性细胞多位于牛蛙肠黏膜固有层,少量见于肠绒毛基底部及舌粘膜下腺体周围,而未见于脾组织中.人食道癌间质中可见多量类胰蛋白酶阳性细胞.研究证实,与人类肥大细胞相似的是牛蛙肥大细胞也含有这种特有的类胰蛋白酶,牛蛙有可能是用作肥大细胞生物学研究的理想实验动物.     

大口黑鲈肝细胞中恩诺沙星的消除及其代谢酶活性的测定

建立了反相高效液相色谱法检测大口黑鲈(Micropterus salmoides)原代肝细胞中恩诺沙星(Enrofloxacin,EF)代谢情况的方法,并通过其代谢产物环丙沙星(Ciprofloxacin,CF)来间接反映恩诺沙星N-脱乙基酶的活性。采用二氯甲烷提取细胞中的药物,正己烷去脂,反相高效液相色谱法测定其中的药物浓度。经测得该方法样品回收率均大于80.28%,日间变异系数小于5.54%。通过EF与大口黑鲈肝细胞进行孵育,发现EF在细胞中的消除方程为C=50e-0.0008t,消除半衰期(T1/2)为86.63 h,消除速率常数(K)为8×10-4/h。对孵育过程中的酶活研究发现最佳孵育时间为45 min,其酶活性为0.25μg/(min.mg),酶动力学参数中最大反应速率(Vmax)为0.29μg/(min.mg),米氏常数(Km)为22.37μg/mL,内在清除率(Clint)为0.01 mL/(min.mg)。结果表明,该酶与底物结合力不强,酶促反应强度较弱,EF在大口黑鲈肝细胞中的代谢较缓慢。     

日本鲐不同脱脂工艺的比较

重点对日本鲐鱼片和鱼糜分别用扩展青霉PF868产生的碱性脂肪酶酶解法与漂洗压榨的理化法脱脂工艺效果进行比较，研究结果表明，对鲐鱼片，理化法（残脂率11．01％，按干基计，下同）优于酶解法（残脂率19．48％），而对鱼糜，酶解法（残脂率3．49％）大大优于理化法（残脂率7．52％），筛选出的脂肪酶的适宜酶解条件为pH8.7-9.2，温度32℃，酶液活度40U.mL^-1, 酶液与底物比为5：1，脱脂时间50min，鲐鱼糜在上述酶解条件下，残脂率可达4％以下，而采用理化法脱脂，残脂率只能达到8％左右，无论酶法还是理化法，均难使鲐鱼片残脂率达到10％以下。     

低氧–复氧对脊尾白虾呼吸代谢和抗氧化酶活力的影响

以静室呼吸耗氧–复氧为实验组,持续充气组为对照组。于0、1、2、4、5 h及复氧1、4、8 h检测并分析了水体溶解氧(DO)和脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)组织主要呼吸代谢及抗氧化酶活力。结果显示,随着时间的延长,实验组DO不断降低,且显著低于对照组(P<0.05)。脊尾白虾鳃、肝胰腺和肌肉细胞色素C氧化酶(CCO)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活力降低;乳酸脱氢酶(LDH)、延胡索酸还原酶(FRD)活力升高,SDH/FRD值降低。复氧后,3种组织SDH、LDH和FRD活力恢复至对照组,肌肉CCO活力升高,在复氧8 h时低于对照组(P<0.05);SDH/FRD值升高。随着时间的延长,3种组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽S转移酶(GST)活力均先升后降,但肝胰腺的过氧化物酶(POD)活力降低,而在鳃和肌肉中呈波动性变化;复氧后,3种组织SOD、CAT、GPX和GST活力均恢复至对照组水平,但鳃和肌肉的POD在复氧8 h时均低于对照组(P<0.05)。研究表明,随着DO的降低,脊尾白虾有氧代谢逐渐降低,无氧代谢逐渐升高。复氧后,有氧代谢能力又逐渐恢复。上述抗氧化酶可能在脊尾白虾应对低氧-复氧中产生的氧化损伤发挥着重要作用。     

不同质量浓度二氧化氯对三种河蟹致病菌的杀灭效果

以1％的Na2S2O3为中和剂，测定了五种质量浓度100，20，4，0．8，0．16mg/L ClO2溶液对副溶血弧菌、毛霉亮发菌以及嗜水气单胞菌等河蟹致病菌的杀灭效果。同时以蛋白胨质量为材料测定了有机物对ClO2杀菌效果的影响。结果表明：0．8mg/L的ClO2作用15min、0．16mg/L的ClO2作用30min可有效杀灭三种致病菌；蛋白胨浓度为25mg/L时，对ClO2的杀菌效果几乎没有影响，蛋白胨质量浓度为25mg/L时，ClO2作用15min的杀菌率下降为97．5％，蛋白胨质量浓度为625mg/L时下降为95．5％。     

牡蛎酶解工艺条件的研究

比较选择了牡蛎酶解的有效蛋白酶，研究了牡蛎酶解的工艺中各主要因素对提取率的影响。结果表明，A．SI，398枯草芽跑杆菌中性蛋白酶和胰蛋白酶对牡蛎有较好的酶解效果。酶解温度、加酶量、底物浓度对酶解提取率影响较大。确定了牡蛎酶解的最佳工艺条件为：酶解温度50℃；加酶量0．5％；底物浓度6％；酶解时间2h。     

甲壳胺和N－亚甲基甲壳胺对贻贝酶解液中氨基酸吸附性研究

报道了甲壳胺（ｃｈｉｔｏｓａｎ）及Ｎ－亚甲基甲壳胺（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｃｈｉｔｏｓａｎ）对贻贝酶解液中各种氨基酸吸附情况。在一定ｐＨ（６．０）及浓度（９４５ｍｇ／ｋｇ）下：（１）甲壳胺对贻贝酶解液中各种氨基酸均有吸附，其中，对Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ａｓｐ及Ｇｉｕ的吸附率较高；（２）Ｎ－亚甲基甲壳胺对贻贝酶解液中Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅｕ，Ｍｅｔ及Ｌｙｓ吸附率较高：（３）甲壳胺和Ｎ－亚甲基甲壳胺对贻贝酶解液中总氨基酸的吸附率分别为１２．９４％和１１．７０％。     

鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的制备研究

文章探讨了以鲢（Hypophthalmichthysmolitrix）鱼骨为原料,采用风味蛋白酶酶解制备骨胶原多肽水解液,剩余骨渣经乳酸提取制备骨粉酸解液（钙液）,研究其通过螯合制备鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺条件。分析了酶解时间对鲢鱼骨蛋白酶解产物产品品质和功能特性（溶解性和热稳定性）的影响以及采用乳酸提取鲢鱼骨中钙时提取温度对钙溶出率的影响,并以螯合率为指标,考察pH、时间、温度和多肽液与钙液体积比对螯合反应的影响。结果表明,在温度50℃,按原料鱼排质量0．09％加入风味蛋白酶酶解30min制备出的鲢鱼骨胶原多肽具有良好的产品品质和功能特性;乳酸提钙时提取温度对钙溶出率没有显著性影响（P〉0．05）;在pH8、温度25℃条件下,多肽液与钙液体积比1：1反应40min得到的鲢鱼骨胶原蛋白螯合钙螯合率最高（85．24％）。     

JW活菌酶的作用机理及在畜禽饲料中的应用效果

酵母培养物含有丰富的维生素、酶、其它营养物质及一些重要的辅助因子。以酵母培养物、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、酸性蛋白酶等为主要组成成分的“JW活菌酶”在仔猪非常规饲料(15％次粉、5％麦麸替代20％的玉米)中添加0．1％时，日增重比对照组提高14．3％，比酶制剂组提高4.35％、饲料利用率比对照组提高3.8％～7.5％，比市售酶制剂组提高0．4％；在仔猪常规饲料中添加0.1％的JW活菌酶试验组比对照组日增重提高8，5％，饲料报酬提高6％；在蛋禽浓缩料中添加0.1％的JW活菌酶，试验组比对照组产蛋率提高0.43％，饲料利用率提高6．38％。