吐鲁番地区葡萄生长期果实腐烂病研究初报

通过葡萄果实腐烂病田间发病情况调查与症状观察,并对发病果穗进行病原分离、培养和回接试验,结果表明,葡萄果实腐烂病的病原是 Aspergillus niger v. Tiegh,其菌落呈黑褐色,分生孢子头球形,直径200～500 μm,分生孢子梗壁光滑,带黄色。顶囊球形或近球形,直径35～70 μm,褐黄色,全部表面可育;产孢结构双层,瓶梗8～10（~12）μm×2～3 μm。分生孢子球形或近球形,直径3～5 μm,孢子壁表面粗糙,有的生有小疣。     

进境哈萨克斯坦向日葵种子中向日葵黑茎病菌的鉴定

自进境哈萨克斯坦向日葵种子中,采用常规平板分离法获得1株疑似向日葵黑茎病菌Plenodomus lindquistii菌株LL4,通过生物学性状、ITS序列测定和比对分析及致病性测定等方法对其进行了鉴定。结果表明,该病菌在PDA平板上培养初期菌丝无色,分隔分枝多,后期菌丝褐色或深褐色,常膨大;分生孢子器暗褐色,分散或聚集,球形、近球形或不规则形,大小为71.2~361.8μm;分生孢子形态变化较大,无色,单孢,肾形至椭圆形,大小为3.6~8.2μm×2.2~3.7μm,常含有2个油球;培养期间未见有性阶段。基于ITS序列分析比对发现,菌株LL4与Gen Bank中多个向日葵黑茎病菌分离物序列同源性达99%以上,系统进化树显示其与其它向日葵黑茎病菌分离物聚在同一个分支。菌株LL4可侵染向日葵根茎部,造成典型黑茎病症状。表明分离获得的菌株LL4为向日葵黑茎病菌P.lindquistii。     

法国向日葵种子中向日葵黑茎病菌的首次截获与检测

从法国进境向日葵种子中分离到3株疑似向日葵黑茎病的菌株,对所有菌株进行形态学、致病性测定和分子序列比对分析。分离菌菌落乳白色或象牙色至灰白色,有大量黑褐色分生孢子器产生,分生孢子器球形至扁球形,内含无色单胞、卵圆形分生孢子,有明显或不明显油球;针刺接种4片真叶向日葵幼苗的下胚轴,7～9d后茎部产生典型黑茎病黑色椭圆形病斑,病斑上着生黑色分生孢子器;菌丝DNA用ActF1/R1和ITS1/ITS4扩增,序列与NCBI基因库中P.macdonaldii序列相似性为98%～100%。形态学、分子生物学及致病性检测结果显示,截获的3株菌均为向日葵黑茎病菌。     

江西瑞昌山药炭疽病菌的形态及分子鉴定

为了明确江西瑞昌山药炭疽病病原菌种类归属,本文从当地采集呈典型症状的炭疽病叶片进行了病原菌分离鉴定.通过组织分离获得8个在培养性状和分生孢子形态大小均一致且均具有致病性的分离株,8个分离株在PDA平板上菌落初为白色,后变为灰色至深灰色,菌落中央产生橘红色黏质分生孢子团.分生孢子无色,长椭圆形至纺锤形,单胞,大小为(15.6~18.0)μm×(3.6~6.0)μm.对其中之一的分离株YRRC-1进行rDNA-ITS区段扩增和序列测定,获得长度为536 bp的rDNA-ITS序列,该序列与胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的对应序列同源性达100%.根据分离病菌的培养特征、形态大小和序列鉴定结果,认为瑞昌山药炭疽病菌属于胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides).     

美国小麦中麦类壳多胞斑点病菌的检疫鉴定

从进口美国小麦中分离纯化到一株分离物4072-62,通过形态学特征观察、ITS序列分析和致病性测定,对其进行了鉴定。结果表明,该菌在PDA培养基上气生菌丝发达,呈白色絮状,后期变粉红色,菌落中央明黄色;分生孢子器和假囊壳单生或聚生,球形至椭圆形,黄褐色至深褐色。分生孢子圆柱形,直或稍弯,两端钝圆,无色,大多有隔膜,大小23～44μm×2.6～3.5μm。子囊棒状,直或稍弯,无色透明,大小37～79μm×9～11μm,内含8个子囊孢子。子囊孢子梭形,多数具有3个隔膜,隔膜处明显缢缩,淡黄色至黄褐色,大小19～24μm×4～6μm。该分离物的ITS序列与GenBank中多个麦类壳多胞斑点病菌（Parastagonospora pseudonodorum）（登录号AY196988、MZ049620等）的序列相似性为100%。基于ITS序列构建的系统发育树显示菌株4072-62与麦类壳多胞斑点病菌聚在同一个分支（Bootstrap值为66）,亲缘关系最近。菌株4072-62接种小麦,出现叶斑、叶枯等典型症状,对病菌再分离可重新分离到该病菌。以上结果表明,该菌株为麦类壳多胞斑点病菌。此为深圳口岸...     

进境美国苹果星裂壳孢果腐病菌的首次截获-病原真菌的鉴定及风险分析

 广东口岸从美国华盛顿输华苹果（Malus domestica）中截获可疑腐烂病果, 症状表现为果梗凹腐或萼凹腐,病部果皮暗褐色至黑色,病健交界处纹带褐色,分生孢子器黑色、颗粒状,直径0.3~0.8 mm,部分埋生或近表生, 显微镜检可见无色单胞的分生孢子。分离物生长温度-3~25℃, 最适为20℃, 经柯赫氏法则验证确认为截获病果的病原菌。Blast分析表明从分离物基因组中扩增到的ITS基因与GenBank中已知的Phacidiopycnis washingtonensis菌株ITS序列同源性达100%。经形态特征、培养性状及ITS系统发育分析, 将病原菌鉴定为苹果星裂壳孢果腐病菌（Ph. washingtonensis Xiao& J.D.Ro-gers,2005）,在分类上隶属于半知菌亚门球壳孢目星裂壳孢属(Phacidiopycnis),此截获鉴定属我国首次。迄今为止我国尚未有该病菌发生为害的报道,本文就此病菌对我国苹果和梨产业的潜在风险进行了评估分析。     

柴胡斑枯病病原及其生物学特性

据2011-2014年调查,甘肃省柴胡斑枯病发生严重,常年发病率为13%~21%,严重度1~2级。本研究以形态学和分子生物学方法相结合,明确了甘肃省柴胡斑枯病病原及其生物学特性。甘肃省柴胡斑枯病菌分生孢子器近球形或球形,黑褐色,高66.4~90.2μm,平均77.5μm;直径57.3~90.0μm,平均70.5μm。分生孢子针形、无色,有些稍弯曲,具1~3隔膜,大小(13.0~26.0)μm×(1.5~3.0)μm,平均19.0μm×2.0μm。通过ITS、LSU、RBP2和β-tubline多基因位点构建系统发育树,将柴胡斑枯病病原鉴定为柴胡壳针孢Septoria bupleuricola Sacc.。该菌菌丝生长、分生孢子萌发和产孢的温度范围分别为0~35℃、0~35℃、5~35℃,最适温度分别为20~25℃、15℃、10~15℃;连续光照有利于菌丝生长、孢子萌发和病菌产孢;菌丝生长、孢子萌发和产孢的适宜pH范围分别为4.0~10.0、4.51~9.19和5.0~9.0,最适pH分别为5.0、6.49和5.5;此菌在相对湿度75%以上可萌发,以水中萌发最好;柴胡叶或根渍液对孢子萌发有较强的促进作用。表明柴胡壳针孢菌丝生长和孢子萌发的适宜温度偏低,因此该病害在气温偏低及持续阴雨结露条件下发生较重。     

铁皮石斛轮纹病病原菌鉴定及其防治药剂筛选

为明确近年来在铁皮石斛Dendrobium officinale叶片及茎秆上出现的一种新病害—轮纹病的病原菌及筛选其有效防治药剂,通过分离物致病性测定、形态学观察和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,同时测定了11种药剂对病原菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑菌效果。结果表明,从铁皮石斛病样中分离到的菌株TPLW01在致病性试验中表现出的症状与其田间自然感病症状一致,证明菌株TPLW01为铁皮石斛轮纹病的致病菌。该病原菌菌落在PDA培养基上初期为白色、绒毛状,后期菌落上长出同心环状排列的暗绿色至黑色的分生孢子座;分生孢子梗无色,圆柱形,有3~5轮分枝;分生孢子无色、单胞、杆状两端钝圆,大小为5.0~7.5μm×1.5~2.5μm;形态特征与露湿漆斑菌Myrothecium roridum一致。该菌rDNA-ITS序列的Gen Bank登录号为MF939638,与露湿漆斑菌(登录号KX421205.1)同源性为100.0%,分子鉴定结果与形态鉴定结果一致,确定引起该病的病原菌为露湿漆斑菌。6%春雷霉素可湿性粉剂1 000倍液、42.8%氟菌肟菌酯悬浮剂3 500倍液、29%吡萘嘧菌酯悬浮剂1 500倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1 000倍液对该菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制效果均达到100.0%,表明这4种药剂可用于铁皮石斛轮纹病的田间防治。     

尼日尔发生由壳孺孢引起的芒果枯萎病

自80年代初以来,芒果树 Mangifera indica L.上的一种枯萎病已在尼日尔共和国引起严重危害。通过分离得到串珠壳孺孢 Hendersonula toruloideaNatt(由联邦真菌研究所鉴定),这是一种可通过伤口侵入多种寄主的兼性寄生菌。其症状只有在相对湿度和昼夜温度均很高的条件下出现,主要表现为嫩芽、细枝或整个枝条突发性枯萎,叶片变成红褐色但不脱落,在受侵染的枝条上产生溃病并且渗出透明状的树胶,内部组织呈黑褐色到黑色。在雨季,黑色碳状分生孢子器产生无色透明到淡绿色的椭圆形分生孢子,分生孢子多     

白粉菌重寄生菌的分离鉴定及其生防效果初评

从新疆石河子地区3种花卉上采集的150份白粉病株样本中分离出白粉菌重寄生真菌,对代表性菌株进行形态特征观察与ITS-rDNA序列分析：分离物的分生孢子器深棕色,多聚生,大小为（40.66～82.92）μm×（34.65～63.05）μm;分生孢子单胞、无色,两端含油球,大小为（3.88～5.67）μm×（2.19～2.75）μm;菌株的ITS-rDNA序列与Ampelomyces quisqualis序列的同源性达94%～100%,由此将其鉴定为白粉寄生孢（A. quisqualis）。测定该菌对荷兰菊白粉病菌的重寄生效能及控病效果,发现供试的12个菌株均可寄生于荷兰菊白粉病菌上,平均重寄生指数为26.21;菌株As-81和Rh-60对白粉病的防效较好,分别为46.62%和46.15%。     

水稻纹枯病寄主-病原物互作鉴别品种与菌株的筛选

 经过近十年的病原菌接种试验,从国内外数百份水稻种质中,筛选出了抗病水平不同的5个代表品种Lemont、武育粳3号、Jasmine85、C418和YSBR1,作为水稻纹枯病菌致病力的鉴别品种。从江苏、广东、广西、海南、云南、湖南、福建等省采集、分离的水稻纹枯病菌中,初步筛选出致病力有差异的30个菌株,于温室苗期接种上述5个品种,确定了不同致病力的5个代表菌株C30、GD-118、E67、YN-7和YN-3。将选出的品种和菌株在江苏扬州和浙江富阳进行大田成株期抗性和致病力分析,结果表明:品种的抗病性和菌株的致病力都存在极显著差异,分别属于5个和3个不同的显著性级别,均可暂时作为鉴定材料使用。据以上结果,初步建立了一套可供水稻纹枯病菌致病力检测和寄主抗病性鉴定的鉴别体系。本文还讨论了建立水稻纹枯病鉴别体系的必要性、可行性和需要进一步开展的工作。     

褐腐病菌三种分子鉴定方法的比较

为了筛选出适用于口岸检疫的、可快速鉴定三种褐腐菌,即美澳型核果褐腐菌(Monilinia fructicola)、核果褐腐菌(M. laxa)和仁果褐腐菌(M. fructigena)的方法,采用Lane等基于形态学特征的方法对采自北京、山东、河北等省市的58株褐腐菌进行了种类鉴定,并以这些菌及三个种的标准菌株为材料比较了已报道的三种分子检测方法的可靠性。研究发现,58株菌中有53株是美澳型核果褐腐菌,2株为核果褐腐菌,3株为仁果褐腐菌。采用Ioos等的PCR方法,从3个标准菌株、53株美澳型核果褐腐菌和2株核果褐腐菌中都只扩增出相应种的特征条带,而从3株仁果褐腐菌中的2株中扩增出了两个种的特征条带。采用Ma等的方法,从美澳型核果褐腐菌标准菌株、采自国内的53株美澳型核果褐腐菌和核果标准菌株中,只扩增到相应种的特征条带,而从采自国内的2株核果褐腐菌株中不仅扩增出了核果褐腐菌的条带还扩增出了美澳型核果褐腐菌的特征条带,3株仁果褐腐菌株产生了核果褐腐菌的特征条带,仁果褐腐菌标准菌株中没有得到产物。采用Cote等的方法,只从16株美澳型核果褐腐菌中扩增出该种的特征条带,从其余菌株(包括标准菌株)中没有获得产物。这些研究结果表明:Ioos等的检测方法可用于检测美澳型核果褐腐菌和核果褐腐菌;Ma等的检测方法可用于检测美澳型核果褐腐菌,而不适用于检测其它两个种;而仁果褐腐菌的分子检测方法需要进一步研究和完善。     

田间番茄嫁接口上部茎枯病病原鉴定

为明确重庆潼南地区田间番茄嫁接口上部茎枯病病原的具体种类,本试验以嫁接口上部茎秆有坏死症状的番茄幼苗为材料,对其室内保湿培养,通过形态学方法和分子生物学方法进行病原鉴定。确定引起番茄嫁接品种嫁接口上部茎秆坏死症状的病害为灰霉病,病原菌为灰葡萄孢菌。该病原的确定为进一步的药剂筛选奠定了基础。     

危害红掌的穿孔线虫形态和分子鉴定

对一批引进后隔离培养中患病的红掌种苗,进行了根系线虫检测,通过病症分析、线虫形态测量、rDNA-ITS区序列分析等鉴定,结果表明:检测的线虫形态和香蕉穿孔线虫基本一致,rDNA-ITS区测序结果序列一致性为98％～100％.本报道再次证明香蕉穿孔线虫在红掌上的分布和危害,应该对种苗的跨区引进和种植过程进行严格的检疫.     

利用BIOLOG鉴定系统快速鉴定菜豆萎蔫病菌的研究

 本研究利用美国Biolog公司生产的MicroStation^TM V3.5系统对我国一类危险性病害菜豆萎蔫病菌及其相关菌进行了快速鉴定研究。研究结果表明,来自不同国家和寄主的24株菜豆萎蔫病菌及其相关致病变种,23株准确鉴定至种水平,其中13株鉴定至致病变种水平,种水平的鉴定准确率为95.8%,另外1株至属水平。同时2株苜蓿萎蔫病菌和2株番茄溃疡病菌均鉴定至致病变种水平。经聚类分析研究,结果支持了对格兰氏阳性植病细菌在属、种水平的分类。本研究是首次使用该系统对格兰氏阳性植病细菌进行鉴定研究,试验证明Biolog鉴定系统用于快速鉴定菜豆萎蔫病菌是一个很有用的工具,且由于其标准化程度高、快速准确,符合我国口岸植物检疫的要求。     

桑细菌性青枯病病原及其生化型鉴定

为有效治理浙江省杭州地区桑树上严重发生的新病害,开展了病原及其特性研究。从临安市和桐庐县的青枯桑树上分离出15株致病细菌,经25项主要细菌学特性、菌落形态、致病性、Bi-olog、脂肪酸分析、RAPD-PCR鉴定及与4株标准菌株比较,证实了这种桑青枯病是由Ralstoniaso-lanacearum引起,属于生化型Ⅴ和Ⅳ,它们在15株分离菌中分别占73.3%和26.7%。同时,在该病原细菌的鉴定中,建立了简便易行的桑青枯病病原细菌致病性测定新方法。     

Characterization of phytoplasmas detected in Chinaberry trees with symptoms of leaf yellowing and decline in Bolivia

Polymerase chain reaction (PCR) assays were used to detect phytoplasmas in foliage samples from Chinaberry ( Melia azedarach ) trees displaying symptoms of yellowing, little leaf and dieback in Bolivia. A ribosomal coding nuclear DNA (rDNA) product (1·8 kb) was amplified from one or more samples from seven of 17 affected trees by PCR employing phytoplasma-universal rRNA primer pair P1/P7. When P1/P7 products were reamplified using nested rRNA primer pair R16F2n/R16R2, phytoplasmas were detected in at least one sample from 13 of 17 trees with symptoms. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of P1/P7 products indicated that trees CbY1 and CbY17 harboured Mexican periwinkle virescence (16SrXIII)-group and X-disease (16SrIII)-group phytoplasmas, respectively. Identification of two different phytoplasma types was supported by reamplification of P1/P7 products by nested PCR employing X-disease-group-specific rRNA primer pair R16mF2/WXint or stolbur-group-related primer pair fSTOL/rSTOL. These assays selectively amplified rDNA products of 1656 and 579 bp from nine and five trees with symptoms, respectively, of which two trees were coinfected with both phytoplasma types. Phylogenetic analysis of 16S rDNA sequences revealed Chinaberry yellows phytoplasma strain CbY17 to be most similar to the chayote witches'-broom (ChWBIII-Ch10) agent, a previously classified 16SrIII-J subgroup phytoplasma. Strain CbY1 resembled the Mexican periwinkle virescence phytoplasma, a 16SrXIII-group member. The latter strain varied from all known phytoplasmas composing group 16SrXIII. On this basis, strain CbY1 was assigned to a new subgroup, 16SrXIII-C.     

Characterization of Pseudomonas viridiflava Associated with a New Symptom on Tomato Fruit

A bacterial disease of tomato fruits was recorded during the winter in outdoor crops in Crete, causing damage of up to 30% in commercial production. Bacterial spots appeared on the upper surface of middle size immature fruit and the spots became larger with the increase of fruit size. Spots were round or elongated, superficial and lightly sunken, 1.5–2cm in diameter. The centre of the spots dried out and became progressively gray, brown to black-brown and had intensely coloured margins. The infected area did not develop into soft rot. The bacterium Pseudomonas viridiflava (Burkholder) Dowson was identified as the causal agent on the basis of morphological, physiological, biochemical and pathological characters. This appears to be the first time that these symptoms have been described on tomato fruit.     

Tracking Agrobacterium strains by a RAPD system to identify single colonies from plant tumours

A molecular typing system for Agrobacterium strains based on the polymerase chain reaction–random amplified polymorphic DNA (PCR–RAPD) procedure was developed. It employs one to four different 10-mer primers and the results are highly reproducible. The band patterns obtained with the four primers for each of the 39 Agrobacterium strains analysed were different enough to differentiate the strains from each other. Strains with similar chromosomal background but different plasmid content, e.g. strains C58 and A281, gave the same band pattern with all the primers. Ten host plants were inoculated with eight Agrobacterium strains and the isolates obtained from the resulting tumours were analysed using the RAPD system developed here. The procedure allowed rapid identification of isolates recovered from tumours by comparison of their band patterns with band patterns of strains used as inoculum. The procedure also discriminated the various strains analysed. Purified bacterial cell suspensions, used for RAPD analyses, produced the same results as purified DNA, and greatly simplified the procedure. This system can be applied for rapid screening of Agrobacterium-like colonies isolated from plant tumours for epidemiological and genetic diversity studies.     

农药事故的行政鉴定

农药使用者就农药事故责任和损害赔偿与农药生产者、经营者产生的争议,是目前困扰基层农业部门的突出问题。本文根据农业执法实践,结合行政法理论,借鉴交通事故责任认定方法,通过对农药事故行政鉴定进行探讨,从制定调查处理程序、明确责任判定标准、规范书写鉴定书三个方面对农药事故行政鉴定提出完善建议,以期更好地维护农民合法权益,定纷止争。