基于DNA条形码技术的泰国番石榴中实蝇幼虫分子鉴定研究

实蝇是世界重要的检疫性害虫之一,对果蔬生产及其国际贸易具有很大的影响。而以线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚单位I(mtDNACOI)基因的部分序列作为实蝇的DNA条形码能减少对实蝇成虫形态特征的依赖,可检测其任何虫态的样品,有助于实蝇样品的快速鉴定。本研究采用DNA条形码技术,针对采自泰国四色菊市番石榴烂果中的5头实蝇幼虫进行COI扩增测序,与生命条形码数据库(BOLD)中的序列进行比对并利用PAUP4.0软件构建了其系统进化树。根据序列分析和系统进化关系分析的结果,将5头实蝇幼虫样品鉴定为番石榴实蝇(Bactrocera correctaBezzi),并将本研究获得的2条COI序列在GenBank中注册,GenBank的登录号为HM590450和HM590451。     

云南昭通蜜柑大实蝇和橘大实蝇的DNA条形码鉴定

蜜柑大实蝇(Bactrocera tsuneonis)和橘大实蝇(Bactrocera minax)属果实蝇属(Bactrocera)大实蝇亚属(Tetradacus),是为害柑橘类作物的两种检疫性实蝇。两种实蝇为近似种,仅成虫可通过形态特征进行鉴定,幼虫等非成虫虫态需采用分子生物学技术才能实现快速、准确的鉴定。本研究对采自云南省昭通市大关县、彝良县和永善县的大实蝇成虫及幼虫样品分别进行了形态鉴定和DNA条形码鉴定。结果表明,通过形态特征的对比以及DNA条形码序列的测定、比对和分析,采自大关县和彝良县的20头成虫样品分别为蜜柑大实蝇和橘大实蝇,采自彝良县和永善县的20头幼虫样品均为橘大实蝇。本研究实现了云南昭通地区两种大实蝇的DNA条形码鉴定,为我国植物检疫相关部门提供实用技术及决策支持。     

基于DNA条形码的广西苦瓜中实蝇幼虫分子鉴定研究*

实蝇是多种热带、亚热带水果和蔬菜的重要害虫,其卵、幼虫、蛹难以通过形态特征进行种类鉴定。DNA条形码是近年来出现的物种分子鉴定技术,能够实现对昆虫非成熟虫态的快速鉴定。本研究利用DNA条形码技术和BOLD系统,选取线粒体DNA细胞色素氧化酶I（COI）基因片段,针对采自于广西南宁地区苦瓜中的实蝇幼虫样品进行了序列测定、比对和分析。结果显示,在所检测的10头实蝇幼虫样品中,有4头为瓜实蝇［Bactrocera cucurbitae (Coquillett)］、6头为南亚果实蝇［Bactrocera tau (Walker)］。     

基于DNA条形码技术的河南省夏季重要实蝇害虫分子鉴定

以夏季采自河南省洛阳市、郑州市的实蝇幼虫、成虫为研究材料,采用DNA条形码技术,通过测定、比对线粒体DNA细胞色素氧化酶I(COI)基因片段序列,对其进行种类鉴定。结果表明,检测的实蝇样品种类为橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)、具条实蝇(Zeugodacus scutellatus)和三点棍腹实蝇(Dacus trimacula),与相关种已知序列的相似度均在99.39%以上,其系统发育树明显与我国其他常见实蝇近缘种区分开。     

从榴莲蜜上截获三带实蝇

凭祥海关从越南进境旅客携带的榴莲蜜上截获1种实蝇幼虫,利用成虫形态特征和分子特征进行鉴定。结果表明:该虫成虫中胸侧板条伸达肩胛;翅上具有沿bm-cu脉、r-m脉与dm-cu脉以及穿过M脉端部的3条横向条纹;bc室深色;COI基因序列分析表明该实蝇幼虫的序列与GenBank和BOLD Systems中的B. umbrosa序列相似性达99%～100%;基于COI序列的系统发育树分析表明与B. umbrosa聚在同一个分枝上。结合形态和分子鉴定结果,将其鉴定为三带实蝇(Bactrocera umbrosa Fabricius)。这是我国口岸首次从榴莲蜜上截获该虫。     

旅检截留芒果上两种实蝇的分子鉴定

对进境旅客携带芒果进行检疫时,在一枚芒果上发现了25头实蝇科幼虫,化蛹后显示存在两种形态特征差异较大的蛹,其中类型I的蛹10头,类型II的蛹15头。类型I中的5个蛹成功羽化为成虫,经形态鉴定为非洲芒果实蝇。类型II的蛹未成功羽化。由于对蛹的鉴定尚有困难,分别提取了两种类型蛹的线粒体DNA,分别扩增了COI、COII、COIII基因,测序结果与Gen Bank数据库进行序列比对分析。结果显示,类型I蛹COI、COII、COIII基因序列分别与非洲芒果实蝇相应基因的序列相似性达到99%以上,与形态学鉴定结果相同。类型II蛹COI基因序列与入侵果实蝇的基因序列相似性达到100%。综上结果,类型I幼虫为非洲芒果实蝇,而类型II为入侵果实蝇。在同一枚芒果上发现两种不同的检疫性实蝇,比较少见,增加了水果检疫的难度,在实际工作中应给予高度重视。     

加拿大蓟瘿蝇的鉴定

河北出入境检验检疫局从美国进口大豆中截获两头虫蛹,并对虫蛹进行培养羽化至实蝇成虫。通过对成虫的形态学鉴定和DNA条形码分析,确定该实蝇为加拿大蓟瘿蝇(Urophora cardui),为我国首次截获。本文分析了该实蝇传入我国可能存在的风险,提出应加强口岸检疫,提升鉴定水平等检疫措施。     

4种实蝇线粒体DNA全序列测定

橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)、木瓜实蝇(Bactrocera papayae)、杨桃实蝇(Bactrocera carambolae)和菲律宾实蝇(Bactrocera philippinensis)的成虫和幼虫的形态特征十分相近,难以区分.本文对4种实蝇的线粒体DNA全序列进行测定,序列在GenBank上登录(登录号分别为:DQ917577,DQ917578,EF014414,DQ995281),并对4个种的线粒体DNA全序列进行序列分析,为建立基于线粒体DNA序列分析的快速鉴定方法提供基础.     

海南三亚崖州湾科技城发现番石榴果实蝇

番石榴果实蝇Bactrocera correcta(Bezzi)严重为害番石榴、莲雾、芒果等果蔬植物,我国将果实蝇属Bactrocera (非中国种)列为进境植物检疫性有害生物。2021年10月至2022年6月,在海南省三亚市崖州湾科技城内连续9个月诱捕到疑似番石榴果实蝇成虫。本研究通过形态特征、DNA条形码和常规PCR等方法,对诱捕到的疑似样品进行了鉴定。鉴定结果表明,诱捕到的实蝇样品为番石榴果实蝇,相关植物检疫机构需进一步加强海南地区番石榴果实蝇的检疫、监测及防控。     

PCR法检疫鉴定番石榴实蝇

利用mtDNA序列,设计出两对特异性引物,应用定性PCR技术检疫鉴定番石榴实蝇.本方法适用于成虫鉴定和未成熟虫态(卵、幼虫、蛹)的快速检疫鉴定.     

基于分子标记COI、28S和18S对新菠萝灰粉蚧与菠萝灰粉蚧的识别鉴定

新菠萝灰粉蚧(Dysmicoccus neobrevipes Beardsley)是我国进境植物检疫性有害生物,与近似种菠萝灰粉蚧(Dysmicoccus brevipes(Cockerell))从形态上很难区分,给口岸快速准确鉴定带来了困难。本研究尝试采用快速、易于操作的DNA条形码技术对两种粉蚧识别鉴定。实验选择两种粉蚧的不同地理种群共65个样本,选用3个分子标记(COI、28S和18S)进行引物筛选、基因扩增、序列分析。结果表明:引物(18S_2880_F/18S_B_R;28S_S3660_F/28S_A335_R;Pco_F/C1-12342_R)能够成功扩增所有测试样品;3个分子标记都存在条形码间隔,COI最大,28S次之,18S最小;结合Gen Bank数据库中的同源序列进行系统发育分析,28S的NJ树图与COI相似,均以高支持率(97%和100%)将所有样本分成2个独立分支,分析结果与形态鉴定结果一致。与28S和COI相比,18S基因序列矩阵构建的聚类树含低支持率分支。本研究扩增的COI及28S基因区段均可作为快速准确鉴定新菠萝灰粉蚧与菠萝灰粉蚧的有效分子标记。     

利用条形码技术鉴定苹浅褐卷蛾

苹浅褐卷蛾原产澳大利亚,目前仅分布于少数地区,是澳大利亚、新西兰及英国等国家多种经济作物上的重要害虫,苹浅褐卷蛾形态具有多态性,对其形态鉴定一直非常困难,由此也增加了该虫在口岸上的入侵风险。本研究使用DNA条形码技术(barcoding)测定了采集自新西兰5个不同地区苹浅褐卷蛾种群26个样本的细胞色素酶I(COI)序列。研究表明,苹浅褐卷蛾种内COI序列差异远小于3%,而与BOLD数据库中卷蛾科其他种类的种间差异约为7%～16%,远大于3%。该结果肯定了条形码技术能够成为口岸快速、准确鉴定苹浅褐卷蛾的有效方法。     

DNA条形码技术在小花蝽属昆虫分类鉴定中的应用

本研究利用DNA条形码技术对13种小花蝽属Orius Wolff昆虫进行了鉴定,进行了59条COI基因序列碱基组成及种内、种间遗传距离的分析,采用邻接法、最大简约法、贝叶斯推论法构建了系统发育树。结果表明,小花蝽属昆虫COI基因序列碱基组成与典型的昆虫线粒体DNA一致,A+T平均含量(66.4%)明显高于G+C含量,密码子的第3位A+T含量高达90.7%,碱基替换多为同义替换;13种小花蝽种内平均遗传距离为0.008,种间平均遗传距离为0.128,种内、种间遗传距离没有重叠区域。3种方法构建的系统发育树的聚类分析与形态学鉴定结果基本一致,除微小花蝽Orius minutus(Linnaeus)可能存在隐存种现象外,其他同一种群的不同个体单独聚为一支。利用DNA条形码技术对小花蝽属昆虫进行物种快速分子鉴定具有可行性。     

基于形态与分子数据鉴定海榄雌瘤斑螟

海榄雌瘤斑螟目前是红树林植物白骨壤的重要害虫,其种类在国内存在争议。本研究对福田红树林自然保护区内采集到的螟蛾标本进行了形态学鉴定,同时应用DNA条形码技术进行了进一步确认。本文将海榄雌瘤斑螟样本的线粒体COI序列与数据库中已有序列比对,结果显示海榄雌瘤斑螟COI序列与GenBank数据库中3条P. synataractis和BOLD系统中的32条P. syntaractis序列同源性达98%以上;构建的系统发育树显示福田红树林自然保护区内采集的标本与P. syntaractis聚为一支。综合形态和分子数据确定海榄雌瘤斑螟为P. syntaractis (Turner,1904)。     

9种检疫性实蝇PCR-RFLP快速鉴定研究

应用PCR-RFLP技术,对我国口岸截获频率较高的9种检疫性实蝇开展了快速鉴定方法的研究,结果表明,设计的2对引物对9种供试实蝇线粒体DNA(mtDNA)的PCR扩增片断大小分别约为350bp和450bp.用限制性内切酶MSE1和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,得到的酶切位点可将供试的9种实蝇区分开来.该方法不受供试实蝇地理来源及食物源的影响,对各种虫态(卵、幼虫、蛹)和不同性别的成虫均适用,可用于口岸截获实蝇的快速检疫鉴定.     

Carpomya属检疫性实蝇

本文介绍Carpomya属中的欧非枣实蝇(Carpomya incompleta)、甜瓜迷实蝇(C.pardalina)、枣实蝇C.vesuviana、和C.schineri的成虫形态鉴定特征,并提供了该属中6种主要实蝇的形态鉴定特征检索表以及分布和寄主种类等相关信息。     

SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定辣椒实蝇

本文应用SYBRGreen实时荧光PCR技术,建立了SYBRGreen实时荧光PCR快速鉴定辣椒实蝇的方法。利用辣椒实蝇mtDNACOI基因序列,筛选出种特异引物lati1/lati2。引物的特异性分别用辣椒实蝇、橘小实蝇、木瓜实蝇、杨桃实蝇、菲律宾实蝇、芒果实蝇、番石榴实蝇、瓜实蝇和南瓜实蝇等9种果实蝇来验证。0.01ng,0.1ng,1ng,10ng,20ng,40ng和100ng等7个不同浓度系列的辣椒实蝇DNA模板用来检测SYBRGreenPCR实时荧光反应的灵敏度,结果表明,SYBRGreenPCR的检测限度达1pg以下,最适模板DNA浓度为1～20ng。成虫、幼虫和蛹等3种不同虫态的辣椒实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性。其平均熔解温度为77.5℃±0.1℃。获得1段长为366bp的特异性目标片段,说明在辣椒实蝇成虫为模板基础上建立的SYBRGreen实时荧光PCR方法适于幼虫、蛹的快速鉴定。     

短时低温对柑橘大实蝇1~4级蛹恒温代价的弥补效应

柑橘大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)为我国重要的柑橘类害虫。为了解短时低温对柑橘大实蝇1~4级蛹恒高温代价的弥补效应,以25℃恒高温为基础,研究了相对低温10、15、20℃短时(2、4、8h)变温处理柑橘大实蝇1~4级蛹后其成虫羽化情况。相对于恒温25℃,经15℃和20℃短时(2~8h)变温处理1级蛹后成虫羽化增长率为14%~47%,经10℃和15℃短时(2、4、8h)变温和20℃短时(4h)变温处理2~3级蛹后成虫羽化增长率为2%~45%,经10、15℃和20℃短时(2、4、8h)变温处理4级蛹后成虫羽化增长率为28%~46%,均表现为正增长,产生了恒温代价弥补正效应。4级蛹经10、15、20℃变温处理2h和8h,对其恒温代价弥补正效应均较2~3级蛹的大。总之,特定时长低温对特定蛹级产生恒温弥补正效应,不同蛹级间效应有差异。本研究结果为室内柑橘大实蝇保存,及春季快速回暖或田间倒春寒情况下柑橘大实蝇种群动态的预测预报提供依据。     

基于DNA条形码技术的湖南省柑橘主产区实蝇幼虫分子鉴定

为明确湖南省柑橘主产区的实蝇入侵为害现状,从该省7个市(自治州)22个地点收集柑橘蛆果中的幼虫,利用DNA条形码技术对其进行分子鉴定,并以DNA条形码序列作为分子标记探究橘大实蝇Bactrocera minax的20个中国地理种群(湖南省6个组群共16个种群、其它3省市4个种群)以及1个印度地理种群间的亲缘地理关系,分析橘大实蝇在我国的遗传进化关系。结果表明,仅采集自邵阳市城步苗族自治县柑橘蛆果中的5头幼虫被鉴定为蜜柑大实蝇B. tsuneonis,其余21个地点采集的595头幼虫均被鉴定为橘大实蝇。21个橘大实蝇地理种群的平均单倍型多样性为0.75,核苷酸多样性为0.0032,核苷酸差异数为2.13,中国所有地理种群均具有较高的遗传多样性;单倍型网络进化图显示湖南、重庆、贵州种群共享的单倍型H3为原始单倍型,表明其为比较原始的种群;AMOVA分析结果显示种群内个体间遗传变异占总体变异的59.04%,是遗传变异的主要来源;遗传分化结果表明湖南省6个组群间均出现了中度至高度的遗传分化,FST在0.0521～0.7795之间。表明DNA条形码技术可用于蜜柑大实蝇和橘大实蝇幼虫的分子鉴定及其种群遗传进化分析。     

基于mt COI片段广西橘小实蝇种群遗传分化研究

橘小实蝇Bactroceradorsalis(Hendel)是一种重要的世界性入侵害虫,寄主范围广,适应性强,除两极地区外均有分布.本文对17个地理种群177头橘小实蝇线粒体DNA COI基因片段序列(667 bp)进行测序和分析,利用MEGA7.0,DnaSP 6.1和Arlequin 3.5等软件对橘小实蝇不同地理...