猪副粘病毒间接ELISA方法的建立

以临床分离的猪副粘病毒作为抗原,通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,再经过差速离心纯化后作为ELISA包被抗原,建立了猪副粘病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断新型猪传染病——猪副粘病毒(PPMV)感染提供了便利的途径。     

LH抗体间接ELISA检测方法的建立

以高纯度的促黄体素（LH）作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1500.该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素（FSH）阳性血清呈现阴性反应.结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测.     

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

采用超声裂解副猪嗜血杆菌分离株5型菌体上清作为包被抗原,初步建立副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA检测方法。通过棋盘滴定法筛选确定最佳反应条件:抗原包被浓度50mg/L,37℃作用2h后4℃过夜包被,血清的稀释度为1∶320,抗原抗体反应时间为50min,酶标二抗稀释度为1∶12 000,作用时间为30min,底物显色时间为15min。经特异性、敏感性和符合性试验检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性高,可用于副猪嗜血杆菌的检疫和流行病学调查。     

检测禽霍乱抗体间接ELISA法的建立

以方阵滴定法选择出最适ＥＬＩＳＡ反应条件,用系列稀释法测定２１份血清样品的禽霍乱抗体ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）,并与相应血清样品１：２００倍稀释的Ｐ／Ｎ值配对,作线性回归分析,得到回归方程ｙ＝２１９．６７３ａ－１８３．５７０（ｒ＝０．９４４）和标准曲线,从而建立起快速定量测定禽霍乱抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法－阳阴比值ＥＬＩＳＡ效价法（Ｐ／ＮＩ－ＥＴ法）利用该法,血清样品只需作１：２００倍稀释,测定其Ｐ／     

抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立

建立一种筛选特异性单链抗体的间接ELISA优化方法.用鸡传染性支气管炎病毒IBV-M41株接种SPF鸡胚,纯化后作为抗原包被96孔板进行间接ELISA,从本实验室构建的原核表达质粒pOPE101-XPscFv/JM109(DE3)中筛选出针对IBV-M41株的scFv,并对各反应参数进行探索,优化筛选方法.通过敏感性实...     

测定RHDV抗体的间接ELISA方法的建立

通过氯仿和PEG6000处理,SephadexG 200层析纯化RHDV抗原,建立了检测RHDV抗体的间接ELISA试验方法。该方法的抗原最适包被浓度为10μg/ml,血清样品最佳稀释度为1∶400。与血凝抑制试验方法(HI)等相比,该方法具有快速、简单、特异性和重复性好等优点。     

检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以田间分离的轮状病毒CHLY(G6型)作为抗原,建立了犊牛轮状病毒(BRV)抗体检测与监测的间接ELISA方法.田间监测牛轮状病毒感染率为32.91%(26/79),疫苗源性抗体高峰出现在二次免疫后第40天至第60天,抗体持续期为3个月.该方法可用于粪便、血清样品的检测,具有特异性强、快速简便等优点,适合于对轮状病毒特异性抗体的动态监测和批量检测.     

间接ELISA检测抗犬瘟热病毒抗体方法的建立

以大肠杆菌表达的犬瘟热病毒(CDV)重组核蛋白(GST-NP)经纯化后作为包被抗原,通过方阵ELISA滴定确定GST-NP的适宜包被浓度为1.31 μg·mL-1,并由此建立检测抗CDV抗体的间接ELISA方法.通过对已知抗CDV阳性血清及抗其他病毒血清的试验,表明所建立的间接ELISA可特异检测动物血清中的抗CDV抗体.另外,通过不同样品的重复试验以及不同批次的检测试验,证明该方法在用于检测CDV抗体时具有很好的重复性和稳定性.     

鸡源黄病毒卵黄抗体间接ELISA检测方法的建立

为在检测产蛋鸡黄病毒抗体水平过程中减少应激,以鸡源黄病毒FQ-C1株为包被抗原,建立检测鸡源黄病毒卵黄抗体的间接ELISA方法.确定的优化条件是包被抗原浓度为5.7 ng·μL-1,卵黄抗体以1∶160倍稀释,羊抗鸡IgG酶标抗体以1∶3 200稀释.经特异性、敏感性检验表明该方法特异性强、敏感性高,适合于产蛋鸡免疫后的抗体检测.     

应用间接竞争ELISA检测山羊痘抗体方法的建立

[目的]为山羊痘疫苗接种山羊后产生的抗体效价检测和山羊痘的诊断奠定基础。[方法]采用Vero-E6传代细胞分离山羊痘病毒抗原,建立检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA方法。[结果]检测山羊痘抗体的间接竞争ELISA的最佳工作条件：最佳抗原包被浓度为1μg/ml,兔抗高免血清最佳稀释度为1∶16 000,待检血清的工作浓度为1∶400,阳性血清的临界值为45.19%,阴性血清的临界值为38.89%。用该试验建立的ELISA方法检测3 000份接种山羊痘疫苗的山羊血清,阳性检出率为83.33%,琼脂扩散试验检出率为77.33%,竞争抑制ELISA方法较琼脂扩散试验方法敏感。[结论]该方法具有特异性高、快速、敏感等特点,适合检测山羊痘抗体。     

KGF-2单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立

目的建立KGF-2单克隆抗体间接ELISA的筛选方法 ,制备KGF-2单克隆抗体.方法以KGF-2为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清.通过棋盘滴定方法确定间接ELISA的抗原包被浓度及一抗、二抗最佳工作浓度;利用建立特异性好的间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞株.结果通过棋盘滴定最终确定了500μg/L的抗原包被浓度、1∶1 000的一抗血清稀释倍数及1∶2 000的二抗血清稀释倍数;筛选到两株可稳定分泌抗体、效价较高的杂交瘤细胞株.结论该研究建立了灵敏度高、特异性好的间接ELISA筛选体系,可用于KGF-2单克隆抗体的制备及检测.     

猪圆环病毒Ⅱ型抗体间接ELISA检测方法的建立

建立了检测猪圆环病毒2型血清抗体的间接ELISA方法,并初步应用于临床血清样品的检测.用PCR方法从PCV2 HBZX株中获得截短的核衣壳(capsid,Cap)基因,将该基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-Cap,将该重组质粒转化宿主菌E.coli BL21-CodonPlus(DE3),用IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot鉴定蛋白的正确表达,表达蛋白cap分子质量为42 ku,可与6×HIS抗体反应;KCl预染切胶纯化目的蛋白,以其为抗原建立检测PCV2感染猪血清抗体的间接ELISA方法.ELISA检测5份血清样品结果变异系数均小于10%.用该方法分别检测湖北、河南等地的91份临床血清样品,阳性率为25%～100%.上述结果表明,所制备的目的蛋白具有较高的纯度和良好的免疫原性,所建立的间接ELISA检测抗体方法,具有良好的重复性,初步临床试用效果良好.     

矿区不同复垦年限土壤养分及有机碳特性研究——以抚顺矿区碳质页岩区复垦土壤为例

以抚顺矿区碳质页岩风化物区域的复垦土壤为例,对不同年限不同深度的复垦土壤进行分析,揭示了抚顺矿区复垦土壤养分的时空演变规律。结果表明,随着复垦年限的增加,矿山土壤pH值逐年降低,其变化范围在6.47~7.80;全氮、有效磷、碱解氮等呈现逐年增加的趋势,尤其以0~10 cm土层内增长幅度明显;随着深度增加,pH值、全氮、有效磷、氮等逐渐降低。矿山土壤中由于排弃物中含有含碳矿物和少量煤块的原因导致总有机碳含量较高;矿山土壤中有机碳随着复垦年限的增加及自然、人为活动影响,碳黑、颗粒状碳趋向于减少,而易氧化碳的数量增加。     

间接ELISA法检测苏云金芽孢杆菌(Bt)Cry1Ab毒蛋白抗体方法的建立

苏云金芽孢杆菌(Bt)为革兰氏阳性菌,是一类对害虫毒力强、致死速度快且对害虫天敌无毒性的昆虫病原微生物[1-2].菌体在稳定生长期可形成伴胞晶体蛋白,又称杀虫晶体蛋白(ICP)或δ-内毒素.     

间接ELISA法检测促卵泡素抗体方法的建立

建立了检测促卵泡素(FSH)抗体的间接ELISA方法,用该法检测由FSH-BSA免疫BaLb/c小鼠所分离的5份待检血清,结果均为阳性。通过反复试验,确立间接ELISA检测FSH抗体的最佳反应条件,即酶标二抗工作浓度为1∶1 200,抗原包被浓度10μg/mL,待测血清最佳稀释度为1∶500,封闭液为1.0%的脱脂奶粉,同时设置抗原阻断试验对结果进行验证。     

检测禽霍乱抗体间接ELISA法的建立

以方阵滴定法选择出最适ＥＬＩＳＡ反应条件,用系列稀释法测定２１份血清样品的禽霍乱抗体ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）,并与相应血清样品１∶２００倍稀释的Ｐ／Ｎ值配对,作线性回归分析,得到回归方程ｙ＝２１９．６７３ａ－１８３．５７０（ｒ＝０．９４４）和标准曲线,从而建立起快速定量测定禽霍乱抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法——阳阴比值ＥＬＩＳＡ效价法（Ｐ／ＮＩ－ＥＴ法）。利用该法,血清样品只需作１∶２００倍稀释,测定其Ｐ／Ｎ值,通过回归方程（或标准曲线）即可求得ＥＴ．     

抗氯吡脲单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA方法的建立

在获得高特异性抗CPPU单克隆抗体的基础上,采用活性酯法将CPPU-H1与BSA、CPPU-H2与OVA偶联制备得到免疫抗原CPPU-H1-BSA和包被抗原CPPU-H2-OVA;用CPPU-H1-BSA对小鼠进行免疫,通过杂交瘤技术筛选获得了1株抗CPPU单克隆抗体的杂交瘤细胞株B7B6 24。经过体内诱生腹水法制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1∶32 000。通过对试验条件的优化,建立了一种检测CPPU的方法 ,该方法 IC50值为3.89 ng/m L;该抗体与四螨嗪、赤霉素、噻苯隆几乎不存在交叉反应;利用所建立的间接竞争ELISA法对葡萄样品进行检测,平均加标回收率为91.4%~112.4%,变异系数为5.9%~14.4%。本研究所建立的间接竞争ELISA方法具有低成本、高准确性和高灵敏度的特点,可以用来对葡萄中的CPPU残留情况进行检测。     

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法.结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min.对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%.