日本乙型脑炎病毒的分离与鉴定

收集一例疑为乙型脑炎病毒感染的种公猪肿大的睾丸病料,并将其处理制成匀浆过滤后,用乳鼠脑内接毒和细胞接毒相结合的方法盲传并分离病毒,然后设计一对PrM/E基因的特异性引物,采用RT-PCR方法对所分离的病毒进行鉴定,并将其PrM/E基因扩增产物测序,测序结果与乙型脑炎GenBank登陆的SA14-14-2株(AF315119)和SA14株(U14163)进行比较。结果表明,所分离病毒的PrM/E基因序列与JEV强毒株SA14和弱毒株SA14-14-2相应序列同源性分别为98.1%和97.1%,证实分离毒株为乙型脑炎病毒。     

猪乙型脑炎疫苗的研究进展

猪乙型脑炎是一种嗜神经性虫媒病毒引起的人兽共患传染病。疫苗的免疫接种是控制猪乙型脑炎发生的主要手段。阐述了猪乙型脑炎常规疫苗和新型疫苗的研究进展,为进一步研究猪乙型脑炎疫苗提供参考。     

猪乙型脑炎疫苗的研究现状与发展方向

猪乙型脑炎是一种嗜神经性虫媒病毒引起的人兽共患传染病。疫苗的免疫接种是控制猪乙型脑炎发生的主要手段。阐述了猪乙型脑炎常规疫苗和新型疫苗的研究进展,为进一步研究猪乙型脑炎疫苗提供参考。     

猪乙型脑炎疫苗研究新进展

流行性乙型脑炎简称乙脑,是人畜共患急性传染病。该病可导致猪发生繁殖障碍性疾病,给养猪业带来了巨大损失。目前,除常用的3种传统疫苗外,亚单位疫苗等新型疫苗的研究也取得了重大进展,在日后的乙脑免疫中,新型疫苗必定会起到更加重要的作用。     

日本脑炎基因工程疫苗的研究进展

日本脑炎是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病,是重要的人兽共患病,世界卫生组织把日本脑炎疫苗确定为优先研究和开发的项目之一.日本脑炎的防治主要是接种灭活苗和弱毒苗,由于灭活苗免疫原性较差、注射量大,且需重复注射;而我国利用SA14-14-2弱毒株研制的弱毒苗在世界上居于领先水平,具有接种针次少、副反应小、免疫原性强等优点,已在国内得到广泛应用.但弱毒苗易受母源抗体的影响,有毒力回复突变的可能性,且存在胎内感染的潜在隐患,加之SA14-14-2株病毒通过蚊虫繁殖后,其弱毒特性和基因型特征能否发生回复突变,致使毒力增强,引起健康人的感染和传播,是人们最担心的问题.如何选择合适的日本脑炎疫苗防治该病是当今人们在该领域研究的热点问题,随着日本脑炎病毒分子生物研究的深入,基因工程疫苗是日本脑炎疫苗的新的发展方向,现在很多学者正在设法利用生物技术手段研究开发基因工程疫苗,以克服现有疫苗的缺点,此项研究的成功将填补国内空白.本文综述了日本脑炎基因工程亚单位疫苗、合成肽疫苗、重组活疫苗和核酸疫苗等的研究新进展,为日本脑炎基因工程疫苗的深入研究提供参考.     

夏季如何预防猪日本脑炎——猪日本脑炎的诊断

日本脑炎（japanese encephalitis）是由日本脑炎病毒（japanese encephalitisvirus）引起的一种人兽共患传染病,又称流行性乙型脑炎、日本乙型脑炎,简称乙脑。该病有明显的季节性,多发生在7—9月,蚊虫是主要的传播媒介。对猪危害较为严重,尤其是能破坏猪的繁殖性能,导致被感染的怀孕母猪流产、产死胎,公猪睾丸炎,仅有少数猪呈现神经症状。而临床上又缺少有效的治疗药物,所以做好该病的预防工作是非常重要的。     

乙型脑炎疫苗研究现状及展望

乙型脑炎简称乙脑 ,是由日本脑炎病毒 (Ｊａｐａｎｅｓｅｅｎ ｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓ ,ＪＥＶ)引起的一种急性传染性人畜共患病。此病首次于 1935年在日本马群中发生大流行 ,1937年日本学者证明其病原与当地人流行性脑炎病毒相同。随后 ,乙脑在我国、南亚、东南亚等地陆续发生。几十年来 ,乙脑流行给我国及周边国家造成了巨大的经济损失。Ｓｉｒａｐｒａｐａｓｉｒｉ等开展了实施乙脑疫苗免疫程序的风险投入和效益分析[1] 。我国未进行过乙脑感染的经济调查分析 ,猪群及其它动物流行病学、经济损失、免疫状况及防制现状均有待调查…     

日本乙誓脑炎病毒NS1基因及其疫苗的研究进展

日本乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的严重的人畜共患传染病。乙型脑炎病毒的三种糖基化蛋白PrM、E和NS1是其主要免疫保护性抗原,其中PrM和E蛋白是日本乙型脑炎病毒的结构蛋白,其结构和相关疫苗研究的报道较多。NS1蛋白是日本乙型脑炎病毒的非结构蛋白,其主要参与病毒复制的早期阶段,推测可能参与病毒组装和释放。可诱导补体依赖性溶细胞反应,不能产生中和抗体,能诱发机体在非中和性抗体存在的情况下产生保护性免疫。在接种乙脑病毒的细胞的细胞内、细胞表面及上清液中均含有大量的NS1蛋白。对小鼠接种NS1蛋白或NS1蛋白特异性抗体,均能让小鼠产生对乙脑病毒感染的保护性免疫作用。本文主要就乙型脑炎病毒非结构基因NS1及其免疫疫苗的研究进展进行综述,为其更进一步深入研究IEV NS1基因及其相关疫苗奠定基础。     

日本血吸虫DNA疫苗对黄牛的田间免疫试验

用VRSj28、VRSj23和VRSj28 VRSj23对黄牛免疫后，在日本血吸虫病流行区云南省洱源县进行日本血吸虫田间自然攻击54d，免疫牛的减成虫率为33．0％－44．0％（P＜0．05），粪便和肝组织的减卵率较高，特异性IgG在首次免疫后显著增高。提示，用此类疫苗对牛进行大规模免疫预防，可减少人群感染的机会。     

Development and evaluation of indirect ELISA for the detection of antibodies against Japanese encephalitis virus in swine

The Japanese encephalitis virus (JEV) is one of causative agents of reproductive failure in pregnant sows. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) was examined for its potential use in the rapid monitoring of the JEV, and the results were compared with those from the hemagglutination inhibition (HI) and serum neutralization (SN) tests. The comparative analysis showed that the results of I-ELISA showed a significant correlation with the conventional HI (r = 0.867) and SN tests (r = 0.804), respectively. When the I-ELISA results were compared with the traditional diagnostic assays, the sensitivity of the I-ELISA was 94.3% with the HI test and 93.7% with the SN test, respectively. The specificity was found to be 81.4% and 80.0% with the HI and SN tests, respectively. To determine the applicability of I-ELISA in the field, the serum samples from 720 pigs were collected from 4 regions in Korea between July and August 2004. The results indicated that 21.7% of screened pigs were seropositive for the JEV. The seropositive rates of JEV in the 4 provinces were 12.6% in Gyeonggi, 45.0% in Gyeongnam, 16.7% in Jeonbuk, and 12.2% in Jeju. The I-ELISA methodology developed in this study was shown to have considerable sensitivity and specificity through a comparison with HI and the SN tests. Therefore, it might be one of convenient methods for screening a large number of samples in various fields.     

Molecular characterization of Japanese encephalitis virus strains prevalent in Chinese swine herds

Japanese encephalitis virus (JEV) is the leading cause of viral encephalitis in Asia and domestic pigs serve as the amplifying hosts. In the present study, the full genomic sequences of two JEV strains (HEN0701 and SH0601) isolated from pigs in China were determined and compared with other 12 JEV strains deposited in GenBank. These two strains had an 88.8% nucleotide sequence similarity and 97.9% deduced amino acid sequence homology. HEN0701 had high nucleotide sequence and high amino acid sequence identity with genotype I (GI) strains, while SH0601 had high nucleotide sequence and high amino acid sequence identity with GIII strains at both the gene and full genome levels. Further phylogenetic analysis showed that HEN0701 belonged to the JEV GI group and SH0601 was classified as a GIII strain. Analysis of codon usage showed there were a few differences between the GI and GIII strains in nucleotide composition and codon usage for the open reading frames.     

JEV分子生物学与新型疫苗研究进展

流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严惩危害人畜健康的虫媒病毒。本文对JEV的基因组结构、结构蛋白、非结构蛋白及其功能、重组活疫苗和核酸疫苗的研究现状以及与常规疫苗相比所具有的优缺点等方面进行了较为详尽的综述，并且提出JEV复制的确切机制及其蛋白尤其是非结构蛋白的结构与功能尚需深入研究，以期为坦步改良JE新型疫苗打下基础。     

日本乙型脑炎病毒E抗原表位的筛选

为筛选日本乙型脑炎病毒(JEV)的E抗原表位,本实验以抗JEV E蛋白的单克隆抗体(MAb)作为固相筛选分子,应用噬菌体表面展示技术,按消减、结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体七肽库,挑取噬菌体单克隆培养并采用MAb包被的ELISA鉴定,对阳性克隆测序分析,确定JEV E抗原模拟表位的氨基酸序列.设计合成包含该表位的E抗原15肽(E-365GGADSMSMAGMAVSYE-379)cDNA序列,与pGEX-KG构建重组表达质粒,诱导表达重组多肽并进行western blot验证.经过4轮筛选后,噬菌体得到高度富集,挑取单克隆采用MAb包被进行ELISA鉴定,有22个克隆呈阳性.对重组多肽进行western blot验证,结果表明该重组多肽能够特异结合兔抗JEV多克隆抗体.本实验成功筛选出JEV结构蛋白E的特异性噬菌体模拟表位,为开展用JEV抗原表位探索JEV的防制研究创造了条件,为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供重要依据.     

狐狸脑炎病毒细胞培养灭活疫苗的研究

采用分离到的狐狸脑炎病毒ＦＥＶ－Ｈ作种毒，经ＭＤＣＫ细胞培养，经最终含量为０．２％的甲醛灭活，制备狐狸脑炎病毒细胞培养灭活疫苗。皮下接种疫苗１０ｍｌ，试验狐，貉，犬均无临床特异反应，局部吸收良好。最小免疫剂量为１６倍稀释的疫苗原液１ｍｌ，使用剂量定为４倍稀释的疫苗原液１ｍｌ，试验狐狸免疫后３０天，血清中和抗体效价达到高峰值１：１４５，能耐受张毒攻击。免疫后６个月，抗体水平降至１：３２，但此时仍能耐     

柔嫩艾美耳球虫BJ株核酸疫苗的构建及其免疫保护效果研究

将 E.tenella BJ株的保护性抗原基因 TA4插入真核表达载体中 ,然后在其上游融合方式插入 Et1A基因 ,构建成核酸疫苗并进行体外表达。IFAT检测表明 ,p CT转染细胞的荧光亮度高 ,p CTE载体大 ,转染效率低 ,荧光较弱。动物保护性试验中 ,间隔一周两次免疫鸡后攻虫发现 ,核酸疫苗对球虫感染具有明显的保护作用 ,可显著减轻球虫感染引起的机体增重下降 ,其中 ,重组干扰素联合 p CT中剂量 (5 0 μg)免疫时 ,鸡的增重效果最为明显 ,盲肠病变值也最小 ,ACI可达 16 7.2。试验还发现 ,5 0 μgp CTE可达到 10 0 μg p CT的抗球虫效果 ,ACI在 16 0以上 ,说明融合插入两种基因构建的核酸疫苗对球虫感染的保护效果更佳     

日本脑炎病毒SA14-14-2株E基因的克隆及原核表达

根据GenBank公布的日本脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2减毒株E基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,采用RT-PCR方法扩增其E基因全长cDNA,将扩增产物克隆入pUCm-T载体中,测序后亚克隆到原核表达载体pET-32a( ),筛选重组质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)宿主菌.经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达产物.结果获得了含全长日本脑炎病毒E基因的重组质粒,经测序证实,与GenBank上E基因序列的同源性达到100%.所表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,为制备JEV实验室诊断抗原打下了基础.