红豆杉细胞培养生产紫杉醇的研究

紫杉醇最初是从红豆杉属植物短叶红豆杉（Taxusbrevifolia）树皮中分离出的一种二萜类化合物，它对卵巢癌、转移性乳腺癌、肺癌和恶性黑色素瘤等具有明显疗效，此外，它对类风湿性关节炎、老年性痴呆症和先天性多囊肾病等疾病的治疗也有一定的作用，是一种具有很大开发价值的抗癌药物。但是天然红豆杉生长缓慢，紫杉醇含量低，仅靠这种方式生产紫杉醇远远不能满足人们的需要，多年来，利用细胞和组织培养方法生产紫杉醇是最有效的途径。这种方法的优点是不破坏资源，只取少量材料就能得到细胞系，并且可以一代代繁殖下去，既保护了生态平衡…     

Cu2+对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响

用Ｃｕ＾２＋对红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）培养细胞中紫杉醇形成的影响进行了研究。在红豆杉细胞悬浮培养２０ｄ即指数生长期末,每１Ｌ细胞悬浮培养物中加入３０μｍｏｌ ＣｕＣｌ２,Ｃｕ＾２＋促进紫杉醇形成的作用最大。添加ＣｕＣｌ２对红豆杉细胞生长没有明显影响,但引起培养细胞中可溶性蛋白质含量、苯丙氨酸解氮酶活性及培养基ｐＨ值的变化。     

Cu2+对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响

The promotion of taxol formation by Cu²⁺ is descri bed in this pa per. The optimum improvement of taxol production by Cu²⁺ was got when 30 μmol／L CuCl₂ cell suspension cultures was added on the 20th day after inocu lation, namely, the end of exponential growth phase. The cell growth was not significantly affected by the adding, but the intracellular soluble protein con tent and phenylalanine amonia-lyase activity of cell suspension cultures, and t he medium pH value changed.     

钒酸钠对悬浮培养红豆杉细胞合成紫杉醇的影响

红豆杉细胞培养生产紫杉醇,是一种潜在的大规模生产紫杉醇的重要途径,然而和其它植物细胞培养一样,红豆杉细胞的紫杉醇含量较低等问题,限制着该技术的产业化进程。寻找提高和稳定紫杉醇产量的方法,是目前需要解决的主要问题。筛选合适的生物或非生物诱导子(如真菌培养物、茉莉酸甲酯、水杨酸、Cu2+、Ce4+、Ag+),提高细胞的紫杉醇产量,成为国内外研究的热点。     

红豆杉体外培养生产紫杉醇研究

该文从培养基组成、培养条件、培养基中不同添加物对红豆杉细胞培养和细胞中紫杉醇产量的影响 ,以及在提高紫杉醇产量中有关酶代谢调节、细胞株系选择和培养方法的改进等方面 ,着重介绍了近几年来的研究成果 .同时在毛状根培养、冠瘿瘤组织培养、水培根培养和瘤培养等培养材料的扩展方面 ,对国内外所作的尝试性研究和新的报道进行了综述 .国内外学者围绕红豆杉体外培养方法优化、提高紫杉醇产量等问题进行了许多尝试和深入细致的研究工作 ,取得了令人瞩目的进展 ,为利用红豆杉体外培养进行紫杉醇商业化生产提供了可能     

ORCA3转录因子对红豆杉细胞中紫杉醇生物合成的影响

ORCA3是一个受MeJA诱导的调控植物基础和次生代谢的转录调控因子。本文拟探讨ORCA3转录因子对红豆杉细胞中紫杉醇生物合成的影响,旨在为创制紫杉醇稳定高产的红豆杉细胞系,解决细胞大规模培养中紫杉醇含量低的瓶颈问题提供参考。从长春花中克隆ORCA3基因后,采用农杆菌介导法转入红豆杉细胞中,通过PCR、组织化学活性染色等检测法,筛选得到20余株转基因细胞系。HPLC检测转基因细胞系内紫杉醇含量表明:与阴性对照相比,转基因细胞系的紫杉醇含量增加了0.5～2.5倍,最高可达159.315μg/g。因此,ORCA3转录因子可以调控红豆杉细胞中紫杉醇合成。     

悬浮培养红豆杉细胞分裂同步化诱导

分别采用低温和咖啡因对红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）细胞进行处理,诱导细胞分裂同步化。结果显示,４℃处理２４ｈ效果最好,分裂指数提高１１５．７％,χ＾２＝１６．８２０,显著性极高。８℃处理一定时间分裂指数也可显著提高。而１５℃处理效果最差。用高浓度的咖啡因处理较短时间也可有效诱导同步化。     

云南红豆杉枝叶紫杉醇含量影响因素概述

木质部比例、采集季节、是否沾染雨雾露水、处理方法是影响红豆杉小枝叶紫杉醇类含量的因素.建议开展红豆杉枝叶样品标准的研究,尽快制订国家标准,以促使紫杉醇药物产业的发展.     

天然药物紫杉醇的研究与开发

阐述了天然抗癌新药紫衫醇的作用机理及生产途径,探讨了紫杉醇生产、应用研究存在的问题及发展前景。     

生长调节剂对红豆杉内生真菌产紫杉醇的影响

根据紫杉醇的结构特点和红豆杉中紫杉醇的合成机制,选取4种生长调节剂,研究其对红豆杉内生真菌合成紫杉醇的影响。结果表明,在发酵过程的第10天,补加下列任一生长调节剂,使发酵液中初始浓度分别达到水杨酸20.0 mg/L,茉莉酸甲酯100.0μmol/L,赤霉素2.0 mg/L,矮壮素2.0 mg/L,均能提高紫杉醇产量。同时,在发酵过程的第10天补加蔗糖,在含量不高于15 g/L时,对紫杉醇的积累和菌丝体生长具有促进作用,但是高于此浓度时,菌丝体生长受抑制,紫杉醇含量降低。     

我国3种红豆杉各部位紫杉醇含量的比较

建立红豆杉试样制备方法和紫杉醇液相色谱分析条件.分析了红豆杉不同品种、不同部位的植物原料中紫杉醇含量存在明显差异.其中树干皮、根部皮、树叶、木材和枝叶的紫杉醇平均含量分别为2.94×10-4、3.11×10-4、4.30×10-5、3.08×10-5和5.59×10-5.建议以红豆杉枝叶为原料提取、分离紫杉醇,以保护和合理开发红豆杉资源.     

福建南方红豆杉提取紫杉醇初探

本文初步测定了福建南方红豆杉中紫杉醇含量实验采用甲醇或无水乙醇作浸提剂，在室温条件下连续搅拌分别浸提试样得粗浸提液，经离心分离，取精浸提液减压蒸发得粗提取物，用二氯甲烷萃取，减压蒸发得红豆杉浸膏．ＨＰＬＣ法测定紫杉醇含量，其中紫杉醇的质量分数在树皮中为３８×１０－４，木材中为７６×１０－５，小枝叶中为５２×１０－５     

提高红豆杉内生真菌及紫杉醇含量的途径分析

近年来,利用植物内生真菌发酵法生产紫杉醇含量普遍偏低,国内外学者也正在不断探索能够提高内生真菌产紫杉醇产量的途径,分析研究表明,寻找高产菌株、优化发酵条件及研究代谢调控将是提高紫杉醇产量的有效途径。     

不同采收期东北红豆杉枝叶中紫杉醇含量分析

[目的]通过检测不同季节不同年生野生和栽培东北红豆杉枝叶中紫杉醇的含量及干物质得率确定其最佳采收期,使其药用价值得到充分的利用,为仿生东北红豆杉实现工业化生产提供理论指导。[方法]采用RP-HPLC法,TOSOH C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm)流动相为乙腈-0.2 mol/L乙酸铵-冰醋酸(41∶59∶0.2),流速为1 ml/min,检测波长为230 nm,柱温为25℃。[结果]野生和仿生东北红豆杉中紫杉醇含量最高时期在4、5月份。[结论]该方法用于紫杉醇的测定简单,快速,准确,可用于东北红豆杉枝叶中紫杉醇的含量测定。     

人工复合群落对南方红豆杉生物量及紫杉醇质量分数的影响

在不同立地条件下构建了以喜树(Camptotheca acuminata)为建群种、以南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)为伴生种、以长春花(Catharanthus roseus(L.)G.Don)为地被种的人工复合群落,并以传统人工搭建遮阴网作对照。研究表明:从3月份新枝叶萌发至12月份枝叶停止生长,3种立地条件下单种群落和复合群落南方红豆杉生物量及其枝叶中紫杉醇质量分数差异显著,对于南方红豆杉生物量,陡坡复合群落缓坡复合群落平地复合群落平地单种群落;紫杉醇质量分数在5月份、8月份和11月份都出现峰值,其中紫杉醇质量分数最高值都出现在5月份。5月份和11月份,紫杉醇质量分数峰值:陡坡复合群落缓坡复合群落平地复合群落平地单种群落;8月份,紫杉醇质量分数峰值陡坡复合群落缓坡复合群落平地单种群落平地复合群落。南方红豆杉枝叶紫杉醇质量分数季节变化与太阳辐射、温度和降雨量呈正相关,与湿度呈负相关,但相关性均不显著。     

中国红豆杉内生真菌的分离鉴定及其产紫杉醇的特性

为筛选出微生物工业化发酵生产紫杉醇类药物的优良菌株,采用高效液相色谱(HPLC)及液质联用(HPLC-MS)等方法,对秦巴山区中国红豆杉进行了内生真菌的分离鉴定及其紫杉醇含量测定。结果表明:分离到1株内生真菌(H-21),为极细孢枝孢霉(Cladosporium tenuissimum);其代谢产物中存在紫杉醇,含量为163.5μg/L。     

红豆杉内生真菌产紫杉醇的培养基优化

以红豆杉内生真菌发酵的紫杉醇产量为指标,利用HPLC法进行检测,筛选确定了发酵产紫杉醇的最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是硝酸铵。在单因素试验的基础上,进一步采用L9(33)正交试验优化培养基,培养基最佳组合为A1B2C1,即葡萄糖50.0 g/L、硝酸铵6.0 g/L、无水硫酸镁0.3 g/L,从而获得最佳发酵培养基组成:葡萄糖50.0 g/L、NH4NO36.0 g/L、KH2PO40.5 g/L、无水Mg SO40.3 g/L、维生素B10.05 g/L,其紫杉醇平均含量达到938.6μg/L。     

中国境内东北红豆杉天然群体紫杉醇含量变异规律

利用高效液相色谱仪（HPLC）检测了中国境内东北红豆杉天然群体和同一群体内不同单株的紫杉醇含量,以及不同树龄或不同季节的紫杉醇含量变化。 结果表明,不同群体之间紫杉醇含量存在显著差异,群体间差异高达2.7倍; 群体内个体间紫杉醇含量的变异与群体间相当,同一群体（汪清）内不同单株之间紫杉醇含量差异高达4.3倍. 说明紫杉醇含量变异来自于群体间和群体内,其变异组成是群体间为84.6%,个体间为15.0%, 并且东北红豆杉紫杉醇含量的广义遗传力(H[[sup]]2[[/sup]])为82%。 因此,群体选择或单株选择可望获得较大的遗传增益。 同时,紫杉醇含量随着树龄的增大而升高;在生长旺季植株内紫杉醇含量较低,进入休眠期含量较高。 紫杉醇含量与生长量、积温、无霜期、降雨呈负相关（－0.646 8、－0.479 6、－0.240 5、－0.119 2）,与针叶长度显著正相关（0.717 7）,与经度和纬度正相关（0.277 8和0.332 1）。 随着纬度升高,生长量降低,紫杉醇含量呈现增加的趋势。      

真菌诱导子对南方红豆杉细胞生长及紫杉醇合成的影响

用真菌诱导子处理南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairer)悬浮细胞,测定细胞生长指数、紫杉醇含量及其细胞酶活的变化,初步探讨真菌诱导子对南方红豆杉悬浮细胞生长的影响。结果表明,在细胞悬浮培养第8天加入100μg/m L真菌诱导子,可明显增加悬浮细胞的生物量,紫杉醇的含量也有提高;添加真菌诱导子能抑制细胞多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,有利于细胞生长。     

基于高紫杉醇质量分数的东北红豆杉优良种源选育

从东北红豆杉(Taxus cuspidata Sieb.et Zucc)国内主要分布区选取8个种源,分别在3个地点开展了种源试验,测定了12年生东北红豆杉根皮紫杉醇质量分数。结果表明,东北红豆杉不同种源间紫杉醇质量分数差异极显著(P<0.01),大兴沟种源紫杉醇质量分数最高(22.767μg/g),是最低种源(和龙)的1.69倍,因此选育出高紫杉醇质量分数的东北红豆杉优良种源——大兴沟种源。各种源紫杉醇质量分数与地点间存在显著的交互作用(P<0.01),说明某一种源紫杉醇质量分数会因立地条件和气候不同而变化。东北红豆杉优良种源适宜在吉林省中东部地区种植,在空气湿润、pH值小于7.0的沙壤土上生长良好。可采用播种和扦插方式繁殖苗木,营林方式以林下造林较好,以3～5株/穴块状造林方式最佳。