高产淀粉酶枯草芽胞杆菌的诱变选育和酶学性质研究

为了提高产淀粉酶枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis N21的酶活,试验采用紫外线对该菌株进行诱变,并对该淀粉酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明,淀粉酶酶活由出发株的32.96 U/mL增加到86.24 U/mL,比原菌株酶活提高了161.65%。该酶的最适反应温度为35℃,最适pH值为7.0,在30~40℃,pH值为5.0~8.0条件下较稳定。Ca2+和Mn2+对酶有激活作用,Cu2+、Zn2+对酶有抑制作用,而Mg2+、Fe2+对其影响较小。说明筛选出1株产酶活性较强的突变菌株。     

一株高产α-淀粉酶的地衣芽孢杆菌的筛选及鉴定

芽孢杆菌属的一些菌株对动物和人类具有广泛的作用而被认为是益生菌,其中地衣芽孢杆菌是芽孢杆菌中较具有应用潜力的菌种之一.本文从健康的鸡、鸭、鹅、马、牛、羊粪便及周边土壤中分离出12株芽孢杆菌,并通过产总淀粉酶活性和α-淀粉酶活性筛选出6株产淀粉酶的芽孢杆菌,通过形态学分析、生理生化分析及分子鉴定,确定产酶性能最优的1株芽...     

鸡肠道芽胞杆菌的分离鉴定及产蛋白菌株的筛选试验

本试验从鸡肠道中分离出菌种50株,通过对菌种菌落培养特性、形态观察、生理生化实验,初步鉴定出8株为芽胞杆菌。经产蛋白菌株的筛选试验筛选出1株能够分泌蛋白的芽胞杆菌,该菌株可望成为外源蛋白高效分泌表达的宿主。     

诱变耐金霉素,土霉素腊样芽胞杆菌菌株的实验研究

腊样芽胞杆菌经过反复诱变得到能耐金霉素、土霉素的菌株．该菌株形态、培养特性、生化反应及毒性与诱变前相同。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌发酵条件的优化

试验对从淀粉厂附近的土壤中筛选的产耐酸性α-淀粉酶的菌株发酵条件进行了考察,确定最佳发酵条件为pH 4.5、碳源为可溶性淀粉、氮源为柠檬酸二氢铵、培养温度为35 ℃、接种量为2 mL。      

粘杆菌素高产菌株的选育

以多粘芽胞杆菌BT-163为出发菌株,采用诱变与定向筛选相结合的方式,即根据粘杆菌素生物合成途径的调控机制和本身的分子结构特点,选用重金属离子和氨基酸结构类似物进行筛选,获得高产突变株。这些突变株比原菌株生产能力高出60%以上,并应用在大规模发酵生产中。平均效价从430000u/mL提高到630000u/mL。     

蛋白酶和淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质分析研究

从牛瘤胃液中筛选出一株性状优良、产蛋白酶和淀粉酶活力较高的菌株,经初步鉴定为枯草芽孢杆菌。结果表明:该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最适时间分别在培养的48h和96h,蛋白酶和淀粉酶的最高酶活力分别为221.57U/mL和54.06U/mL,最适温度分别为40～50℃和20～50℃,最适范围pH在6.0～7.0和pH6.0～8.0。     

木质素降解菌的筛选及其漆酶性质研究

为筛选产漆酶的木质素降解菌,采用愈创木酚平板法和RB亮蓝平板法进行菌株筛选,利用16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,通过液体发酵培养对漆酶活性和木质素降解能力进行研究。将漆酶基因cot A克隆到表达载体p ET-32a(+)上获得重组质粒p ET-32a(+)-Cot A并转化到BL21中进行表达,通过酶活测定将表达条件进行优化。结果:从白蚁肠道中成功筛选出1株产漆酶的木质素降解菌,鉴定为枯草芽胞杆菌。漆酶的最适酶活温度为60℃,最适酶活p H为3.5~4.0;0.2 mmol/L Cu2+可诱导菌株漆酶的产生,缩短了产酶时间并提高了酶活性。菌株木质素降解率在液体发酵培养24 h后达到了17.1%。漆酶基因大小为1 542 bp,表达的重组蛋白为85 ku,属于有活性的可溶性蛋白。在IPTG浓度为1mmol/L、Cu2+浓度为0.3mmol/L、诱导时间为9 h的条件下,漆酶蛋白活性可达到113.10 U/L。研究表明,本试验成功筛选出1株降解木质素能力较强的枯草芽胞杆菌,获得可分泌较高活性漆酶的重组菌,为木质素酶在畜牧业生产实践上的应用奠定了基础。     

紫花苜蓿的辐射诱变和筛选

通过60Co-γ射线作为辐射源进行紫花苜蓿种子的辐射,筛选出适应湘中丘陵区气候的紫花苜蓿新品种,提高湘中丘陵区紫花苜蓿的抗逆性,解决湘中丘陵区生猪养殖业中饲料不足的问题,降低生猪养殖业的饲养成本,促进湘中丘陵区家畜养殖业的发展。     

一株产赖氨酸芽孢杆菌的筛选

87株芽孢杆菌经过2次菌液上清液赖氨酸含量测定,筛选出1株赖氨酸产量较高的菌株YB83,其在LB上清发酵液中赖氨酸含量达186.85μg/mL,比对照组提高27.68%,该菌通过菌落形态、生理生化特征和分子生物学鉴定为枯草芽孢杆菌。     

枯草杆菌的淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达

根据枯草杆菌(Bacillus subtilis)基因文库中的淀粉酶基因的碱基序列,设计引物。以枯草杆菌菌体DNA为模板,利用PCR扩增出分子量大约为2.3 kb的淀粉酶基因片段。借助于核酸内切酶和连接酶把该基因植入到pHMSXD1质粒中,构建pHMSXD2质粒载体。通过高压电击处理把载体植入到大肠杆菌(JM10)中并成功表达。该株大肠杆菌在酶基因表达后,其淀粉酶活力达到1.037 6 U/mL(LB培养液)和1.361 0 U/mL(矿物元素培养液),分别比原始的枯草杆菌的淀粉酶活力提高了46倍和286倍。     

2株海洋红酵母的复合诱变及其高产类胡萝卜素菌株的选育

选用从雷州半岛近岸海域分离鉴定的2株海洋红酵母（胶红酵母J6和黏红酵母J2）作为出发菌株,进行亚硝基胍（NTG）和紫外线（UV）复合诱变,以期筛选出高产类胡萝卜素的突变株。先用NTG处理出发菌株的菌悬液60 min,再用UV照射120 s,且要连续诱变3次;每次复合诱变后的菌悬液经短时间的液体培养后涂布于红酵母琼脂平板培养,从中筛选出一定数量的第1、2和3代突变菌株;将突变菌株接种于红酵母发酵培养基,经培养、离心和烘干,制备出干菌体细胞;用分光光度计法测定干菌体细胞中的类胡萝卜素含量,筛选出高产类胡萝卜素的突变株,并进行遗传稳定性试验。结果表明,胶红酵母J6的正向突变率为56.57%（56/99）,6株高产类胡萝卜素的突变株中,第3代3株,第2代2株,第1代1株,类胡萝卜素含量最高的突变株是胶红酵母J6-82,比出发菌株提高了99.56%;黏红酵母J2的正向突变率为53.01%（44/83）,6株高产类胡萝卜素的突变株中,第3代4株,第2代2株,类胡萝卜素含量最高的突变株是黏红酵母J2-75,比出发菌株提高了93.64%。本试验采用的NTG和UV 3次复合诱变的方法有利于海洋红酵母的变异及其类胡萝卜素含量的提升,且突变菌株有良好的遗传稳定性。     

Mutation Breeding and Optimization of Enzyme-producing Condition of Bacillus lichenniformis Producing Cellulase

In order to improve the ability of producing cellulase of Bacillus lichenniformis, the mutational strain was screened after Bacillus lichenniformis LY02 was induced by UV.Then the best optimal enzyme-producing condition, inoculum size, temperature, incubation time, initial pH and metal ions were studied.The results showed that the cellulase activity of mutated strain was increased by 34.31%.And the best optimal ferment conditions were as follows:Inoculation concentration was 1.5%, cultivated temperature was 37℃, ferment time was 24 h, initial pH of medium was 5.0, and K⁺ and Ba²⁺ could promote the cellulase producing.These results were contributed to develop the strain to be applied in practice.     

产纤维素酶地衣芽孢杆菌的诱变选育及其产酶条件优化

为提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌(Bacillus lincheniformis)的产酶能力,本试验以前期分离的产纤维素酶地衣芽孢杆菌LY02作为出发菌株,通过紫外线对该菌株进行了诱变选育,筛选高产纤维素酶的突变株,并分别对其接种量、培养温度、培养时间、培养基初始pH和金属离子等产酶条件进行了优化。结果显示,经诱变选育后突变菌株的纤维素酶活力较出发菌株提高了34.31%。其最佳产酶培养条件为:接种量1.5%,培养温度37℃,培养时间24 h,培养基初始pH 5.0,K⁺和Ba²⁺对纤维素酶的产生有激活作用。本研究为进一步将高产纤维素酶的突变株开发为生产菌株提供了基础条件。     

多拉菌素的复合诱变及发酵条件优化

为通过诱变获得遗传性状稳定的多拉菌素高产菌株,对多拉菌素产生菌RDL19-1进行多种诱变处理包括常压室温等离子(ARTP)诱变,紫外(UV)诱变,及ARTP-UV复合诱变.该菌株接种瓶后于28℃摇床培养32 h,以10％的接种量转入装量为35 mL/300 mL发酵瓶中,在28℃条件下发酵培养14 d,多拉菌素发酵产量...     

凝结芽孢杆菌制剂对仔猪生长性能的影响

凝结芽孢杆菌除具有一般乳酸菌的维持肠道微生态平衡,刺激免疫,促进动物消化等益生作用外,还具有耐高温、耐酸和耐胆盐等高抗逆性,且具有较强的抑制肠道致病菌能力。选择21日龄仔猪,体重在6 kg左右90头,公母各半,分成三个组,分别为对照组（饲喂教槽料）,试验组1组（饲喂添加0.1%凝结芽孢杆菌制剂）、试验2组（饲喂添加0.2%凝结芽孢杆菌制剂）,每组30头,每组3个重复,试验期为10 d。试验结果表明：试验期间仔猪的毛色状态和精神状态指标较对照组均有所改善,试验组2平均日增重与试验组1和对照组相比差异显著（P＜0.05）,腹泻率和死亡率也有所下降,在添加量为0.2%凝结芽孢杆菌的日粮中效果优于添加量为0.1%的日粮。