葡萄糖、维生素C对普安银鲫早期发育的影响

为探究葡萄糖和维生素C（VC）对普安银鲫（Carassius auratus gibelio）早期发育的影响,采用静水溶液浸泡法研究了葡萄糖和VC溶液浸泡中普安银鲫仔鱼出膜时间、孵化率、成活率及卵黄囊仔鱼生长特点。结果显示,葡萄糖溶液质量浓度低于15 g·L^-1,仔鱼出膜时间随着葡萄糖质量浓度的增加而缩短,孵化率、成活率、体质量和全长则升高;葡萄糖溶液质量浓度高于15 g·L^-1对普安银鲫的早期发育表现出抑制作用。VC溶液质量浓度低于30mg·L^-1时,仔鱼出膜时间随着ρ（VC）的增加而降低,孵化率、成活率、体质量和全长则升高。ρ（VC）高于30mg·L^-1对普安银鲫的早期发育表现出抑制作用。研究表明适宜浓度的葡萄糖和VC能促进普安银鲫的早期发育。     

维生素C对普安银鲫胚胎发育中两种脂酶活性的影响

在水温24℃下,研究了普安银鲫(Carassius auratus)胚胎发育过程中脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)和总脂酶(GE)活性的变化特点及维生素C溶液浸泡对其影响。结果显示:(1)胚胎中LPL、HL和GE的比活力与全活力比成熟卵中高。(2)随胚胎发育,LPL、HL和GE比活力与全活力上升,自原肠中期始,LPL和HL的活性显著升高(P<0.05),出膜前期达最高。(3)30mg/L维生素C溶液浸泡促使普安银鲫胚胎发育过程中LPL、HL和GE比活力与全活力升高。合子中LPL和HL基因可能在原肠期开始表达,合成脂质水解酶分解脂质,为胚胎发育提供能量。在水体中添加适宜水平的维生素C能促进普安银鲫胚胎发育,维持机体内脂质的正常代谢。     

普安银鲫早期发育中ACCα和FAS基因表达及外源物质的影响

为了探讨普安银鲫(Carassius auratus gibelio)早期发育中乙酰辅酶A羧化酶α(acetyl-Co A carboxylas eα,ACCα)和脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)表达特点及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,采用荧光定量PCR技术检测ACCα和FAS基因在普安银鲫卵黄囊期的表达情况及mRNA表达水平,并检测了葡萄糖、维生素C对这两种基因mRNA表达量的影响。结果显示,FAS和ACCα基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达。普安银鲫卵黄囊期ACCα和FAS mRNA表达量呈"下降-上升"变化。在15 g/L葡萄糖处理组中,从内源营养期发育到外源营养期,FAS和ACCα的mRNA表达量呈上升变化,且2种基因的表达均显著高于对照组(P0.05)。在30 mg/L维生素C处理组中,FAS和ACCα的mRNA表达量呈上升变化,且在混合营养期和外源营养期,2种基因的表达均显著高于对照组(P0.05)。研究表明,普安银鲫发育至混合营养期时,机体内脂质合成代谢减弱。适宜水平的葡萄糖和维生素C均能诱导ACCα和FAS mRNA的表达,有利于鱼体内脂质的合成。     

普安银鲫胚胎发育中抗氧化酶活性及外源维生素C的作用

在水温24℃下测定了普安银鲫胚胎发育过程中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性。试验结果表明,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶在成熟卵中具有活性,分别为（10．213±0．458） U／mg、（8．701±0．371） U／mg和（55．485±4．896） U／mg ,属母源性抗氧化酶。对照组从成熟卵发育至出膜前期,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性逐渐升高,而过氧化氢酶的活性呈“升高-降低-升高”的趋势,在心跳期降到最低,为（6．175±0．532） U／m g ,随后其活性开始上升。30 m g／L的维生素C组,普安银鲫胚胎从受精卵至出膜前期,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性总体上高于对照组。胚胎发育过程中母源性抗氧化酶发挥重要作用;孵化水体中适宜质量浓度的维生素C提高了胚胎期的抗氧化能力。     

普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊期脂蛋白脂酶和肝脂酶基因的表达及葡萄糖、维生素C对其的影响

为了探讨普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊期脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase, LPL)和肝脂酶(Hepatic lipase, HL)的表达特点及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,本研究采用荧光定量PCR技术检测LPL和HL基因在普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中的表达情况及mRNA表达水平,并检测了葡萄糖、维生素C对这两种基因mRNA表达量的影响。结果显示,LPL和HL基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达,且LPL和HL mRNA表达量呈上升变化。葡萄糖组LPL和HL mRNA表达量呈上升变化,维生素C组也呈上升变化。在内源营养期、混合营养期和外源营养期,葡萄糖能显著上调LPL和HL mRNA的表达量(P<0.05);在内源营养期、混合营养期和外源营养期,维生素C能显著上调LPL mRNA的表达量,而HL mRNA的表达量在混合营养期和外源营养期显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,普安银鲫发育至混合营养期时,机体内脂质分解代谢增强。适宜水平的葡萄糖、维生素C能诱导LPL和HL mRNA的表达。     

普安银鲫胚胎发育中脂质代谢酶基因的表达及葡萄糖的影响

采用荧光定量PCR技术检测了普安银鲫胚胎发育中乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶基因表达的特点及葡萄糖浸泡的影响,以探讨乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶基因在普安银鲫胚胎发育中的表达及mRNA表达水平及葡萄糖对这4种基因mRNA表达量的影响。试验结果显示,乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶基因在普安银鲫的成熟卵期均有表达,且随胚胎发育而上升。在15g/L葡萄糖处理组中,乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶从原肠期至出膜前期mRNA表达量升高。在原肠期、晶体出现期和出膜前期,葡萄糖能显著上调脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶αmRNA的表达(P0.05)。在原肠期,葡萄糖能稍上调脂蛋白脂酶和肝脂酶mRNA的表达,但差异不显著(P0.05)。在晶体出现期和出膜前期,葡萄糖能显著上调脂蛋白脂酶和肝脂酶mRNA的表达(P0.05)。研究表明,乙酰辅酶A羧化酶α、脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶属母源性酶类,其合子基因在原肠期已经开始表达。适宜水平的葡萄糖促进脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶αmRNA的表达有利于脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶α的积累,为仔鱼出膜做准备;促进脂蛋白脂酶和肝脂酶mRNA表达有利于脂质的分解供能。     

外源性Vc对普安银鲫仔鱼抗氧化酶活性的影响

将维生素C添加到普安银鲫的孵化水体中,维生素C浓度设置为20、25、30和35 mg/L,记录孵化率及仔鱼存活率,测定各浓度组中普安银鲫(Carassius auratus gibelio)仔鱼发育过程中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,研究维生素C(Vc)对普安银鲫仔鱼发育的影响。结果显示:SOD和CAT的活性随着普安银鲫仔鱼发育时间的延长而增加,而GSH-Px活性则随着发育时间的延长而降低;30 mg/L的Vc溶液能显著(P0.05)提高普安银鲫仔鱼SOD、CAT和GSH-Px活性,且SOD的活性在出膜72 h后开始显著降低(P0.05),而CAT和GSH-Px则无显著变化(P0.05)。结果表明:普安银鲫仔鱼中抗氧化作用以SOD和CAT为主;适宜浓度的Vc添加到普安银鲫的育苗水体中能提高仔鱼的抗氧化能力。     

维生素C对普安银鲫早期发育中转铁蛋白基因表达的影响

为探讨普安银鲫早期发育过程中转铁蛋白基因表达特点和维生素C溶液浸泡对其表达量的影响,分别采用RT-PCR与荧光定量PCR技术研究了维生素C对普安银鲫早期发育中转铁蛋白基因表达的影响。试验结果表明,在成熟卵,受精卵和囊胚晚期中转铁蛋白基因均未表达,发育至原肠中期开始表达,之后呈"升高—降低—升高"的趋势,在心跳期达到最高峰,出膜前期最低;在30mg/L的维生素C处理组中,胚胎期转铁蛋白基因的表达量低于正常组,而出膜以后则高于正常组。研究表明,转铁蛋白在胚胎期的功能是独立于其结合铁之外的功能,而维生素C的添加降低了转铁蛋白在胚胎期参与免疫等方面的功能,增强了其在仔鱼中运输和转运铁离子的功能。     

维生素C对圆斑星鲽早期发育的影响

本研究旨在探究维生素C(V_C)对圆斑星鲽(Verasper variegatus)早期发育中孵化率、出膜率和成活率的影响,对其消化酶和脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)及肝脂酶(Hepatic Lipase,HL)的影响。实验用圆斑星鲽为人工受精卵,分为5组,孵化水体V_C浓度分别为0、20、25、30和35 mg/L,分别在成熟卵、受精卵、原肠中期、晶体出现期、内源营养期(2日龄)、混合营养期(6日龄)及外源营养期(9日龄)取样。记录圆斑星鲽的出膜时间、出膜率和成活率,测定对照组和生长指标优越组的消化酶活性和2种酯酶的活性。结果显示,25 mg/L的V_C能显著提高圆斑星鲽的出膜率和成活率,并缩短出膜时间(P0.05)。V_C能促进圆斑星鲽早期发育过程中蛋白质的沉积。外源营养期后,胃蛋白酶活性显著提高(P0.05),淀粉酶活性在混合营养期显著提高(P0.05),脂肪酶和胰蛋白酶活性在内源营养期就显著提高(P0.05)。25 mg/L V_C溶液浸泡使圆斑星鲽胚胎发育过程中的LPL和HL比活力显著升高(P0.05)。合子中的LPL和HL基因可能在原肠期开始表达,合成脂质水解酶分解脂质,为胚胎发育供能。研究表明,圆斑星鲽成熟卵受精后脂肪酶和胰蛋白酶酶优先发挥作用,分解卵黄中的碳水化合物为胚胎发育迅速提供能量。25 mg/L的V_C能显著提高消化酶活性,并促进蛋白质的沉积,有利于孵化成活的V_C浓度可以显著促进圆斑星鲽早期发育的脂质代谢。     

微囊藻对银鲫生长和消化酶活性的影响及毒素积累

研究了淡水常见养殖品种银鲫(Carassius auratus)在有毒微囊藻环境条件下的生长和消化酶活性以及微囊藻毒素在鱼体内的积累情况.实验分为添加有毒微囊藻的实验组和不添加微囊藻的对照组2组,每组设3个平行,每个平行10尾银鲫,实验周期42 d.结果表明,有毒微囊藻能够极显著的抑制银鲫的生长(P＜0.01),添加微囊藻实验组的增重率为38.6%,不添加微囊藻的增重率为87.70%;有毒微囊藻能显著降低银鲫的消化酶活性(P＜0.05),添加微囊藻的实验组的银鲫的肠、肝胰脏蛋白酶活性和肠、肝胰脏淀粉酶活性分别是对应不添加微囊藻的对照组活性的60.6%、71.3%、65.4%、68.2%;而且毒素会最终在银鲫体内积累,并可通过食物链传到人类,从而对人类构成潜在的风险.因此,养殖水体微囊藻水华应该被引起足够重视.     

饥饿和恢复投喂对异育银鲫生长和卵巢发育相关指标的影响

对异育银鲫进行饥饿2周后恢复投喂处理,分析体质量(107.2±7.0)g的异育银鲫的生长率及卵巢发育相关指标的变化.结果表明,饥饿处理2周后,异育银鲫恢复投喂2周,特定生长率显著高于投喂组,体质量增长接近正常投喂组,出现完全补偿生长.在饥饿过程中,卵巢发育相关指标性腺成熟系数、肝体指数、血清磷含量、血清钙含量均呈下降趋势.饥饿1周,性腺成熟系数显著低于投喂组水平;饥饿2周,肝体指数血清磷、血清钙含量和血清钙含量均极显著低于投喂组水平.恢复投喂后,4项指标均有一定程度的恢复,仍显著低于投喂组水平.说明异育银鲫饥饿2周后恢复投喂2周,其卵巢发育的恢复滞后于身体的生长.     

异育银鲫内参基因的筛选

内参基因在实时荧光定量PCR(qRT-PCR)中具有校准的作用,然而鲤疱疹病毒Ⅱ型感染异育银鲫内参基因目前仍未见研究报道。采用qRT-PCR技术检测不同处理条件下异育银鲫组织和尾鳍细胞GAPDH、EF-1α、18S rRNA和β-actin 4个候选内参基因在组织和尾鳍细胞的转录水平,利用软件geNorm、Norm Finder、Best Keeper和Delta Ct分析了其表达量的稳定性,以筛选出健康异育银鲫不同组织以及鲤疱疹病毒Ⅱ型感染的肾脏、脾脏和异育银鲫尾鳍细胞在不同时间均较稳定的内参基因。geNorm稳定值以及4个内参的表达量Ct值分析显示,健康异育银鲫脑、脾脏、肾脏、肌肉、鳃、肠、肝脏和心脏组织中β-actin和EF-1α都是比较稳定的内参基因;鲤疱疹病毒Ⅱ型感染肾脏和尾鳍细胞不同时间点,内参基因β-actin稳定性最佳;鲤疱疹病毒Ⅱ型感染脾脏不同时间点时,EF-1α稳定性最佳。分别以4个候选内参基因为内参分析PIN1基因在肾脏组织不同感染时间的相对表达量,结果进一步证实,PIN1基因在肾脏组织感染不同时间点以β-actin为内参时,其表达量呈下降趋势,与cDNA文库测序...     

乳化剂对异育银鲫消化酶及血清指标的影响

选取8000尾异育银鲫,随机分为2个处理(对照组和试验组),每处理2重复,每重复2000尾,分别饲喂含乳化剂0%和0.05%的基础日粮,试验期为62 d。试验结果表明,饲养31 d后,添加乳化剂使异育银鲫的肝胰脏胰蛋白酶的活性显著提高(P<0.01),肠道胰蛋白酶活性也表现出升高的趋势(P=0.08);血清中总蛋白、球蛋白、葡萄糖和甘油三酯的含量也显著提高(P<0.01)。饲养62 d后,添加乳化剂使异育银鲫肠道淀粉酶活性显著高于对照组(P<0.05);血清中葡萄糖和甘油三酯的含量显著高于对照组(P<0.01)。试验结果表明,饲料中添加乳化剂能够提高异育银鲫的肠道和肝胰脏消化酶的活性,促进脂肪代谢和蛋白质沉积。     

普安银鲫胚胎发育的初步研究

经人工催产、人工授精获得普安银鲫受精卵,对其胚胎发育过程和各发育时期外部形态特征进行了连续观察,并研究了不同温度条件下其胚胎发育的特点。研究结果表明,普安银鲫受精卵近似圆球形,淡灰色,沉性卵,强粘性;卵径1.50mm,吸水后1.88mm;受精后开始形成卵间隙,且植物极的卵间隙大于动物极的;卵间隙形成过程中卵黄收缩,略变小。普安银鲫胚胎发育过程可分为23个发育期,水温18℃时需98.72h出膜,水温24℃和26℃时分别需要56.48h、48.2h出膜。不同温度条件下,普安银鲫胚胎发育早期(胚盘～原肠胚)在18℃恒定水温条件下存活率最高,发育后期阶段(神经胚～出膜)在24℃恒定水温条件下存活率最高。     

洞庭青鲫幼鱼最适蛋白质需求量的研究

室内实验研究表明,洞庭青鲫幼鱼在水温(28.0±2.0)℃,水体溶解氧保持在5mg/L以上、pH为7.0~8.5、水中总氨氮小于0.5mg/L时,实验60天,用抛物线回归法求得饲料蛋白质的最适需求量为35.05%,具有最低饲料系数的饲料蛋白质含量为34.77%。     

中草药免疫增强剂对银鲫促生长效果的研究

饲料中分别添加1％的党参、黄芪、黄芩、刺五加、大蒜、黄连、螺旋藻，对银鲫均有促生长的作用，其中以螺旋藻组生长最快，增重率比对照组提高11．55％（P＜0．01），饲料系数比对照组下降了11．48％。增重率与对照组有显著差异的还有党参组、大蒜组、黄芪和刺五加组，分别提高了10．18％、7．99％、7．36％和7．29％，黄连和黄芩组增重率分别比对照组提高2．04％、2．00％，但差异不显著。     

恩诺沙星对鲫鱼血液生理生化指标的影响

采用日立7020型自动生化分析仪对投喂不同剂量恩诺沙星的鲫（Carassiusauratus）进行血浆生理生化指标的测定,实验数据用SPSS11．5统计软件进行方差分析和多重比较。实验结果表明,恩诺沙星引起鲫血清中Na＋、K＋浓度均有所升高,Na＋浓度升高较为显著;对Ca2＋浓度影响不显著。实验鲫鱼各组间的总蛋白、白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、尿素氮、肌酐等生化指标均无明显差异。     

重金属铅在鲫体内的积累特性研究

采用室内暴露试验方法,研究不同浓度的重金属铅(Ph)随时间的变化在鲫鳃、肝脏、肾脏和肌肉等组织中的积累特性.结果表明,铅在鲫鳃、肝脏、肾脏、肌肉中的积累量均随暴露时间延长而增加,但增加速率不同,鳃铅积累量与时间的拟合曲线在0.5 mg,/L时呈对数关系,其它浓度呈线性关系;不同暴露浓度下,肝脏和肾脏中铅积累速度均由慢到快,积累量与暴露时间拟合曲线呈线性关系;肌肉铅的积累速度由快到慢,且积累量与暴露时间拟合曲线旱对数关系;鲫体各部位对铅的积累能力为:肝脏>肾脏>鳃>肌肉.