1株芽孢杆菌的筛选鉴定及其净水效果研究

从刺参(Stichopus japonicus)养殖池塘底泥中分离芽孢杆菌,筛选后获得1株优势目的菌株YT-2;根据形态学特征和生理生化特性结果,将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).安全性试验证实,枯草芽孢杆菌YT-2对孔雀鱼(Poecilia reticulata)和南美白对虾(Penaeus vannamei)无毒性;水质净化试验结果显示,10 d后菌株YT-2对养殖水体中氨氮和亚硝酸盐的降解率分别为81.9％和64.3％,表明该菌对净化养殖池塘水质有明显的作用,具有作为益生菌开发应用的潜力.     

一株水产芽孢杆菌的筛选鉴定及其净水效果研究

从刺参(Stichopus japonicus)养殖池塘底泥中分离芽孢杆菌,筛选后获得1株优势目的菌株YT-2;根据形态学特征和生理生化特性结果,将其鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。安全性试验证实,枯草芽孢杆菌YT-2对孔雀鱼(Poecilia reticulata)和南美白对虾(Penaeus vannamei)无毒性;水质净化试验结果显示,10d后菌株YT-2对养殖水体中氨氮和亚硝酸盐的降解率分别为81.9%和64.3%,表明该菌对净化养殖池塘水质有明显的作用,具有作为益生菌开发应用的潜力。     

一株具水霉抑制特性的芽孢杆菌筛选及其分子生物学鉴定

以水霉菌(Saprolegnia ferax)的生物防治为切入点,通过对本实验室保存的9株芽孢杆菌(Bacillus spp.)与水霉菌JL菌株进行对峙拮抗试验,筛选出具有明显抑制水霉菌JL菌株的芽孢杆菌BA1(P<0.05)。经进一步测定菌株BA1对不同来源水霉菌株试验,结果显示菌株BA1对水霉菌株6#、10#、S2也有明显的抑制作用(P<0.05)。通过测定菌株BA1的16 S rDNA,利用BLAST软件进行同源性比对,发现与蜡样芽孢杆菌的同源性在99%以上。由此推测,菌株BA1为蜡样芽孢杆菌菌株,且具有明显抑制水霉菌作用,可以作为水产养殖上水霉病防治的生物制剂使用。     

泥鳅养殖水体中一株芽孢杆菌的筛选及其净水效果研究

从泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus）养殖池塘水体中分离到4株芽孢杆菌,筛选后获得1株优势目的菌株NQ1;根据形态学特征和生理生化特性结果,将其鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。安全性试验证实,试验浓度（最高为1×107 cfu/mL）的枯草芽孢杆菌NQ1对泥鳅是安全的。水质净化试验结果显示,在泥鳅养殖水体中加入1×107 cfu/mL浓度的NQ1,14天后氨氮和亚硝酸盐含量较对照组分别降低34.97%和89.46%,表明该菌的净水效果明显,具有作为水质改良微生态制剂开发应用的潜力。     

短小芽孢杆菌X93及胞外产物抑菌活性的研究

从健康养殖大黄鱼肠道中筛选出对病原弧菌有拮抗作用的潜在益生菌株X93,利用细菌快速鉴定系统和16S rDNA方法进行细菌种类鉴定;通过点种法对其抗菌谱进行测定;采用平板扩散法,研究了培养时间、温度、盐度、蛋白酶K和Fe3+等因素对其胞外产物抑菌活性的影响。结果显示:该菌株为短小芽孢杆菌(GenBank accession No.HM137033);对20株病原指示菌中的13株均产生不同程度的抑制作用,抗菌谱较广;菌株培养48 h后的胞外产物抑菌作用最强;在pH为7时,抑菌活性最大;达到最大抑菌活性的温度和盐度分别为28 ℃、5;蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均会降低其抑菌活性。该菌对病原弧菌、迟缓爱德华菌和嗜水气单胞菌等水产上常见主要致病菌有良好的拮抗效果,且具有抑菌作用的胞外产物对温度、盐度和Fe3+有一定的适应范围,适宜作为益生菌株,有望在实际养殖环境中得到应用。     

池塘芽孢杆菌的筛选、鉴定和生长特性研究

以高产南美白对虾池塘中分离的芽孢杆菌为研究对象,通过筛选和形态学、理化特性以及核酸特征测定,鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans,编号为ZJ0519),并对其生长特性进行了初步研究.结果表明,菌株ZJ0519生长最适温度为30～45℃,最适初始pH值为6.0～7.0,并具有广盐性,在盐度为0～30的培养基中都可以生长.此外,菌株ZJ0519发酵液代谢产物有机酸组分分析显示,主要为乳酸和醋酸,其中乳酸产量可达(7.65±0.14)g/L;为B.coagulans作为益牛菌在水产养殖池塘微生态调节中的应用奠定了基础.     

一株产絮凝剂芽孢杆菌的分离鉴定及絮凝剂特性分析

从山东及河北沿海分离到一株产絮凝剂细菌(编号200903091102,简称1102),分别用细菌全脂肪酸气相色谱法和16S rDNA序列分析比对法对该菌进行鉴定,两种方法的鉴定结果均显示细菌1102为一种芽孢杆菌(Bacillus sp.)。系统发育分析显示,细菌1102与枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、特基拉芽孢杆菌(B.tequilensis)等亲缘关系最近。应用高氏1号培养基培养细菌1102,提取其絮凝剂进行絮凝力测定,结果显示,该菌所产絮凝剂的絮凝率达到80.19%。发酵72 h时,絮凝剂得率最高达19.5 g/L;分别采用凝胶渗透色谱法、苯酚-硫酸法及氨基酸自动分析仪对所得絮凝剂的相对分子质量、多糖含量及氨基酸含量进行分析,结果显示絮凝剂的重均相对分子质量为7 063 D,多糖质量分数占58.58%,氨基酸质量分数占2.49%。提示该菌在海水养殖中将具有较高的开发价值。本研究旨在为海水养殖废水的生物净化提供科学依据。     

两株海水鱼肠道芽孢杆菌的分离鉴定及特性分析

为获取具有益生特性的芽孢杆菌(Bacillus)应用于养殖生产,从野生蓝点马鲛(Scomberomorus niphonius)和许氏平鲉(Sebastes schlegelii)肠道内分离筛选出两株芽孢杆菌,分别命名为YB1和YH2,其革兰氏染色均呈阳性,基于形态学观察、生理生化特征分析及16S rDNA序列比对,鉴定YB1为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus YB1),YH2为壁芽孢杆菌(Bacillus muralis YH2)。分析了温度、pH和NaCl含量(w/v%)对YB1和YH2生长的影响,选取蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶特性培养基检测了YB1和YH2的产酶特性,并通过腹腔注射的方式测定了YB1和YH2对许氏平鲉和大菱鲆(Scophthalmus maximus)的安全性。结果显示:YB1适宜的生长条件为温度15～35℃、pH 5～9、NaCl含量0～2%,最适生长条件为温度35℃、pH 7、NaCl含量0;YH2适宜的生长条件为温度15～45℃、pH 5～9、NaCl含量1%～3%,最适生长条件为温度30℃、pH 5、NaCl含量2%;YB1和YH2均具有产淀粉酶和蛋白酶的特性;YB1在浓度≤1×10~8 cfu·mL~(-1)时对大菱鲆和许氏平鲉均是相对安全的,YH2在浓度≤1×10~8 cfu·mL~(-1)时对大菱鲆是相对安全的。研究表明:YB1和YH2具有作为有益菌应用于海水鱼养殖的潜力,可作为候选菌株开发为芽孢杆菌微生态制剂。     

解淀粉芽孢杆菌HE活性成分鉴定及抗菌特性分析

为明确解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HE发酵液中的活性成分及抗菌特性,根据解淀粉芽孢杆菌发酵液抑菌活性稳定性,用PCR检测脂肽合成相关的基因,再采用UPLC-Q-TOF-MS对活性物质进一步分析;用二倍稀释法测定脂肽对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并从显微结构上来探讨其抗菌作用。稳定实验表明该菌株产生抑菌活性物质对高温、酸、碱和蛋白酶具有一定的耐受性;4对引物的扩增产物经过克隆、测序和BLAST分析,表明解淀粉芽孢杆菌HE基因组含有ituA、fenB、sfP、mycB的脂肽合成相关基因;液质联用分析发现脂肽粗提物中含有Surfactin、Iturin和Fengycin这3类脂肽类抗生素;抑菌圈法测定抗菌脂肽对嗜水气单胞菌的MIC和MBC均为137.97μg·mL-1;显微特征表明脂肽可以导致嗜水气单胞菌细胞膜塌陷和孔洞。该研究结果可为解淀粉芽孢杆菌活性代谢产物结构鉴定和安全性评价提供参考。     

高淀粉酶蛋白酶活力枯草芽孢杆菌菌株的筛选及鉴定

筛选高淀粉酶、蛋白酶活力枯草芽孢杆菌菌株,用于研制高效净水微生态制剂。通过对枯草芽孢杆菌液体发酵所产生的淀粉酶、蛋白酶活力的研究,从来源不同的10株枯草芽孢杆菌样品中筛选出2株蛋白酶及淀粉酶活力相对较优的菌株H001、H008,并对该2株菌株的形态、菌落形态、生理生化特征进行鉴定。基本确认所筛选到的菌株均属于芽孢杆菌属,可用于制备高效净水微生态制剂。     

Antimicrobial activity of partially characterized analytes from Bacillus pumilus(B2)

This study was carried out to characterize the antimicrobial substance produced by the strain of Bacillus pumilus (B2) obtained from Novozymes Biologicals Inc. to compare its antimicrobial activity by agar well diffusion assay and bacteriocin activity assay via critical dilution method against seven different strains of Vibrio spp., specifically V. alginolyticus (A01), V. cholerae (C01), V. fluvialis (F01, F02), V herveyii (H), V. mimicus (M01), V. parahaemolyticus (P01) and V. vulnificus (V01, V02). All Vibrio spp. were isolated from the hemolymph and intestine of the white faeces disease‐infected moribund pacific white‐leg shrimp Litopenaeus vannamei (Boone 1931) and one strain (V. harveyi) from its diseased postlarva. The cell‐free neutralized supernatant (CFNS) of B2 showed moderate thermo‐stability being stable up to 70°C for 60 min with, however, reducing activity above 80°C for 20 min. B2 antimicrobials showed a stable activity within the pH ranging from 6 to 10 at room temperature and at 4°C, while residual antimicrobial activity of crude CFNS showed tolerance to salinity up to 7% of sodium chloride below 4°C. No B2 activity was obtained while exposed to proteolytic enzyme, such as proteinase k and pepsin, while its activity kept stable exposed to lipase. Initial B2 characterization for antimicrobial substance in CFNS revealed proteinaceous in nature owing to activity loss against proteolytic enzymes and no lipid moiety activity against lipase, which could be categorized as bacteriocin‐like inhibitory substance having potential application against several strains of Vibrio spp. in aquaculture.     

枯草芽孢杆菌的分离鉴定及酶系分布的研究

从池底污泥中分离1株产芽孢杆菌,经菌落形态及主要生理生化特性鉴定为枯草芽孢杆菌。对此菌发酵过程中产酶情况作了研究,结果表明,菌株能够分泌淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶,具有用于研制微生态制剂的潜力。     

北极微生物的分离及抗菌抗肿瘤活性筛选

采用多种培养基对北极地区(海洋沉积物、湖泊沉积物及土壤)微生物进行分离,并采用琼脂平板打孔法和MTT法进行了抗菌、抗肿瘤活性菌株的筛选.共分离极地微生物151株,筛选结果显示,12.4%的菌株有抗菌活性,6.2%菌株有抗肿瘤活性,其中3株同时具有抗菌、抗肿瘤活性,表明极地有良好的微生物药用资源.     

抗弧菌海洋细菌的分离筛选及其抗菌作用测定

采集连云港海域海水、海泥以及海洋动植物等样品86个,分离到海洋细菌176株.以病原性弧菌鳗弧菌为指示菌,采用平板对峙法在2216E培养基上测定不同海洋细菌菌株的抗菌作用, 其中XDY-7-4、YC-6-3、BM-1、BN-1、BN-2和XS1-5等6个海洋细菌菌株有明显的抗菌作用,菌株BN-1的抑菌带为11.2 mm,抗菌作用最强;其次为菌株XS1-5 、XDY-7-4 和YC-6-3,抑菌带宽度为10.4、10.2、9.9 mm;菌株BN-2和BM-1对鳗弧菌的抑菌作用较弱. 采用打孔法测定不同海洋细菌菌株无菌发酵液的抗菌作用,结果表明,菌株BN-1对鳗弧菌生长的抑制作用最明显,其次为菌株YC-6-3和XDY-7-4,菌株BM-1、XS1-5和BN-2的抗菌效果较弱.     

养殖中华鳖肠道中芽孢杆菌的分离鉴定及其噬菌体的分离和性质分析

从中华鳖肠道组织中分离得到3株芽孢杆菌,经菌落及菌体形态、主要生理生化特征鉴定及16SrDNA序列分析,其中一株菌被鉴定为短小芽孢杆菌,另外2株菌为沙福芽孢杆菌。以其中的短小芽孢杆菌为指示菌,从中华鳖养殖水体中分离得到其噬菌体,并对其性质进行研究。研究结果表明,该噬菌体具有较高的热稳定性和较广的pH适应范围,对紫外线较敏感,感染宿主菌的潜伏时间为10min,爆发时间为70min,裂解量约为94.25。     

Isolation of a novel strain of Bacillus pumilus from penaeid shrimp that is inhibitory against marine pathogens.

A bacterium was isolated from the mid-gut of healthy black tiger shrimp, Penaeus monodon , based on a large zone of inhibition in mixed culture on solid medium. The isolate was a Gram-positive, motile spore former, with an optimum pH range for growth in tryptone soya broth containing 2% NaCl of between pH 6 and 9. The bacterium was highly salt tolerant with concentrations between 0% and 8% having no detrimental effect on growth. The isolate was identified as Bacillus pumilus based on physiological capabilities using the API50CHB and Biolog systems. Amplification and sequencing of the 16S rRNA gene followed by phylogenetic analysis confirmed its identity. The Bacillus pumilus isolate was strongly inhibitory against the marine bacterial pathogens Vibrio alginolyticus , V. mimicus and V. harveyi , and weakly inhibitory against V. parahaemolyticus in cross-streaking assays on solid medium. The organism was marginally self-inhibitory, and inhibited B. licheniformis and B. subtilis . The suitability of the B. pumilus isolate for use as a probiotic in farmed shrimp was further supported by the absence of any of the known B. cereus enterotoxin genes. Based on these in vitro results, in vivo safety and efficacy trials are underway to determine suitability of the novel strain as a commercial probiotic.     

枯草芽孢杆菌B7的分离和净化水质的初步研究

对水产养殖水体及底泥中的芽孢杆菌进行分离,得到四株芽孢杆菌。筛选各项指标较好的B7,研究其对水质的净化作用。结果表明,添加枯草芽孢杆菌后,池水的氨氮和亚硝酸盐浓度比对照池显著降低,即枯草芽孢杆菌B7对水质具有明显的净化作用。     

一株芽孢杆菌的分离、鉴定及其对仿刺参免疫的影响

从大连湾地区健康的刺参养殖池塘沉积物中分离出一株优势菌株B4,通过菌落特征、生理生化特性和16SrDNA同源性分析,确定菌株B4为芽孢杆菌属。该菌株在温度20~35℃,pH 6~9,盐度3~7.5下生长良好。采用108cfu/mL密度的B4菌液投喂仿刺参,投喂后第0、7、14、21d和第28d测定仿刺参体腔液中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶和酚氧化酶的活性。试验结果表明,第7d时,试验组仿刺参腔液中碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶和酚氧化酶的活性显著高于对照组(P0.05);第21d时,试验组仿刺参腔液中溶菌酶的活性显著高于对照组;第28d时,酸性磷酸酶的活性与对照组具有极显著差异(P0.01),说明B4可提高仿刺参体腔液中酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶和酚氧化酶5种免疫酶的活性,对仿刺参有一定的免疫刺激作用。     

罗非鱼源蜡样芽孢杆菌分离、鉴定及药敏特性研究

从福建漳州某养殖场患出血病死亡的罗非鱼肝脏、肾脏及脾脏分离到一株致病性菌株FJLF。对该菌进行了形态特征观察、理化特性测定及16S rRNA序列分子鉴定。生理生化特征和16S rRNA基因序列分析结果显示,分离到的FJLF株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。人工感染该菌后发病鱼出现与自然发病类似症状,且从病灶中分离到与原感染菌一致菌株。腹腔注射后该菌株对罗非鱼的半致死剂量LD_(50)=2.30×10~6CFU/g。FJLF株对诺氟沙星、头孢噻肟、新霉素及卡那霉素等8种抗生素高度敏感;对环丙沙星、痢特灵、红霉素及链霉素中度敏感;对苯唑西林、青霉素、头孢拉定及阿莫西林等10种抗生素耐药。     

洛河水域光合细菌的分离鉴定及体外抑菌作用研究

光合细菌作为重要的微生物资源,对它进行研究开发应用具有重要的意义。本试验从光合细菌的分离鉴定及抑菌作用出发,以期得到较好的菌株用于水产养殖中。试验通过选择性富集培养的方式从洛阳市洛河分离得到光合细菌,通过形态学观察,以伯杰氏细菌鉴定手册为依据进行鉴定,鉴定结果为：污水中培养物为沼泽红假单胞菌,清水中培养物为万尼氏红微菌。体外抑菌试验表明分离得到的光合细菌对G+ 、G- 模式菌种大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有较强的抑菌活性。