嗜水气单胞菌疫苗免疫效果研究

选取对鲤鱼毒力强的嗜水气单胞菌菌株制成灭活疫苗,研究疫苗的免疫保护效应.采用甲醛灭活制备疫苗,分别对鲤鱼进行注射和浸泡试验,测定白细胞吞噬活性、淋巴细胞转化能力、血清、皮肤黏液的抗体效价及活菌攻毒后的免疫保护率.结果表明,受免鱼各项指标均明显高于对照组,注射组免疫保护率达90%,其中浸泡组各项略低于注射组.嗜水气单胞菌灭活疫苗对鲤鱼有显著免疫保护效应,可作为预防细菌性败血症感染的疫苗.     

白鲢对嗜水气单胞菌疫苗的免疫应答

用嗜水气单胞菌9120株制备了鱼类出血性败血症疫苗。用该疫苗分二组对白鲢进行免疫，检测免疫后白鲢血清中的抗体水平，其中加佐剂免疫组获得了较高滴度的凝集抗体，不加佐剂免疫组产生的凝集抗体滴度较低，但用间接血球凝集试验可以检出。     

嗜水气单胞菌溶血毒素对草鱼血细胞的溶血作用

通过嗜水气单胞菌菌体和菌液上清对草鱼的体外溶血试验,发现菌细胞在培养 12hr后即具最高溶血活性,而菌液上清在菌培养 60hr后才达到最高溶血活性;在 pH6～ 8范围内嗜水气单胞菌溶血素可维持高溶血活性,而维持高溶血活性的最适培养温度为 35℃;部分糖和二价金属盐类可在不同程度上影响菌液上清的溶血活性。     

嗜水气单胞菌血毒素对草鱼血细胞的溶血作用

通过嗜水气单胞菌菌体和菌液上清对草鱼的体外溶血试验,发现菌细胞在培养１２ｈｒ后即具最高溶血活性,而菌液上清在菌培养６０ｈｒ后才达到最高溶血活性;在ｐＨ～８范围内嗜水气单胞菌溶血素可维持高溶血活性,而维持高溶血活性的最适培养温度为３５℃;部分糖和二价金属类可在不同程度上影响菌液上清的溶血活性。     

口服嗜水气单胞菌生物被膜疫苗的动物免疫试验

将热灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)生物被膜(biofilm,BF)菌苗和浮游(freecell,FC)菌苗口服免疫小鼠和剑尾鱼,通过测定抗体效价、相对保护率、小鼠的淋巴细胞转化和肠道sIgA浓度,评价免疫效果。免疫20d后,BF菌苗组50尾剑尾鱼的相对保护率为68%;FC菌苗组为42%。BF菌苗组12只小鼠的相对保护率为70%;FC菌苗组为50%;对照组为17%。BF菌苗组小鼠外周血淋巴细胞转化率是7.28、FC菌苗组为3.87、对照组为2.36。BF菌苗组小鼠肠道sIgA浓度是1.22μg/mL;FC菌苗组为0.73μg/mL;对照组为0.465μg/mL。免疫30d后,小鼠的血清凝集抗体达到最高,BF组抗体达128:1,FC组为32:1,对照组为2:1。各组间差异显著(P<0.01)。结果表明,BF菌苗较FC菌苗能更有效地刺激机体的免疫系统,尤其是肠道淋巴组织的免疫应答,对剑尾鱼和小鼠具有较好的保护力。     

单壁碳纳米管载嗜水气单胞菌外膜蛋白亚单位疫苗的研制及免疫效果评价

为了筛选细菌的疫苗候选蛋白,本实验根据课题组前期的研究,挑选了2个嗜水气单胞菌外膜蛋白(A0KLQ6和A0KH89),以A0KHR9(OmpAII)为对照,通过比较外膜蛋白与碳纳米管载外膜蛋白通过腹腔注射与浸泡免疫模式,比较和评价斑马鱼的免疫反应与免疫保护效果。结果显示,腹腔注射组和浸泡组与普通蛋白组对比,碳纳米管载蛋白能够显著提高斑马鱼免疫相关基因表达量。腹腔注射组在5μg剂量下免疫A0KHR9、A0KLQ6和A0KH89蛋白分别获得61.60%、 65.39%和84.96%相对免疫保护率(relative immune protection rate,RPS),在5μg剂量下免疫碳纳米管载蛋白SWCNTs-A0KHR9、SWCNTsA0KLQ6和SWCNTs-A0KH89分别获得68.10%、77.50%和90.43%的RPSs。浸泡组在40 mg/L剂量下免疫A0KHR9、A0KLQ6和A0KH89蛋白分别获得30.80%、25.85%和37.80%的RPSs,在40 mg/L最高剂量下免疫碳纳米管载蛋白疫苗SWCNTs-A0KHR9、SWCNTsA0KLQ6和SWCNTs-A0...     

嗜水气单胞菌疫苗的初步研究

用来源于乌鳢腹水病的嗜水气单胞菌，制成菌体抗原与可溶性抗原，分6组注射接种湘鲫，检测供试鱼血清中凝集抗体效价。结果表明：菌体抗原组与可溶性抗原组分别在第2l天和第14天达到峰值，然后随免疫时间逐渐下降。加弗氏不完全佐剂的菌体抗原组与可溶性抗原组分别在第2l天与第35天分别达到峰值。并保持此水平。对鱼体免疫35天后的保护率进行测定，结果表明：疫苗组为100％，佐剂组为30％．生理盐水对照组为0％。     

鳜浸泡嗜水气单胞菌全菌疫苗后皮肤黏液抗体的变化

应用间接ELISA方法,研究经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)疫苗浸泡免疫后鳜(Siniperca chuatsi)皮肤黏液中抗体消长规律,以揭示鳜局部黏膜免疫在免疫保护中的作用及浸泡免疫的保护效果。结果表明,鳜皮肤黏液中抗体滴度在免疫后第7天达到峰值211,抗体从开始形成到消失持续21 d;添加佐剂(IMS1312、葡聚糖、莨菪碱、食盐)可以提高鳜皮肤黏液及血清中抗体滴度和相对免疫保护率,其中添加IMS1312组免疫保护率最高,达77.8%,免疫保护与抗体滴度成正相关(R2=0.79,P<0.05);以溶菌酶为代表的非特异性免疫在免疫后1周内即抗体未形成时,对鱼体起主要保护作用。此外,通过比较鳜血清与皮肤黏液中的抗体消长规律,发现血清中抗体滴度峰值出现时间较迟(第14天),抗体持续时间较长(42 d),初步推断鳜皮肤黏膜中可能存在相对独立于全身免疫系统的局部黏膜免疫系统。     

嗜水气单胞菌和河弧菌二联疫苗对鲫鱼的免疫效果

在采用正交试验设计优化了Aeromonas hydrophila和Fibrio fluvialis二联全菌疫苗制备工艺的基础上．研究了采用该工艺所制备的疫苗对鲫鱼的免疫保护效果。结果表明注射免疫鲫鱼4周后,抗A.hydrophila和V．fluvialis血清凝集效价分别为1：4-1：32和1：2-1：16,平均都为1：10,但对攻毒均具有有效的保护作用。浸泡免疫、高渗浸泡免疫或加多糖浸泡免疫在免疫4周后,对A．hydrophila攻毒均无保护作用;然而,加多糖浸泡免疫对V.fluvialis攻毒可产生有效的保护。免疫扩散试验表明,在煮沸并经超声波处理后的A．hydrophila或V.fluvialis菌液中均存在两种优势抗原。     

嗜水气单胞菌对框镜鲤免疫实验研究

嗜水气单胞菌是水产动物的常见致病菌,本研究利用在生理生化和PCR鉴定的基础上确定为嗜水气单胞菌,并经PCR和药物敏感性实验确定对多种抗菌药物具有耐药性的嗜水气单胞菌多重耐药株。用该菌株制备细菌疫苗对框镜鲤进行免疫实验,免疫方法采用浸洗2 min,1.5、3、6个月后分别进行注射攻毒,攻毒实验结果显示免疫保护率60%~95%,实验室安全性检测结果为安全可靠。该方法避免了逐尾鱼注射造成的较大的工作强度,为在生产实践中广泛应用预防多重耐药嗜水气单胞菌所引起的疾病奠定了基础。     

草鱼体表嗜水气单胞菌拮抗细菌S190的分离鉴定及生物学特性研究

由采集的草鱼体表细菌中,分离筛选到1株抗嗜水气单胞菌较强的菌株S190。通过对该菌株个体和群体形态特征观察、生理生化特征测定及16SrDNA序列分析,初步确定为Jeotgalicoccus psychrophilus S190。杯碟法拮抗试验表明,S190对嗜水气单胞菌有较强的抑制作用;最适作用条件为25℃、pH8．0。该菌株对葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌也表现出一定程度的抑制作用。生物学特性研究表明：S190生长最适碳源为1％的糊精,氮源为0．01％的酵母粉,磷源为0．01mol／L的K2HPO4;培养温度25℃,pH10,NaCl浓度5％（m／V）,接种量3％（V／V）,装液量以250ml三角瓶装250ml生长最好。     

多次口灌呋喃唑酮在草鱼体内残留研究

报道了多次口灌呋喃唑酮(60 mg/kg,连续3 d,每天1次)在草鱼体内血浆、肌肉、肝脏和肾脏中的消除与残留研究。采用高效液相色谱法(HPLC)检测用药后不同时间各组织中药物浓度,M ILLEMNIUM32工作站处理原始数据,MCPKP药代动力学软件处理药时数据。结果表明:多次口灌呋喃唑酮在草鱼体内的药时数据符合一级速率吸收一室开放模型,其主要药动学参数为:AUC 2.3182μg.h/m l,Cmax 0.850μg/m l,Ka 0.5515 h-1,K 0.0936 h-1,T1/2ka1.2565h,T1/2k7.4308h,Tp 2.8732 h,药物在血浆、肌肉、肝脏、肾脏中消除时间分别为:72 h、15 d、20 d、20 d。     

硫丹对草鱼鱼种的急性毒性效应

以草鱼为受试生物,研究了硫丹对鱼类的急性毒性效应影响。研究结果表明,水中硫丹对草鱼鱼种的24、48、72、96h半致死质量浓度分别为3.82、2.52、1.86、1.42μg/L;安全质量浓度为0.33μg/L;试验鱼的死亡率随硫丹暴露质量浓度的升高而增大,表现出明显的剂量-效应关系。根据化学物质对鱼类毒性分级标准,硫丹对草鱼为剧毒。     

草鱼酶解技术研究

应用对比试验和正交试验方法对草鱼进行酶解技术研究。试验结果表明,胃蛋白酶酶解草鱼酶用量为（E／S）0．6％,温度55℃,pH2．0,酶解5h氨基态氮含量较高,为0．0190g／L;枯草杆菌蛋白酶酶解草鱼酶用量为（E／S）0．01％,温度45℃,pH6．5,酶解4h氨基态氮含量较高,为0．0417g/L;胰蛋白酶酶解草鱼酶用量为（E／S）0．64％,温度50℃,pH8．0,酶解5h氨基态氮含量较高,为0．0472g／L。通过对3种蛋白酶在最优条件下酶解草鱼肉的比较可知,枯草杆菌蛋白酶和胰蛋白酶酶解效果较好。为草鱼深加工提供了一定的科学依据。     

Effects of Chitosan Coatings Enriched with Different Antioxidants on Preservation of Grass Carp (Ctenopharyngodon idellus) During Cold Storage

To investigate the effects of chitosan composite coatings for maintaining the quality of grass carp portions, indictors of microbiology (total bacteria count, TBC), chemistry (pH; total volatile basic nitrogen, TVB-N; 2-thiobarbituric acid, TBA; K-value), and sensory characteristics were analyzed periodically. The results showed that chitosan (1.5%, w/v) + acetic acid (1.0%, v/v) + tea polyphenol (TP, 0.5%, w/v) coating significantly (p ≤ 0.05) reduced growth of microorganisms as reflected in TBC, lipid oxidation as displayed in TBA, chemical spoilage as reflected in pH, TVB-N, K-value, and sensory characteristic scores compared to the control samples. The effect of chitosan (1.5%, w/v) + acetic acid (1.0%, v/v) + vitamin C (VC, 0.5%, w/v) coating was better than chitosan (1.5%, w/v) + acetic acid (1.0%, v/v) coating. Chitosan together with acetic acid and TP can be used as a type of preservative coating for grass carp portions under chilled storage.     

草鱼含信号肽分泌蛋白的预测分析

采用组合的信号肽分析软件SignalP 3.0,TMHMM 2.0,big-PI,TargetP 1.1和Lipop 1.0对已公布的522个草鱼ORF编码蛋白的N端氨基酸序列进行信号肽分析,同时系统分析了信号肽的类型及结构。结果表明,522个草鱼氨基酸序列中分泌蛋白有61个,占其基因组编码蛋白的11.7%。编码这些蛋白的可读框(ORF)最小值为127 bp,最大值为5032 bp,平均910 bp,引导它们的信号肽长度介于15～32个氨基酸之间,平均为21个氨基酸。通过对草鱼分泌蛋白切割位点信号肽类型分析发现具Ⅰ型信号肽的分泌蛋白有17个,Ⅱ型的有4个。草鱼分泌蛋白中,42个具可预测功能,19个为未知功能蛋白。已知功能的分泌蛋白主要集中于细胞代谢,细胞调控及转运,细胞膜结构,细胞的免疫等领域。     

几种免疫增强剂对草鱼SOD、CAT及AKP活性的影响

将草鱼放入网箱中,投喂在基础饲料中分别添加不同剂量的黄芪多糖、枸杞多糖和金丝桃素的饲料,研究其对草鱼血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及碱性磷酸酶(AKP)活性的影响。结果表明:投喂添加中药免疫增强剂的饲料60d后,与对照组相比,血清中CAT和AKP活性变化不明显(P0.05);血清中SOD活性显著高于对照组(P0.05),说明中药免疫增强剂对增强草鱼免疫活性具有一定的作用。     

光合细菌添加剂在草鱼夏花培育中的应用

光合细菌 (简称ＰＳＢ)属红螺旋菌科细菌 ,含蛋白质 ( 60 %以上 )、菌叶绿素、各类胡萝卜素和促进动物生长发育的生理活性物质 (辅酶Ｑ和Ｂ族维生素等 ) ,且有防治疾病、净化水质的功能 ,并能以有机物作为光合作用的供氧体兼碳源。为了试验光合细菌在养鱼生产中的效果 ,我们进行了在草鱼夏花培育过程中添加光合细菌的试验 ,现将试验情况报告如下。1　试验材料与方法1 1　池塘条件在东圳水库管理局鱼种场选择 3口池塘 ,面积分别为 1号池 470ｍ2 、2号池 5 30ｍ2 、3号池61 0ｍ2 (对照池 ) ,水深均为 1ｍ左右 ,使用同一水源 ,放养前用生石灰…     

汞、铅对草鱼鱼苗的联合毒性研究

采用静水法测试了汞(Hg2+)、铅(Pb2+)对草鱼鱼苗的联合毒性效应及对其肝脏、肾脏和鳃组织结构的影响.试验结果显示,暴露时间为24、48、72、96 h的相加指数分别为-0.4582、-0.5100、-0.5257、-0.5611,均小于0,表现为拮抗作用.对暴露后鱼体组织结构的观察结果表明,不同质量浓度的汞、铅混合药液引起的草鱼组织结构发生了不同程度的病变.