几种杀菌剂对番茄青枯病菌的抑菌活性

采用番茄青枯病防治中3种已登记杀菌剂和7种未登记杀菌剂对番茄青枯病菌进行室内毒力测定,并通过EC50和病原菌的抗性水平进行抑菌作用对比。结果表明:在10种药剂中,以已登记的3%中生菌素WP抑菌效果最好,EC50值为1.308 mg/L,番茄青枯病菌对其表现敏感;在未登记的7种杀菌剂中,0.5%氨基寡糖素AS的抑菌效果最好,EC50值为2.180 mg/L,番茄青枯病菌对其表现敏感。     

核桃青皮提取物对四种植物枯萎病菌的抑菌作用

为了研究核桃青皮提取物对4种植物枯萎病菌的抑菌作用,笔者采用甲醇、氯仿、石油醚对核桃青皮进行提取,并对抑菌活性最高的提取物（甲醇提取物）进行初步萃取分离,测定了不同溶剂粗提物和甲醇提取物不同溶剂萃取液对茄子枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、辣椒枯萎病菌和西瓜枯萎病菌的抑菌活性。结果表明,核桃青皮甲醇粗提液对4种供试枯萎病菌的抑制效果最好,浓度为4.0 mg/mL时,对黄瓜、茄子、辣椒枯萎病菌的抑制率均在60%以上,对西瓜枯萎病菌也为37.9%;核桃青皮甲醇提取物石油醚萃取物对西瓜枯萎病菌的抑制效果最好,抑制率为65%,对菌丝生长的EC50为4.45 mg/mL;氯仿萃取物对黄瓜、茄子枯萎病菌的抑制率最高,分别为65%、62.3%,对菌丝生长的EC50分别为4.46、3.51 mg/mL;甲醇萃取物对辣椒枯萎病菌的抑制效果较好,抑制率为63.94%,对菌丝生长的EC50为4.23 mg/mL。     

核桃青皮提取物对4种植物枯萎病菌的抑菌作用研究

为了研究核桃青皮提取物对4种植物枯萎病菌的抑菌作用,笔者采用甲醇、氯仿、石油醚对核桃青皮进行提取,并对抑菌活性最高的提取物(甲醇提取物)进行初步萃取分离,测定了不同溶剂粗提物和甲醇提取物不同溶剂萃取液对茄子枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、辣椒枯萎病菌和西瓜枯萎病菌的抑菌活性。结果表明,核桃青皮甲醇粗提液对4种供试枯萎病菌的抑制效果最好,浓度为4.0mg/mL时,对黄瓜、茄子、辣椒枯萎病菌的抑制率均在60%以上,对西瓜枯萎病菌也为37.9%;核桃青皮甲醇提取物石油醚萃取物对西瓜枯萎病菌的抑制效果最好,抑制率为65%,对菌丝生长的EC50为4.45mg/mL;氯仿萃取物对黄瓜、茄子枯萎病菌的抑制率最高,分别为65%、62.3%,对菌丝生长的EC50分别为4.46、3.51mg/mL;甲醇萃取物对辣椒枯萎病菌的抑制效果较好,抑制率为63.94%,对菌丝生长的EC50为4.23mg/mL。     

海南生姜青枯病菌对农用链霉素的敏感性测定

从海南白沙、文昌等市县生姜主要种植区采样,经分离、纯化,获得生姜青枯病菌(Ralstonia solanacearum)菌株27株,采用抑菌圈法对72%农用链霉素可湿性粉剂进行了敏感性测定。结果表明:不同地理来源的生姜青枯病菌对农用链霉素敏感性差异明显,同一来源地的不同菌株也有一定的差异。EC50值分布在3.22~71.07μg/m L,平均EC50为34.69μg/m L;其中,白沙荣邦RB-2菌株最敏感,EC50为3.22μg/m L;而白沙邦溪BX-3菌株敏感性最低,EC50为71.07μg/m L。敏感性分布频率呈连续性单峰曲线,EC50值表现连续,符合正态分布,其平均EC50值34.69μg/m L可作为海南生姜青枯病菌对农用链霉素的敏感性基线,用于海南生姜青枯病菌对农用链霉素的抗药性监测。     

一辛基代二亚乙基三胺抑菌活性初步研究

采用菌丝生长速率法测定了一辛基代二亚乙基三胺对12种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:当一辛基二亚乙基三胺的浓度为100mg/L时,对小麦根腐病菌、葡萄白腐病菌有较高的抑菌活性,抑菌率分别为89.95%、100%。当浓度达到200mg/L时,对番茄绵腐病菌、小麦赤霉病菌也有较高的抑菌活性,抑菌率分别为79.86%、100%。化合物对番茄绵腐病菌、小麦根腐病菌、小麦赤霉病菌、葡萄白腐病菌都有较高的抑菌活性,有效中浓度(EC50)分别为81.68mg/L、24.45mg/L、90.63mg/L和44.00mg/L。对柑橘炭疽病菌和黄瓜枯萎病菌的抑制效果不明显,有效中浓度(EC50)分别为210.46和262.69mg/L。与对照药剂多菌灵相比,对番茄绵腐病菌、小麦纹枯病菌和小麦根腐病菌具有明显的抑制效果,有效中浓度(EC50)分别为81.68mg/L、44.00mg/L和93.74mg/L,大大优于多菌灵的4.96×108、1.37×105和551.01mg/L。     

地肤子水提液及大孔树脂分离物的抑菌作用

为研究地肤子水提液对植物病原真菌的抑制作用及其活性部位,试验用生长速率法测定了水提液对10种植物病原真菌的抑菌效果和指示菌的室内毒力,并确定了水提液经大孔树脂分离后的抑菌活性部位。结果表明:地肤子水提液对植物病原真菌有良好的抑制作用,在质量浓度为106mg/L时水提液对辣椒炭疽病菌抑菌活性最强,抑制率为99.96%,EC50值为2.28×104mg/L,经大孔树脂分离20%乙醇洗脱液抑制辣椒炭疽病菌活性最强,抑制率达100%,EC50值为5.46×103mg/L。抑菌物质可能是极性较强的成分。     

抗菌肽对辣椒青枯病菌的抗性研究

对接种青枯病菌后的转抗菌肽辣椒叶片过氧化氢(H2O2)含量、多酚氧化酶(PPO)活性进行研究。结果表明:辣椒叶片H2O2含量在接种12 h后升高,对照和转抗菌肽植株的变化趋势相近,但植株间变化幅度差异明显。转抗菌肽植株接种12 h后,PPO活性显著降低,说明转抗菌肽辣椒的对青枯病菌的抗性增强。     

核桃内生菌HT-6发酵滤液的抑菌作用研究

为了明确核桃内生菌HT-6菌株对植物病原菌的抑菌活性,采用菌落直径生长法和悬滴法测定了发酵滤液对植物病原菌菌丝和孢子萌发的抑制作用。结果表明,发酵滤液对供试的5种病原真菌均有较强的抑菌活性;其中,对辣椒炭疽病菌的抑菌效果最强,EC50为35.1μL/m L,对番茄灰霉病菌的抑菌效果相对较弱,EC50为115μL/m L;发酵滤液浓度为200μL/m L时对辣椒炭疽病菌、核桃枯梢病菌、苹果树腐烂病菌的抑菌率都在80%以上;浓度为200μL/m L时对梨黑斑病菌的孢子萌发抑制率就达到了100%,500μL/m L时对番茄灰霉病菌、辣椒炭疽病菌、梨黑斑病菌这3种病原菌的孢子萌发抑制率都达到或接近100%。因此,HT-6菌株在植物病害的生物防治方面具有很大潜力和价值,值得进一步开发研究。     

细辛醚对20种植物病原真菌的抑菌活性

为了进一步明确细辛醚的抑菌活性,采用离体抑菌活性测定、盆栽试验以及活体组织法,测定了细辛醚对20种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明,细辛醚对黄瓜菌核病菌、水稻纹枯病菌、小麦纹枯病菌、甘蓝黑斑病菌、辣椒疫霉病菌、小麦全蚀病菌、番茄灰霉病菌均具有较好的抑制作用,其EC50为30.93~70.67 mg/L;对番茄叶霉病菌、苹果炭疽病菌、玉米大斑病菌、黄瓜炭疽病菌孢子萌发也有较好的抑制作用,其EC50为39.19~86.37 mg/L;1000 mg/L细辛醚对小麦白粉病、番茄灰霉病具有较好的保护作用,其防效分别为68.64%,68.40%。可见,细辛醚对多种植物病原真菌均有较好的抑制活性。     

29种常用杀菌剂对番茄枯萎病菌和青枯病菌的室内毒力测定

在实验室内,采用菌丝生长速率法测定了29种杀菌剂对番茄枯萎病菌的抑菌效果,采用纸碟法测定了29种杀菌剂对番茄青枯病菌的抑菌效果。结果表明,有10种杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力较强(EC50值10 mg/L),其中50%多菌灵可湿性粉剂对番茄枯萎病菌的毒力最强,其EC50值为0.1218 mg/L,其次依次为25%氰烯菌酯悬浮剂、10%氟硅唑微乳剂、25%啶菌唑乳油、5%己唑醇悬浮剂、10%腈菌唑乳油、75%百菌清可湿性粉剂、3%中生菌素可湿性粉剂、50%异菌脲可湿性粉剂、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂;有3种杀菌剂对番茄青枯病菌的毒力较强,其中3%中生菌素可湿性粉剂对番茄青枯病菌毒力最强,其EC50值为3.3742 mg/L,其次依次为80%代森锰锌可湿性粉剂、2%春雷霉素水剂。     

辽细辛提取物对拟盘多毛孢菌的离体抑制作用

采用生长速率法和孢子萌发法测定了辽细辛根的不同溶剂(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇)粗提取物和精油对引起牡丹叶斑病的拟盘多毛孢菌菌丝生长和孢子萌发的作用。结果表明,细辛不同溶剂提取物和精油对拟盘多毛孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有一定的抑制作用,且对孢子萌发的抑制效果好于对其菌丝生长的抑制效果;石油醚提取物和精油的抑菌效果较好,对菌丝生长的EC50分别为94.91 mg/L和120.44 mg/L,对孢子萌发的EC50分别为132.64 mg/L和110.66 mg/L。说明细辛所含的主要抑菌活性成分易被极性小的有机溶剂所提取,细辛精油中也含有抑菌活性物质。     

3种抑菌剂对蛇足石杉内生真菌黑曲霉的抑制效果研究

[目的]探索3种抑菌剂对蛇足石杉内生真菌黑曲霉的抑制效果。[方法]采用平板涂布法分离获得供试菌,用菌丝生长速率法测定3种抑菌剂对黑曲霉的抑制效果。[结果]两性霉素B、苯甲酸钠、肉桂醛对黑曲霉的最低抑菌浓度分别为512.000 00 mg/L、4.00g/L、0.500 00 mg/L;EC50分别为1.910 00、150.000 00、0.120 00 mg/L,EC90分别为88.220 00、730.000 00、0.330 00 mg/L;3种抑菌剂中较优的抑菌剂为两性霉素B。[结论]该研究获得了3种抑菌剂的最低抑菌浓度,为蛇足石杉组织培养的深入研究提供了试验基础。     

广西地不容内生真菌DBR-12和DBR-23代谢产物的抑菌活性

研究从广西地不容块根中分离出的DBR-12和DBR-23两株内生真菌的抑菌活性,为其在抗菌剂领域的开发利用提供依据。首先用液体培养基对内生真菌进行发酵培养,采用两相溶剂液液萃取法对发酵产物进行初步分离,然后用菌丝生长速率法和带毒平板法分别测定发酵产物对10种植物病原真菌和15种动物致病菌的抑菌活性。结果表明,DBR-12和DBR-23发酵产物乙酸乙酯萃取物对植物病原真菌均有较好的抑菌活性。DBR-12对玉米小斑病菌等6种病原真菌的抑制效果较好,有效中浓度(EC50)为0.010 4~0.079 7 g/L,其中对玉米大斑病菌的毒力最高;DBR-23对除玉米小斑病菌外的9种病原真菌抑制效果较好,EC50为0.020 6~0.174 6 g/L,其中对甘蔗凤梨病菌的毒力最高。DBR-12发酵产物正丁醇萃取物对玉米大斑病菌等5种植物病原真菌的抑制效果较好,EC50为0.107 8~0.646 9 g/L,其中对金橘砂皮病菌的毒力最高。DBR-23发酵产物乙酸乙酯萃取物对痢疾志贺氏菌等12种动物致病菌有抑菌活性,最低抑菌浓度(MIC)为1~2 g/L;DBR-12发酵产物对动物病原菌无抑菌活性。综上,广西地不容内生真菌DBR-12和DBR-23有较好的抑菌活性,在抗菌剂领域有较好的开发应用前景。     

2株昆虫病原线虫共生菌代谢产物的抑菌作用

嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus nematophila YL001(简称YL001)和伯氏致病杆菌Xenorhabdusbovienii YL002(简称YL002)是分别从陕西杨凌土壤中筛选的2株昆虫病原线虫体内分离鉴定获得的共生菌。对这2株昆虫病原线虫共生菌发酵液及其无菌滤液的抑菌作用进行了研究。室内活性测定结果表明,2菌株对供试的14种植物病原真菌和5种病原细菌均有不同程度的抑制作用。其中,YL001发酵液对烟草赤星菌、番茄早疫菌、辣椒疫霉菌、南瓜枯萎菌、黄瓜炭疽菌和稻瘟菌,YL002发酵液对辣椒疫霉菌、黄瓜炭疽菌、稻瘟菌和小麦纹枯菌的抑制率均在75%-100%;无菌滤液仅对辣椒疫霉菌有较强的抑制作用,EC50分别为16.65和15.19 mL/L;YL001和YL002发酵液及其无菌滤液均对水稻白叶枯菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制作用较弱。盆栽试验结果表明,辣椒种子用YL001和YL002发酵液处理后,对辣椒疫霉病的防治效果分别为60.6%和73.2%;100 mL/L发酵液处理土壤后,对辣椒疫霉病的防治效果分别为48.72%和74.34%。     

拟穴青蟹抗菌肽SCY2在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性

为深入研究拟穴青蟹Scylla paramamosain阴离子抗菌肽SCY2的抗菌活性,将抗菌肽SCY2的成熟肽序列与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-SCY2,用电击法将其转化至毕赤酵母GS115菌株中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得目的蛋白,并进行质谱鉴定和抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-SCY2,用0.5%甲醇诱导表达24 h后,分泌表达上清液中获得了相对分子质量约11 000的稳定表达产物,与预期的抗菌肽SCY2成熟肽的大小相符;纯化后的目的蛋白经质谱鉴定,有6个肽段的氨基酸序列与预期一致;抗菌活性结果表明,抗菌肽SCY2能抑制革兰氏阳性菌生长,对被测的革兰氏阴性菌无抑杀活性(50μmol/L);抗菌肽SCY2同抗生素进行协同抗菌试验,发现SCY2与四环素协同使用对荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens的抑杀存在协同作用,SCY2与青霉素协同使用对施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri的抑杀具有增强作用。研究表明,较低浓度的抗生素与抗菌肽协同使用可有效地减少抗生素的使用,降低食品中抗生素的残留风险。     

中华蜜蜂Apidaecin的重组表达及其抗菌活性

【目的】研究中华蜜蜂（Apis cerana cerana）抗菌肽Apidaecin在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中的重组表达,并验证纯化后的重组抗菌肽Apidaecin在体内和体外是否具有抗菌活性,为开发新型、安全具有抗菌和免疫调节功能的抗菌肽制剂提供理论依据。【方法】以意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）Apidaecin为模板,克隆出中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,成功构建his-pHT43/Apidaecin表达载体,并参照MoBiTec所提供的制备方法成功制得枯草芽孢杆菌感受态细胞,现配现用,以保证其活性并得以在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达。使用His标签蛋白纯化试剂盒（可溶性蛋白）进行表达蛋白的分离纯化,使用Easy II Protein Quantitative Kit（BCA）试剂盒测定浓度。纯化得到的重组抗菌肽Apidaecin作用于大肠杆菌K88,在体外进行抑菌圈试验和最小浓度抑菌法测定;在体内,以小鼠为试验动物模型,试验组小鼠腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin,阴性对照组注射相同体积的生理盐水,阳性对照组注射相同体积的头孢霉素,然后人为感染大肠杆菌K88,感染24 h后对小鼠进行解剖,取得肠道样品和血液样品,并从肠道屏障和免疫功能两个方面探讨重组抗菌肽Apidaecin对感染大肠杆菌K88小鼠的保护作用。使用ELISA试剂盒对染菌小鼠血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）与肠道sIgA水平进行测定,采用qRT-PCR法对小鼠肠道紧密连接蛋白基因（claudin-1、ZO-2）以及小鼠肠道细胞因子（促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL6和抑炎因子IL10）的转录水平进行测定。【结果】克隆得到的中华蜜蜂Apidaecin含有183 bp的碱基,编码60个氨基酸,包含Apidaecin的信号肽序列、一个基础的RR二肽以及抗菌肽Apidaecin的氨基酸序列（内含高度保守的8个氨基酸序列）,编码的蛋白质命名为AccApidaecin,其分子量为15.6 kD,等电点为5.33。在IPTG终浓度为3 mmol·L ^-1,诱导温度为30℃,诱导表达12 h后,可从1 L表达上清中纯化得到约20 mg抗菌肽。药敏试验显示,重组抗菌肽Apidaecin在体外与阴性对照相比有明显抑菌圈出现,且测得的最小抑菌浓度为10 mg·L ^-1;在小鼠体内,腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin的染菌试验组与注射生理盐水的染菌试验组相比免疫球蛋白含量差异显著(P<0.05),说明腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin能够有效缓解由大肠杆菌K88引起的小鼠免疫球蛋白含量的增加;同时,小鼠肠道相关蛋白的基因表达量也差异显著(P<0.05),说明重组抗菌肽Apidaecin能够有效保护被大肠杆菌K88侵染的小鼠肠道。【结论】在枯草芽孢杆菌中能够成功重组表达中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,并且纯化后的中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin在体外对大肠杆菌K88有良好的抗菌效果;经腹腔注射进入小鼠体内,能够提高小鼠的免疫机能,有效抵抗大肠杆菌K88对小鼠的侵染。     

八种杀菌剂对橡胶树红根病菌的毒力测定

采用生长速率法,在室内测定8种杀菌剂对橡胶树红根病病原菌Ganoderma pseudoferreum（Wakef.）Over.etsteinm GP-010菌株的毒力。结果表明：参试药剂对橡胶树红根病病原菌均具有较高的敏感性,其中12.5%己唑醇WP对橡胶红根病菌生长的抑制作用最强,其EC50值为0.04 mg/L;25%戊菌唑WP、25%丙环唑EC的抑制作用相对较强,其EC50值分别为0.29和0.32 mg/L,其余依次为75%十三吗啉EC、20%三唑酮EC、12.5%烯唑醇WP、25%咪鲜胺EC及25%腈菌唑EC,EC50值分别为0.46、1.38、1.46、2.39和2.94 mg/L。     

Extracts from Chinese Seabuckthorn Berry Have Antimicrobial Activity in vitro

Chinese seabuckthorn berry contains functional components. The berry was extracted by ethanol-water solution. MTT assay and growth rate method were applied to determine antibacterial ability in vitro of the extract solution. The antibacterial and antifungal assay indicated that the extract exhibited different degree of inhibitory activity. The result showed that the extract at a concentration of 1 250 mg/L had the maximum inhibitory effect against Escherichia coli, Bacillus subtilis, and Staphylococcus aureus. Inhibitory effect against B. subtilis was much larger than that against the other two bacterial species. MIC values(minimum inhibitory concentration) of the extract on three bacterial species were 5 000, 1 250, and 1 000 mg/L respectively. IC_(50)(50% inhibiting concentration) evaluation of Trichoderma viride, Rhizopus stolonifer, Aspergillus niger, Penicillium expansum, and Vintage Red indicated that the berry had the strongest inhibitory effect against P. expansum(5 520 mg/L), while it had the weakest inhibitory effect against R. stolonifer(18 870 mg/L). The results proved that seabuckthorn berry had highly effective and comprehensive antimicrobial function.     

叶下珠3种提取物的抗菌和抗氧化活性

采用甲醇冷浸提取法提取叶下珠次生代谢产物,并依次采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,得到不同极性的提取物,通过TLC–MTT–生物自显影法、菌丝生长速率法和DPPH法测定叶下珠不同提取物的抗细菌、抗真菌和抗氧化活性,采用高效液相色谱(HPLC)分析叶下珠不同提取物中次生代谢产物的分布情况。结果表明：叶下珠乙酸乙酯和正丁醇层提取物均具有较好的抗细菌活性,对木麻黄青枯病菌的抑制活性强于阳性对照硫酸链霉素;叶下珠乙酸乙酯层提取物的抗真菌和抗氧化活性较强,其EC50和IC50分别为(1.02±0.15) mg/mL、(20.14±0.58) ?g/mL;高效液相色谱分析发现,叶下珠乙酸乙酯层提取物中的化合物主要集中在保留时间9~12 min内。叶下珠乙酸乙酯层提取物具有较强的抗细菌、抗真菌和抗氧化活性,可进一步作为活性成分分离和鉴定的候选资源。     

特戊酸柠檬酯对植物病原真菌的抑菌活性

为了测定特戊酸柠檬酯的抑菌活性,采用生长速率和孢子萌发法测定了该物质对6种植物病原真菌的抑制作用,并分析了其对病原菌菌丝和孢子形态的影响。结果表明,该物质对所测6种病原真菌均具有一定的抑制作用,抑制菌丝生长的EC50在338.72～829.20 mg/L之间,其中对辣椒枯萎病菌的抑制作用最强,EC50为338.72 mg/L;抑制孢子萌发的EC50在59.63～131.69 mg/L之间,其中对番茄早疫病菌的抑制率最高,EC50为59.63 mg/L。比较了该物质与多菌灵、甲基托布津对番茄早疫病菌及梨黑斑病菌的抑制作用,结果表明,该化合物抑制2种病菌菌丝生长的EC50虽稍高于甲基托布津,但接近或低于多菌灵。同时经特戊酸柠檬酯处理后的病菌菌丝隔膜不明显,原生质浓缩,菌体扭曲变形、断裂;孢子不能正常萌发,部分畸形,出现疱疹样突起。