三种提取酿酒葡萄不同组织总RNA的方法比较

通过对比改良SDS-酚法、改良CTAB法和改良Trizol法3种RNA提取方法,提取"赤霞珠"(‘Cabernet Sauvignon’)葡萄芽、叶片和果皮RNA的质量及浓度,并进一步分离、纯化得到较高质量的RNA。结果表明:改良SDS-酚法与改良CTAB法适用于芽和叶片的提取,可以获得较好质量、高浓度的总RNA,其28S与18S亮度极高,5S清晰可见,完整性较好;改良Trizol操作环节较少,省时,质量好,条带锐利,可清晰看出28S与18S亮度比为2∶1,虽提取的样品浓度较低,但足以供下一步研究使用。     

改良热硼酸法高效提取苹果果实RNA

苹果果实、尤其是成熟期的果实中多糖和其他次生物质含量高,难以提取RNA。对此,在原热硼酸法的基础上进行了改进,通过添加提取辅助剂并根据辅助剂特性调整提取步骤,高效、稳定地从苹果果实、尤其是后期果实中提取到了高质量的RNA。所得RNA的A260/A230大于2.0,A260/A280为1.8-2.1,并且RNA产量高,其中前期果实RNA产率在13.40μg/g以上,后期果实RNA产率在7.02μg/g以上,完全可以满足RT-PCR、cDNA-AFLP等分子生物学实验的要求。     

3种方法提取辣椒根总RNA的效果比较

针对辣椒根中富含多糖多酚的特点,比较了Trizol法、改良Trizol法和改良CTAB法3种方法对辣椒根总RNA提取的效果。结果表明,Trizol法、改良Trizol法能提取到辣椒根总RNA,但效果不理想;改良CTAB法提取到的辣椒根总RNA,28 S rRNA的亮度是18 S rRNA的2倍,OD260/OD280和OD260/OD230值分别为1.88和1.80,RNA质量浓度为254.0 mg·L-1;用提取到的RNA进行RT-PCR后可扩增出acting基因特异片段。因此改良CTAB法提取辣椒根总RNA的效果好、质量高、完整性好,能够满足后续试验要求。     

核桃不同组织高质量总RNA的提取方法

利用改良CTAB法,分别从富含多糖、多酚及黄酮类物质的核桃叶、绿果、茎、种子和根中成功提取高质量的总RNA。经电泳、紫外分光光度计、RT-PCR和Northern杂交分析,结果显示,各组织的总RNA至少有2条清晰的电泳条带,产量可达174μg/g,A260/A280比值在2.0左右,通过RT-PCR在不同组织中均能扩增出核桃18S基因的cDNA片段,而且以18S基因为探针在不同组织中也分别获得清晰的Northern杂交信号,说明利用此法分离核桃各组织的RNA纯度和浓度完全符合后续分子生物学研究的要求。     

树莓果实总RNA提取方法的比较研究

比较了SDS法和Trizol法提取树莓果实总RNA的效果。结果表明:Trizol法提取的RNA经电泳检测,未见条带,说明Trizol法并不适合富含多糖多酚的树莓。SDS方法提取树莓果实总RNA完整性好,28S和18S条带清晰,OD260/OD280值为1.83,在1.7～2.0之间,OD260/OD230值为2.01。结果证明,SDS法提取的总RNA可直接用于分子克隆等分子生物学实验。     

大蒜不同组织总RNA提取与质量分析

以大蒜幼叶、蒜薹和鳞茎为试验材料,采用3种方法提取大蒜总RNA.通过1.2%非变性甲醛凝胶电泳和紫外分光光度计检测提取RNA质量.结果表明:3种方法能够从3个不同的组织中提取完整性较高的总RNA,但从蒜薹和鳞茎中提取的总RNA的纯度不高,可能是因为这2种组织中含有大量多糖或其它代谢产物.从叶片中提取的总RNA质量较好,产率较高,提取大蒜叶片总RNA的效果最好.     

简便高质量的食用菌总RNA提取方法

STE法是针对食用菌多糖含量高而设计的一种提取食用菌总RNA的有效方法。本研究以灵芝、香菇和白腐真菌TR16菌株的菌丝体为材料，采用STE法提取其总RNA，同时以Trizol法作对照。结果表明：采用STE法提取的三种菌丝的总RNAA260／A280比值在1．80～2．10范围内，A260／A230略大于2．00；而Trizol法提取的总RNAA260／A280比值小于1．80，A260／A230小于1．90，明显比STE法效果差；总RNA电泳检测表明：STE法的3条带（28S rRNA、18SrRNA和5SrRNA）清晰，无拖尾，无杂带，效果比Trizol法好；将STE法提取的总RNA进行反转录后合成双链cDNA，进行预扩增，电泳显示呈弥散状；再进行选择性扩增，有相同或相异的条带。进一步表明STE法提取的总RNA质量较高，可以满足后续分子生物学研究的要求。     

辣椒组织总RNA提取方法研究

从RNA的完整性、纯度和产量等方面比较了3种RNA提取试剂对辣椒不同组织部位RNA的提取效果。结果表明,RNAplant能从成熟组织中获得较高质量和产量的RNA,用该方法提取的辣椒老化组织RNA经RT-PCR能成功进行内参检测。     

罗布麻总RNA提取方法比较研究

以Trizol法、改进SDS法及RNA plant plus Reagent试剂盒法提取罗布麻的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行比较分析,以筛选出罗布麻总RNA最佳提取方法。结果表明:Trizol法无法有效获得罗布麻总RNA,有较为显著的降解现象;改进SDS法提取的罗布麻RNA总量较少、浓度低,且试验重复性差;RNA plant plus Reagent试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接作为后续相关分子生物学试验材料。     

4种冬虫夏草总RNA提取方法的比较

以冬虫夏草新鲜子实体为材料,分别采用SDS抽提法、TRIzol法、CTAB-LiCl法和DEPC水法4种方法进行总RNA的提取试验,并对其进行了紫外及变性琼脂糖凝胶电泳检测。检测结果表明,4种提取方法中DEPC水法提取的总RNA质量最好,SDS抽提法次之,CTAB-LiCl法和TRIzol法效果最差。从RNA质量、操作难度、经济与否等方面综合分析,DEPC水法是较为理想的提取冬虫夏草新鲜子实体总RNA的方法。     

高质量枣基因组DNA提取方法

主要针对枣组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明:常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质;TE3D法提取的DNA多糖杂质少,但产率低,易降解,褐化严重;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,D260nm/D280nm比值1.80左右,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了具体分析讨论。     

枇杷果实总RNA的提取及八氢番茄红素合成酶基因(PSY)片段的克隆

【目的】为从枇杷果实中提取高质量的RNA,【方法】以枇杷果实为材料,对6种总RNA提取方法进行分析和比较。【结果】结果表明,在裂解前先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的总RNA质量较好,OD260/OD280在1.8～2.2,OD260/OD230超过2.0,得率分别为幼果果皮56.78μg.g-1,幼果果肉40.62μg.g-1,成熟果果皮40.86μg.g-1,成熟果果肉9.24μg.g-1;并根据其他植物的八氢番茄红素合成酶基因(PSY)保守区设计引物,用以上方法提取的RNA为模板进行RT-PCR,得到453 bp的基因片段,其推导的氨基酸序列与其他植物的同源性高达95%,推测该片段为PSY基因。【结论】先用70%丙酮和80%乙醇分别对枇杷果皮和果肉进行预处理,再结合CTAB-LiCl法,得到的RNA质量好,可用于后续的分子生物学研究。     

田间苹果成熟组织RNA高效提取方法

针对田间苹果成熟组织富含多酚、多糖和大量次生代谢产物的特点,建立了适合田间苹果不同组织的高效RNA提取方法,以不同季节田间生长的苹果叶片和皮层为材料,用此方法均能在2 h左右完成超过10个样品的总RNA提取,质量高、完整性好的总RNA,可用于田间苹果病毒RT-PCR检测,获得良好效果.经反复大量试验证实,该方法适合田间...     

云南沃柑二次开花的果实品质分析

[目的]沃柑是我国面积最大的晚熟柑橘品种,除正常春季开花结果在翌年1-3月成熟外(第一次开花结果),常有较多夏季花,所结果实在翌年6-7月成熟(第二次开花结果).为此,系统研究沃柑夏花果品质并与春花果比较,以综合评价夏花果质量,为夏花果的利用提供参考.[方法]以云南2种典型气候区的4个果园的沃柑为材料,对春花果和夏花果...     

不同着色期荔枝果皮总RNA的提取及mRNA差显分析

以妃子笑和糯米糍2个主栽荔枝品种不同着色期的果皮为试材,经过大量的对比和筛选,采用改良Bugos法提取果皮中的总RNA,经核酸蛋白测定仪测定和凝胶电泳显示提取的总RNA完整性强,质量好,产率高(最高可达318.7μg/g),可用于RT-PCR等分子生物学实验。进一步的DDRT-PCR分析表明:高分辨力的cDNA片段在500～2 000 bp之间,不同品种、不同着色期的荔枝果皮,基因表达有较大差异。     

果蔬采后叶绿素降解与品质变化的关系

介绍了叶绿素降解的研究进展、果蔬采后叶绿素降解与品质变化的关系、影响果蔬采后叶绿素降解的因素以及相关采后贮藏技术措施。相对于叶绿素的合成,叶绿素降解的研究进展要缓慢得多。目前认为,叶绿素在绿色植物和成熟果实中的降解,至少有2条途径。一是包括叶绿素酶等在内的“PaO”途径降解;另一条是由一系列的氧化酶作用的叶绿素“漂白”过程。在果实以及蔬菜的采后贮藏中,有许多因素影响着叶绿素的降解,如温度、气体条件、植物激素等。在广泛研究了叶绿素降解影响因素的基础上,根据果实的采后生理特点以及市场对产品的要求,研究出了如热处理、气调控制、药物处理等技术,从而有效地控制了果蔬采后叶绿素的降解,以满足市场与消费者的要求,同时也为更多技术的出现奠定了基础。     

苹果叶片总蛋白提取及其双向电泳分析

蛋白质提取方法和电泳条件的建立是蛋白质组学研究中双向电泳分析的关键。通过比较不同提取方法,包括酚/SDS抽提、TCA-丙酮沉淀法、甲醇/醋酸铵沉淀法以及改良HB-酚抽提方法。此外,还优化了样品上样量、等电聚焦程序设置等条件。从所得2-D图谱分离效果来看,改良HB-酚抽提方法所得蛋白点数最多,2-D图谱背景清晰、分离效果好,明显优于其他3种方法。300μg上样量可作为苹果叶片总蛋白2-DE分析的理想的上样量,同时优化了等电聚焦程序,最终得到的2-D图谱分离效果较为理想。该研究的开展也为苹果叶片蛋白质组学后续研究奠定了基础。