山西壶瓶枣缩果病病原菌分离和鉴定

 2005~2008年山西壶瓶枣缩果病害发生严重,造成了巨大的经济损失。本文利用真菌ITSrDNA和细菌16S rDNA基因的通用引物,分别对分离自山西晋中的罹病壶瓶枣果实表面寄生真菌和细菌基因组DNA进行PCR扩增,将扩增产物进行核苷酸序列测定,在GenBank数据库进行Megablast同源性分析,确定壶瓶枣果实的主要寄生菌是细极链格孢菌(Alternaria alternata)、白囊耙齿菌(Irpex lacteus)、青霉菌(Penicillium expansum)、芽枝孢菌(Cladosporium tenuissimum)4种真菌和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)4种细菌。回接试验证明链格孢菌、青霉菌、芽枝孢菌是壶瓶枣果实主要的致病真菌,而所分离的细菌没有致病性。     

Alternaria alternata菌丝细胞壁凝集素的纯化与特性研究

 Alternaria alternata是接触性活体营养菌寄生真菌纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum的寄主真菌之一,该寄生过程中菌寄生真菌与寄主真菌的识别机制未见报道。本文分离、纯化了A.alternata菌丝细胞壁上的一种参与识别作用的特异性蛋白——凝集素,并对其特性以及在菌寄生过程中的作用做了初步研究,粗提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析和SephacrylS 100分子筛层析等步骤便可获得凝胶电泳均一的凝集素AAL,经凝胶过滤层析法测得分子量为37.2kDa,经糖染色鉴定为一种糖蛋白。孢子凝集试验表明,AAL对O.tenellum的孢子具有极强的凝集力,在含量为3 325μg/mL时,30min内90%的O.tenellum孢子发生凝集作用,对照(不含AAL的缓冲液)凝集力则显著下降。上述结果说明AAL在A.alternata细胞壁蛋白抽提液和O.tenellum的孢子吸附中扮演着重要角色,可能起识别因子的作用。     

甜瓜种子携带的链格孢菌种类鉴定及其致病性研究

 采用洗涤检验法和马铃薯葡萄糖琼脂培养基法,从甜瓜种子上分离得到14个链格孢菌分离物。通过菌落形态、产孢表型、分生孢子以及分生孢子梗等形态学观察,结合分析ITS-rDNA和histone 3基因序列,对链格孢菌分离物的种类进行鉴定;甜瓜种子携带的链格孢菌种类分别为细极链格孢(Alternaria tenuissima)、交链格孢(A. alternata)和倒果链格孢(A. obovoidea)。还研究了这些链格孢菌分离物对甜瓜离体叶片的致病性及其对种子发芽的影响;结果表明,除A. obovoidea外,另外两种链格孢菌均对甜瓜离体叶片具有致病性;A. tenuissima和A. alternata的孢子悬浮液对甜瓜种子发芽均有一定的抑制作用。这是国内首次围绕甜瓜种子传带链格孢菌的种类及其致病性开展详细的研究。     

甜瓜种子携带的链格孢菌种类鉴定及其致病性研究

 采用洗涤检验法和马铃薯葡萄糖琼脂培养基法,从甜瓜种子上分离得到14个链格孢菌分离物。通过菌落形态、产孢表型、分生孢子以及分生孢子梗等形态学观察,结合分析ITS-rDNA和histone 3基因序列,对链格孢菌分离物的种类进行鉴定;甜瓜种子携带的链格孢菌种类分别为细极链格孢(Alternaria tenuissima)、交链格孢(A. alternata)和倒果链格孢(A. obovoidea)。还研究了这些链格孢菌分离物对甜瓜离体叶片的致病性及其对种子发芽的影响;结果表明,除A. obovoidea外,另外两种链格孢菌均对甜瓜离体叶片具有致病性;A. tenuissima和A. alternata的孢子悬浮液对甜瓜种子发芽均有一定的抑制作用。这是国内首次围绕甜瓜种子传带链格孢菌的种类及其致病性开展详细的研究。     

枣铁皮病病原鉴定

 枣铁皮病主要为害大枣果实,可导致果实腐烂和提早落果,据症状特点可分为铁皮型和缩果型2种类型。1993~1995年对河北和河南2省6个不同枣区大枣铁皮病病果进行分离、接种和再分离,证实枣铁皮病病原为:链格孢Alternaria alternata(Fr.) Keissler;实腐茎点霉Phoma destructiva Plowr,壳梭孢属一种真菌Fusicoccum sp.3种病原真菌可以单独或混合侵染。     

不同栽培方式对辣椒采后病害的影响

 比较了覆膜栽培与露地栽培对辣椒潜伏侵染病原菌种类及其在辣椒果实不同部位的分布,辣椒采后果实发病率,采后病害病原菌种类的影响。试验结果证明:覆膜栽培辣椒采前潜伏侵染带菌率比露地栽培降低了7.7倍;辣椒采前潜伏侵染菌在果柄、果蒂、果肉中均有分布,但以果蒂带菌率最高,发病率也以果蒂最高;辣椒贮前表面消毒可以显著降低辣椒采后病害的发生率;辣椒采后病害的病原菌有5种,即镰刀菌(Fusarium Link et Fr.)、交链孢菌(Alternaria alternata)、盘长孢状刺盘孢菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)、蔬菜软腐病菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora)和黄曲霉菌(Aspergillus flavus Link),其中主要病原菌为镰刀菌(Fusarium Link et Fr.)、盘长孢状刺盘孢菌(C.gloesporioides)和蔬菜软腐病菌(E.carotovora subsp.carotovora)。具有潜伏浸染特性的只有A.alternata、E.c.subsp.carotovora和C.gloeosporioides。     

辣椒炭疽病菌对嘧菌酯的敏感性测定

 从江苏和海南省随机采集分离获得45个辣椒炭疽病菌单孢菌株,根据孢子形态鉴定其病原菌为Colletotrichum gloeosporioides和C.capsici,其中C.gloeosporioides占总菌株数的64.4%.筛选出甘油琼脂(AEA)培养基和水琼脂(WA)培养基,分别作为产孢法和孢子萌发法测定辣椒炭疽病菌对嘧菌酯敏感性的适宜培养基.通过孢子萌发法测定2种病原菌45个菌株对嘧菌酯的敏感性范围在0.009~0.091μg/mL之间,平均EC₅₀为(0.047±0.040)μg/mL.其中29个C.gloeosporioides菌株和16个C.capsici菌株的平均EC₅₀值分别为(0.051±0.047)μg/mL和(0.041±0.024)μg/mL.研究发现旁路氧化酶抑制剂水杨肟酸(SHAM)对嘧菌酯抑制分生孢子萌发有协同增效作用,且嘧菌酯抑制辣椒炭疽病菌菌丝生长的能力较弱.     

立枯丝核菌重寄生真菌的筛选

 从捕食线虫的真菌中筛选到立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的8种重寄生真菌,即粉红粘帚霉(Gliocladium roseum),少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora),弯孢节丛孢(A.musiformis),贵州节丛孢(A.guizhouense),圆锥节丛孢(A.conoides),指状节丛孢(A.dactyloides),多孢节丛孢(A.superba),蠕虫状节丛孢(A.vermicola)。平板测试表明这8种重寄生菌能不同程度地影响立枯丝核菌的生长,减少菌核的形成数量。其中粉红粘帚霉的寄生力最强,可使菌核数减少58.67%,交叉菌落内几乎所有的立枯丝核菌菌丝被寄生。营养条件对重寄生有明显的影响,在低营养培养基CMA和WA上寄生程度严重,在营养相对较高的PDA和CSA上寄生程度较轻。太高的C:N (300:1)和太低的C:N (1:1,10:1)都不利于重寄生,只有适当的C:N (50:1,100:1)才有利于重寄生     

河南省小麦黑胚病优势病原菌链格孢菌(Alternaria spp.)遗传多样性分析

 采用RAPD技术对分离自河南省各地的43株小麦黑胚病优势病原菌(Alternaria spp.)菌株进行了遗传多样性分析。17个随机引物共扩增出151条清晰的DNA条带,所扩增出的DNA条带均为多态带,说明河南省小麦黑胚病菌存在着丰富的遗传多样性。利用NTSYS软件进行了病原菌的聚类分析,结果表明,河南省小麦黑胚病菌主要有2个种,即Alternaria alternata和A. tenuissima,种间的遗传相似系数的变化幅度为0.62~0.92。来自同一个地区的小麦黑胚病菌菌株基本上聚在了一起,表现出很近的亲缘关系,来自不同地区之间的菌株也可以交叉聚类。病原菌遗传多样性分析进一步验证了形态学的鉴定结果。     

广西水稻上嗜水小核菌的鉴定及系统发育研究

 从类似纹枯病的水稻病株上分离到一种在菌核形态上与纹枯病菌(Rhizoctonia solani)有明显差异的真菌,致病性测定结果表明该菌能侵染水稻、玉米和大豆。对该菌的显微形态、生物学特性以及核糖体DNA-ITS序列进行研究,结果表明该菌为嗜水小核菌(Sclerotium hydrophilum Sacc.)。病菌在30℃、pH为6~9条件下生长表现最佳,属硫胺素自养型菌;营养菌丝与立枯丝核菌相似,菌核球形或椭圆形,数量极多,其平均大小仅为386.4μm×420.7μm;该菌的核糖体DNA-ITS序列与GenBank中唯一一个嗜水小核菌(登录号为DQ875597)的同源性为99.5%,并且与大多数丝核菌(Rhizoctonia spp.)也有一定的同源性,病菌的28S rDNA-RFLP分析结果进一步说明了该菌在系统发育上与丝核菌类真菌具有较高的同源性。通过比较该菌和几种与水稻纹枯病相关丝核菌核糖体DNA-ITS序列的差异,设计了一对特异性引物PS-1和PS-2,能专一地从被该菌侵染的水稻感病组织中扩增出一段约550bp的DNA。     

山东省危害核桃的链格孢属真菌鉴定及其系统发育

为了明确危害核桃的链格孢属Alternaria真菌种类,对34个供试菌株在PCA培养基上的培养特征、产孢表型、分生孢子特征等进行了研究,并采用ITS、OPA2-1和OPA1-3序列分析其系统发育。其中33个菌株为链格孢A.alternata,1个为细极链格孢A.tenuissima。链格孢:菌落灰色;孢子链短、分枝频繁,每条分枝含4～10个孢子;分生孢子多倒梨形,孢身平均25.6μm×7.4μm,横隔膜2～8个。细极链格孢:菌落褐色;孢子链长、少分枝,孢子链约含10个孢子;分生孢子多长椭圆形,孢身平均26.3μm×13.5μm,具柱状喙及假喙,主横隔膜1～6个,孢身中部的隔膜较粗。链格孢属真菌在遗传上有较大差异,ITS、OPA2-1和OPA1-3序列对链格孢小孢子种具有一定的区分作用,链格孢是危害核桃的主要链格孢属种。     

洛阳牡丹新病害—柱枝孢叶斑病

为了明确河南省洛阳地区牡丹叶部一种新病害的病原种类,对采自田间的典型症状叶片进行了常规组织分离,对单孢菌株进行了形态鉴定、rDNA ITS序列分析及致病性测定.结果表明,病原菌在PDA培养基上菌落初期白色绒毛状,后期红褐色.分生孢子梗通常呈扫帚状,有2～3个分支,末端膨大呈泡囊状.分生孢子直棒状,两端钝圆,有0～1个隔膜,大小为(38.4～86.4)μm× (4.6～5.9)μm,平均60.1 μm×5.2 μm.离体叶片与活体植株接种结果表明,该菌均能侵染牡丹叶片并引起与田间相同的症状.据此将分离物鉴定为Cylindrocladium canadense,将该病害命名为牡丹柱枝孢叶斑病.     

欧李褐腐病病原菌鉴定

欧李[ Cerasus humilis( Bge.) Sok.]为蔷薇科樱桃属果树,别名钙果,原产中国,分布于我国的黑龙江、辽宁、内蒙古、河北、山东、山西等省区.多生长在向阳山坡或沙丘边缘,资源相当丰富.欧李株高0.3～1.5m,多为0.5～0.7m左右,是目前世界上最矮小的木本果树.果实可鲜食或加工,含糖、蛋白质、维生素C,特别是矿质元素铁和钙的含量很高,每100果肉干分别含有58和360 mg种仁可作药用,中药称之为"郁李仁"可消毒化肿.     

贵州省余庆县茶褐枯病病原菌的鉴定

为鉴定引起茶褐枯病的病原菌,本研究对病原菌进行分离、纯化和培养,通过柯赫氏法则验证菌株的致病性,并观察病原菌的形态特征,依据病原菌rDNA-ITS、ACT、CAL和TUB2基因进行多基因系统发育分析。结果显示:病原菌分生孢子呈淡蓝色,表面光滑,无隔膜,圆柱状,两端钝或向底部变窄,水滴状斑点,大小为(11.7~29.5)μm×(3.9~7.7)μm,平均为(19.4±4.4)μm×(5.4±0.8)μm,分生孢子梗形成于气生菌丝上,透明,具有隔膜;附着胞为棒状等不规则形状,颜色呈棕色到深棕色,单生。基于病原菌形态学鉴定和多基因系统发育分析结果,将病原菌确定为山茶刺盘孢Colletotrichum camelliae。     

北京地区桃黑斑病新症状的发现与诊断

2019年-2020年在北京地区桃园病害调研普查时发现一种桃树病害的新发症状-新叶坏死,主要症状表现为当年新生枝条顶端新叶和生长点腐烂坏死。为明确这种新叶坏死症状是否由病原菌侵染引起,从北京平谷2个乡镇3个桃园采集35份病梢样品,经病样组织分离和菌株纯化,选取12个代表性菌株进行形态学鉴定、系统进化分析以及致病性测定。结果显示,通过形态学鉴定和多基因(ITS,Alt a1,gpd)系统发育分析,以上分离株均鉴定为链格孢Alternaria alternata;3株代表性菌株的致病性测定验证了A.alternata是引起新叶坏死症状的病原菌,并且该病原菌也能导致桃枝条和果实发病,产生黑斑病症状。这是首次报道A.alternata除了引起桃果实黑斑症状之外,还可以引起桃树新叶坏死症状,结果进一步丰富了链格孢侵染桃树的症状多样性,为链格孢引起的病害的整体防控提供了理论基础。     

Resistance of Gibberellin-Treated Persimmon Fruit to Alternaria alternata Arises from the Reduced Ability of the Fungus to Produce Endo-1,4-beta-Glucanase

ABSTRACT Black-spot symptoms, caused by Alternaria alternata, developed in persimmon fruits during prolonged storage at -1 degrees C. A preharvest treatment with gibberellic acid (GA(3)) extended the storage life of the fruit by delaying both black-spot development and fruit softening. Conversely, treatment of persimmon fruits with paclobutrazol (PBZ), an inhibitor of gibberellin (GA) synthesis, enhanced black-spot development and fruit softening during storage. Production of endo-1,4-beta-glucanase (EC 3.2.1.4, EG) by A. alternata in culture and in the presence of cell walls from PBZ-treated fruits as the carbon source, was enhanced by 150% over production in the presence of cell walls from control fruits, whereas endoglucanase (EG) production in the presence of cell walls from GA(3)-treated fruits was reduced by 49% relative to controls. To determine the importance of EG in symptom development, A. alternata EG was purified from a culture-inducing medium. It had a molecular mass of 41 kDa, its optimal pH and temperature for activity were 5.5 and 47 degrees C, respectively, and the pI was 4.3. Its K(m) and V(max) were 0.43 mg ml(-1) and 18 mumol reducing groups minute per milligrams of protein, respectively. The internal sequence of a 21-mer amino acid peptide from the purified EG showed 62% similarity and 38% identity to the EG-1 of Trichoderma reesei and of T. longibrachiatum. Purified EG induced black-spot symptoms on the fruit, similar to those caused by A. alternata, whereas boiled enzyme caused only pricking signs. Our results suggest that the black-spot symptoms caused by A. alternata, in persimmon, are related to the ability of the fungus to produce EG in developing lesions.     

中国柑橘黑腐病和褐斑病病原菌的系统发育分析

 近些年链格孢属真菌的分类有了长足的进展,但柑橘褐斑病和黑腐病的病原却还是存在着一些争议。本研究从中国柑橘果实上收集了49株黑腐病菌菌株,并选取了8株从柑橘叶片上分离的具代表性的褐斑病菌菌株,基于Alta1 、endoPG、LSU、OPA10-2、OPAl-3和OPA2-1 等6个基因位点串联序列构建系统发育树。结果表明,柑橘黑腐病和褐斑病都可由不止一种链格孢菌引起,均以Alternaria alternata为主。两种病害的病原菌之间不能通过该系统发育树区分,但在致病性上存在差异,且能通过扩增ACT毒素合成基因进行区分。为了使两种病害的病原更加方便阐述,作者建议以它们的主要类群对其进行命名,柑橘褐斑病病原学名还是遵循前人的称呼,为the tangerine pathotype of A. alternata,即链格孢菌橘致病型,而柑橘黑腐病病原应为A. alternata,即链格孢菌。     

中国柑橘黑腐病和褐斑病病原菌的系统发育分析

 近些年链格孢属真菌的分类有了长足的进展,但柑橘褐斑病和黑腐病的病原却还是存在着一些争议。本研究从中国柑橘果实上收集了49株黑腐病菌菌株,并选取了8株从柑橘叶片上分离的具代表性的褐斑病菌菌株,基于Alta1 、endoPG、LSU、OPA10-2、OPAl-3和OPA2-1 等6个基因位点串联序列构建系统发育树。结果表明,柑橘黑腐病和褐斑病都可由不止一种链格孢菌引起,均以Alternaria alternata为主。两种病害的病原菌之间不能通过该系统发育树区分,但在致病性上存在差异,且能通过扩增ACT毒素合成基因进行区分。为了使两种病害的病原更加方便阐述,作者建议以它们的主要类群对其进行命名,柑橘褐斑病病原学名还是遵循前人的称呼,为the tangerine pathotype of A. alternata,即链格孢菌橘致病型,而柑橘黑腐病病原应为A. alternata,即链格孢菌。     

瘿蚊科3种昆虫核糖体DNA的克隆及序列分析

瘿蚊科是双翅目昆虫中的重要类群?本研究对瘿蚊科3种昆虫—麦红吸浆虫?菊花瘿蚊和食蚜瘿蚊的核糖体DNA进行PCR扩增?克隆?测序及序列分析, 并对ITS-1在麦红吸浆虫4个地理种群中的遗传变异情况进行分析?结果表明, 从3种昆虫中获得的核糖体DNA序列包括:部分的18S rDNA(44 bp)?28S rDNA(37 bp), 全部的ITS-1(487~535 bp), 5.8S rDNA(121 bp)及ITS-2(336~352 bp)序列?3种昆虫ITS序列的碱基差异百分比在17.21%~29.59%之间, 共含有206个变异位点?ITS-1序列在麦红吸浆虫4个地理种群中比较保守, 只有4个变异位点, 单倍型多样性为0.311 7~0.796 5, 核苷酸多样性为0.000 6~0.002 2?本研究为今后瘿蚊科昆虫的分类鉴定?系统发育和遗传进化等相关研究提供了基础?     

新疆首次报道轮枝镰孢菌引起骏枣果实黑点病

Black spot disease was found on fruits of Jun jujube in Hetian area, Xinjiang, in June,2010. The typical spots on fruits were round or suborbicular, concave slightly,dark brown and the diameter was about 4 mm. The colony grew fast with irregular edge on PSA medium, while relatively slow with smooth edge on PDA medium. The colonies were white at the early stage, slightly pink finally and flocculent on the both culture medium. The conidia arranged chain shape and the spore chain was basipetal. The rDNA ITS sequence,cyt b gene sequence and EF-1α gene sequence were amplified and analyzed. The result showed that the homology was above 99% between the isolate and Fusarium verticillioides strains based on the three DNA sequences. By morphology combining with molecular biology techniques,the pathogen of Jun jujube black spot disease was identified as F. verticillioides. It is the first report on jujube disease caused by F. verticillioides in the world.